外周血裂隙淋巴细胞计数对百日咳诊断价值的研究

伍金倩 ，黄道连 ，崔经和 ，高瑞琳 ，童辉纯 ，邓坤仪

（中山火炬开发区医院1.检验科；2.儿科，广东 中山 528437；3.南方医科大学附属中山市博爱医院检验科，广东 中山 528400）

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种传染性极强的呼吸道传染病，其临床表现可因年龄而有所不同[1]，典型的临床表现为阵发性痉挛性咳嗽，咳嗽终末伴有鸡鸣样、吸气性吼声[2]。 据相关报道，近年来我国百日咳发病率有上升趋势[3]，局部地区出现暴发流行，主要感染对象为 1 岁内的婴幼儿[4，5]，0～3月龄的婴儿由于免疫功能差，易并发重症肺炎、呼吸衰竭、肺实变和百日咳脑病等严重并发症危及生命[6]。 目前百日咳的实验室检测手段主要有血清学检查、PCR 法和百日咳杆菌培养。 近年来相继有学者在百日咳患儿外周血中发现细胞质缺乏、染色质凝集、有裂隙的成熟小淋巴细胞-裂隙淋巴细胞[7，8]。Meng Qing-hong 等[9]在给小鼠注射百日咳毒素后，小鼠外周血涂片、骨髓及脾脏涂片中观察到有裂隙淋巴细胞的产生。 这就提示我们裂隙淋巴细胞有可能成为诊断百日咳的一个特异性指标。 本文主要通过比较百日咳确诊组与非百日咳组外周血裂隙淋巴细胞计数结果，同时联合白细胞数、淋巴细胞比例等指标，探讨外周血涂片裂隙淋巴细胞对诊断百日咳的实用价值。

1 资料与方法

1.1 一般临床资料 收集2019 年1 月-2019 年10月在中山市中山火炬开发区医院和中山市博爱医院就诊的病例共89 例为实验对象，其中符合百日咳诊断标准的患儿37 例设为实验组（男性23 例，女性 14 例；＜1 岁 32 例，＞1 岁 5 例），随机选取的非百日咳患儿52 例设为对照组（男性38 例，女性14例；＜1 岁 39 例，＞1 岁 13 例）。

1.2 试剂与仪器 白细胞分类计数仪为迈瑞全自动血液分析仪；试剂为迈瑞公司生产；外周血涂片染色液为珠海贝索生物技术有限公司生产。

1.3 检验方法

1.3.1 外周静脉血检测 抽取入选患儿静脉血2ml于EDTA-K2 抗凝管中，白细胞分类计数严格按照迈瑞血液分析仪操作说明进行测试;外周血涂片操作按照《全国临床检验操作规程》[10]，计算100 个成熟淋巴细胞中裂隙淋巴细胞所占比例。

1.3.2 百日咳杆菌核酸检测 采用美国疾病预防控制中心推荐方法[11]采集患儿鼻咽拭子标本，送广州金域医学检验中心进行检测。

1.4 质量与控制 两家单位的血常规分类与计数结果均参加且通过卫生部室间质评， 并每天执行室内质控，实验结果具有可比性；外周血涂片裂隙淋巴细胞由固定人员进行计数。

1.5 百日咳诊断标准 根据世界卫生组织（WHO）2003[12]诊断标准，百日咳确诊依据为：⑴没有其他明显原因的咳嗽≥2 周，并具有≥1 个下列症状：阵发性咳嗽，或吸气性回声，或咳嗽后呕吐；⑵实验室分离出百日咳杆菌， 或PCR 方法检测到核酸序列，或双份血清学检测阳性。

1.6 统计学处理 所有数据采用SPSS 20.0 统计软件进行分析处理， 计量资料以均数±标准差表示，计数资料以百分率表示。 两组间计量资料比较采用Mann-Whitney U 检验，阳性率的比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 百日咳组与非百日咳组裂隙淋巴细胞数、白细胞总数及淋巴细胞比例差异 百日咳组裂隙淋巴细胞计数、 白细胞数及淋巴细胞比例的均数分别为 6.27±0.70 %、27.90±2.65×109/L 和 71.35±2.03%，均高于非百日咳组 2.81±0.23 %、11.81±0.73×109/L和65.42±1.84%，根据Mann-Whitney U 检验分析，差异均有统计学意义。 见表1。

表1 百日咳组与非百日咳组裂隙淋巴细胞数、白细胞数及淋巴细胞比例的均值比较

2.2 百日咳组与非百日咳组裂隙淋巴细胞阳性率差异 若设裂隙淋巴细胞计数≥4%为检出阳性，则在37 例百日咳确诊病例中阳性例数为22 例，阳性率为59.5%，明显高于非百日咳5.8%，阳性率差异具有统计学意义（χ2=30.851，P＜0.05）。 见表2。

表2 百日咳组与非百日咳组裂隙淋巴细胞阳性率差异比较

2.3 裂隙淋巴细胞计数单独以及联合白细胞数与淋巴细胞比例对百日咳的诊断效能 ROC 曲线分析结果显示， 裂隙淋巴细胞数这一指标对诊断百日咳有较高的准确性。 若裂隙淋巴细胞计数取4%为临界点，曲线下面积(AUC)最大，值为0.781，对应的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为0.595、0.942、0.880 和 0.766。 若把裂隙淋巴细胞计数（≥4%）、白细胞数(≥19.5×109/L)及淋巴细胞比例（≥66.5 %）三项指标进行联合诊断，则AUC为0.878，对应的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为 0.784、0.904、0.853、0.855，准确性优于裂隙淋巴细胞数单一指标以及白细胞数和淋巴细胞比例联合指标。 见图1、表3。

3 讨论

图1 裂隙淋巴细胞计数单独以及联合白细胞数与淋巴细胞比例诊断百日咳的ROC 曲线

表3 各项指标单独或者联合对百日咳的诊断效能

有文献指出，百日咳早期发病时白细胞计数显著升高，痉挛咳嗽期升高最多，以淋巴细胞为主[13]。在本实验中，百日咳患儿的白细胞数和淋巴细胞比例明显升高，均高于非百日咳患儿，与王琨[14]的研究相一致，也与此文献描述相符。

另有研究发现，裂隙淋巴细胞不仅存在于百日咳感染患者，也存在于淋巴瘤患者[15]。 本次实验亦发现，在某些非百日咳患儿外周血涂片中也可见少量裂隙淋巴细胞，这说明裂隙淋巴细胞并不为百日咳患者所特有。 但本实验结果同时显示，百日咳组的裂隙淋巴细胞平均值明显多于非百日咳组。 若设裂隙淋巴细胞计数≥4%为检出阳性， 百日咳组的阳性率也明显高于非百日咳组。 因此，尽管裂隙淋巴细胞不能作为百日咳的特异性指标，但仍有重要意义，临床上也常以细胞形态学检测结果联合血液指标，为疾病的诊断和鉴别诊断提供线索[16]。

为了解裂隙淋巴细胞计数单一指标和联合指标对百日咳的诊断效能， 本实验进行了ROC 曲线分析，根据结果显示，当裂隙淋巴细胞计数取4%为临界点时，诊断百日咳的准确性最高，其诊断灵敏度、特异度分别为0.595 和0.942。若把裂隙淋巴细胞计数、 白细胞数及淋巴细胞比例三项指标进行联合诊断，则准确性优于裂隙淋巴细胞计数单一指标以及白细胞数和淋巴细胞比例联合指标。 故临床在诊断百日咳时，根据患者临床症状，同时结合裂隙淋巴细胞计数以及白细胞数、淋巴细胞比例，会更加准确可靠。

百日咳患儿的临床症状常常不典型，容易漏诊[17]。传统的培养周期长，阳性率低；PCR 方法技术要求严格，成本高；血清学检测方法存在疫苗接种和感染均可出现阳性导致结果难以区分;而外周血裂隙淋巴细胞计数所需设备简单，操作简易快速，可成为临床诊断百日咳的辅助指标，但要求技术人员熟练掌握细胞形态学，且对于裂隙淋巴细胞的诊断百分比，也还需要大量的实验来研究和验证。

综上所述，裂隙淋巴细胞计数对于百日咳的诊断具有较高的灵敏度和特异性，可为临床诊断百日咳提供线索，减少临床对百日咳的漏诊率。 该检测方法简便易行，值得在基层医院推广。