液质联用法测定鸡肉中9种激素类药物的基质效应研究

代春梅，李卿沛 ，焦绍明，徐尚喜

（金昌市农产品质量安全检测中心，甘肃 金昌 737100）

基质效应是指在样品测试过程中，待测物以外的其他物质对待测物响应值的影响，基质效应直接影响分析方法的准确度[1-2]。液质联用分析中用以评价基质效应的方法一般有柱后注入法和提取后添加法两种，而提取后添加法可以实现基质效应的量化评价，广泛应用于方法验证过程[3-4]。本文研究了液质联用法测定鸡肉中9种激素类药物的基质效应，为分析方法检测结果的准确性提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

Agilent1290-G6460C三重四级杆液质联用仪（Agilent公司）；23R高速冷冻离心机（力康公司）；IKA RV10旋转蒸发仪（艾卡公司）；IKA VXR涡旋振荡器（艾卡公司）；Smart-N30VF超纯水机（力康公司）；Agilent Bond Elut C18固相萃取柱（500 mg/3ml，Agilent公司）。

1.2 试剂

9种激素类药物标准品：地塞米松（100μg/ml），中国农业农村部环境保护科研监测所；乙酸甲地孕酮（1000μg/ml），天津阿尔塔科技有限公司；甲基睾酮（50mg）、乙酸氯地孕酮（50mg）、可的松（250mg）、甲基泼尼松龙（250mg）、诺龙（100mg）、诀诺酮（100mg）、孕酮（50mg），Stanford Chemicals。甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯），美国Fisher公司。市售鸡肉样品。

1.3 方法

1.3.1 样品前处理 准确称取鸡肉样品2 g于50 ml离心管中，加入10 ml乙腈，涡旋振荡5 min，超声提取10 min，10 000 r/min离心10 min，取上清液至鸡心瓶，重复提取一次，合并上清液于鸡心瓶中，40℃负压旋蒸至干，加入5ml 30%甲醇水溶液溶解残余物，待净化。

C18固相萃取柱预依次用3ml甲醇、3ml水活化，上述待净化溶液全部过柱，用2ml 30%甲醇水溶液淋洗小柱，抽干后使用3ml 90%甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液于40℃下氮气吹干，加入1ml 50%甲醇水溶液溶解，过0.22μm微孔尼龙滤膜后待检测。

1.3.2 标准溶液的制备 取9种激素类药物标准品用甲醇配制成10 mg/L的混合标准贮备液，于-18℃冰箱中保存。取1 ml标准储备液用甲醇定容至10 ml，配制成浓度为1 mg/L的标准中间液，再取2ml标准中间液用甲醇定容至10ml，配制成200 μg/L的标准工作液，然后用甲醇逐级稀释，得到100 μg/L、50 μg/L、20 μg/L、10 μg/L、5 μg/L的标准系列溶液。

1.3.3 基质匹配标准溶液的制备 取空白鸡肉样品作基质，按照前处理步骤制备基质溶液。取9种激素类药物1mg/L的标准中间液，用空白基质溶液配置成200μg/L的基质标准工作液，然后用空白基质溶液逐级稀释，得到100 μg/L、50 μg/L、20 μg/L、10 μg/L、5 μg/L的基质匹配标准系列溶液。基质匹配标准溶液现用现配。

1.4 测定

1.4.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SBC18色谱柱（2.1mm×100mm，1.8μm）；柱温：35℃；进样量：2μL；流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.25 ml/min；梯度洗脱：0 min 10%B，2 min 40%B，4 min 60%B，6 min 85%B，7 min100%B，9 min 10%B。

1.4.2 质谱条件 采用正离子模式多反应监测，9种激素类药物保留时间、定性离子、定量离子、传输电压、碰撞电压等质谱条件参数见表1。

2 结果

2.1 绝对基质效应

一般认为基质标准品峰面积和溶剂标准品峰面积的比为绝对基质效应因子（MEF），MEF小于1表示基质抑制效应，MEF等于1表示无基质效应，MEF大于1表示机制增强效应[2,5-6]。

将配制好的200 μg/L、100 μg/L、50μg/L、20 μg/L、10 μg/L、5 μg/L的标准溶液和基质匹配标准溶液分别上机测定其峰面积，每个浓度重复测6次。鸡肉中9种激素类药物的绝对基质效应因子见表2。可以看出9种化合物在鸡肉基质中的基质效应表现各不相同，甲基泼尼松龙、地塞米松整体表现为基质增强效应，乙酸氯地孕酮、乙酸甲地孕酮整体表现为基质抑制效应，其他化合物基质效应因子在0.85～1.15之间，基质效应表现不明显[3]。

表1 9种激素类药物质谱条件参数

表2 鸡肉中9种激素类药物的绝对基质效应因子

表3 鸡肉中9种激素类药物不同添加量测定结果

2.2 不同校准方法测定结果

在空白鸡肉样品中添加50 μg/kg、20 μg/kg、10 μg/kg混合标准溶液，经前处理后重复测试6次，用标准曲线和基质匹配标准曲线分别进行定量校准，测定结果见表3。用标准曲线校准的回收率为27.57%～133.53%，其中乙酸氯地孕酮回收率仅为30%左右。用基质匹配标准曲线校准的回收率为73.98%～116.42%，其中乙酸氯地孕酮回收率提高到70%以上。

3 结论

使用液质联用法测定鸡肉中9种激素类药物，甲基泼尼松龙、地塞米松在鸡肉基质中表现为基质增强效应，乙酸氯地孕酮、乙酸甲地孕酮表现为基质抑制效应，对其他化合物基质效应表现不明显。因此在使用此分析方法时，需采用基质匹配标准溶液的方法降低基质效应的影响，以保证检测结果的准确性。

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