不同模式乙肝五项与HBV-DNA定量及ALT的关系研究

朱昕 熊丹

摘要：目的  探討不同模式乙肝五项与乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）及血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）相关性分析。方法  选择2018年1～6月在高安市人民医院确诊的509例乙型肝炎病毒（HBV）阳性患者为研究对象，乙肝五项用酶联免疫吸附试验（ELISA）、HBV-DNA用荧光定量PCR（FQ-PCR）法、ALT用乳酸脱氢酶法测定。根据乙肝五项的结果分为A组大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、B组小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、C组小二阳（HBsAg+、HBcAb+），分析不同模式乙肝五项与HBV-DNA及ALT相关性。结果  ①A组HBV-DNA定量阳性率（87.50%）高于B组（50.64%）和C组（34.33%），B组阳性率高于C组，差异有统计学意义（P<0.05）;②A组HBV-DNA定量>1.0×105比例（64.84%）高于B组（18.47%）和C组（30.43%），A组HBV-DNA定量<1.0×104比例（23.08%）低于B组（64.33%）、C组（60.87%）;三组HBV-DNA定量为1.0×104～1.0×105的比例在10%～20%;③509例乙肝患者血清中ALT≥50 U/L有70例，A组中ALT≥50 U/L的比例（34.61%）高于B组（0.90%）、C组（0.89%），差异有统计学意义（P<0.05），但B组与C组ALT≥50 U/L的比例比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论  不同模式乙肝五项检测结果与HBV-DNA量及血清酶ALT含量有关，对不同模式的乙型肝炎患者采取不同模式模式乙肝五项检测，对乙肝诊治具有临床意义。

关键词：乙肝五项;HBV-DNA;血清标志物ALT;慢性乙型肝炎

中图分类号：R512.6+2                               文献标识码：A                               DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.19.052

文章编号：1006-1959（2020）19-0162-03

Abstract：Objective  To explore the correlation analysis of five different models of hepatitis B with hepatitis B virus DNA （HBV-DNA） and serum alanine aminotransferase （ALT）.Methods  A total of 509 hepatitis B virus （HBV） positive patients diagnosed in Gao'an Peoples Hospital from January to June 2018 were selected as the research subjects. Five hepatitis B items were tested by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and HBV-DNA by fluorescence quantitative PCR （FQ-PCR） method， ALT was determined by lactate dehydrogenase method. According to the results of the five items of hepatitis B， they were divided into three major yang （HBsAg+， HBeAg+， HBcAb+） in group A， three small yang （HBsAg+， HBeAb+， HBcAb+） in group B， and two small yang （HBsAg+， HBcAb+） in group C. Five hepatitis B items of different modes were analyzed. Correlation with HBV-DNA and ALT.Results  ①The positive rate of HBV-DNA in group A （87.50%） was higher than that of group B （50.64%） and group C （34.33%）. The positive rate of group B was higher than that of group C，the difference was statistically significant （P<0.05）; ②The ratio of HBV-DNA quantification>1.0×105 （64.84%） in group A was higher than that of group B （18.47%） and group C （30.43%）， and the ratio of HBV-DNA quantification <1.0×104 （23.08%） in group A was lower than that of group B （64.33%）， group C （60.87%）; the proportion of the three groups with HBV-DNA quantification of 1.0×104～1.0×105 is 10%～20%; ③There were 70 cases of 509 patients with hepatitis B in serum ALT≥50 U/L. The proportion of ALT≥50 U/L in group A （34.61%） was higher than that in group B （0.90%） and group C （0.89%），the difference was statistically significant （P<0.05）， but there was no significant difference in the ratio of ALT≥50 U/L between group B and group C （P>0.05）.Conclusion  The five test results of different models of hepatitis B were related to the amount of HBV-DNA and the content of serum enzyme ALT. The five test results of different models of hepatitis B for patients with different models of hepatitis B had clinical significance for the diagnosis and treatment of hepatitis B.

Key words：Five items of hepatitis B;HBV-DNA;Serum marker ALT;Chronic hepatitis B

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）具有广泛传染性，是世界范围内流行病变[1]。可通过血液传播、性传播及母婴传播等多种途径感染正常人群[2，3]，发病率较高。我国为乙肝高发区，人群表面抗原携带率高达 7.18%，慢性乙肝患者约2000万[1]，流行形势较严峻。临床常用酶联免疫法（ELISA）检测乙肝病毒血清标志物包括乙肝表面抗原 （HBsAg）、乙肝表面抗体 （HBsAb）、乙肝e抗原 （HBeAg）、乙肝e抗体 （HBeAb） 和乙肝核心抗体 （HBcAb），即乙肝五项，但此检测法对其病情严重程度的评估效果并不理  想[4]。随着分子诊断技术的发展，对乙肝患者血清中HBV-DNA及血清丙氨酸氨基转移酶（Alanineaminotransferase，ALT）定量检测，可反映乙肝传染性及患者的肝功损害情况[5]。因此，本研究为进一步明确乙肝患者的两对半模式与HBV-DNA、ALT的关系，对乙肝病毒阳患者血清中的乙肝五项、HBV-DNA及ALT进行测定，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选择2018年1～6月在高安市人民医院确诊的509例HBV阳性患者为研究对象，其中男366例，女143例。年龄14～75岁，平均年龄（40.1±12.6）岁。入组患者均自愿参与本次研究，并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1仪器和试剂  乙肝五项应用半自动酶标分析仪（SK201，深圳市盛信科技有限公司）测定，乙肝五项检测试剂盒购自珠海丽珠试剂股份有限公司;HBV-DNA定量检测使用达安实时荧光PCR仪（DA7600，达安基因股份有限公司），HBV-DNA定量检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司;血清酶ALT使用全自动生化分析仪（AU5800，贝克曼库尔特商贸有限公司），其检测试剂盒购自贝克曼库尔特商贸有限公司 。

1.2.2乙肝五项测定  将试剂盒各组分别从试剂盒中取出，平衡至室温。将20倍浓缩洗液按照1∶19的比例加入到蒸馏水中，混匀备用。预包被板条固定于板架，按序编号。按具体使用试剂盒说明书加样、温育、洗版、显色、终止。用酶标仪读值，在单波长450 nm下读取各孔OD值。结果判断：①HBsAg临界值=阴性对照平均OD值+0.09;②HBsAb临界值（C.O.）=2.1×阴性对照平均OD值;③HBeAg临界值（C.O.）=2.1×阴性对照平均OD值;样本OD值<临界值（C.O.）为HBsAg阴性，样本OD值≥临界值（C.O.）为HBsAg阳性。④HBeAb临界值（C.O.）=阴性对照平均OD值×0.5;HBeAb临界值（C.O.）=阴性对照平均平均OD值×0.5;样本OD值<临界值（C.O.）为HBeAb阳性，样本OD值≥临界值（C.O.）为HBeAb阴性。根据乙肝五项的结果分为A组大三阳（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、B组小三阳（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、C组小二阳（HBsAg+、HBcAb+）。

1.2.3 HBV-DNA定量检测  采用FQ-PCR法對HBV-DNA进行定量检测。标本2500 rpm离心5 min，取360 μl血清加入微型管B后12000 rpm离心5 min。另取微型管A加入DNA提取液（大瓶）450 μl，于B中取200 μl血清加入A中，机器震荡混匀离心   2000 rpm，10 s，放入干燥器中加盖100℃煮10 min取出，待其冷却后12000 rpm离心5 min，取出20 μl加入PCR管，然后离心8000 rpm，10 s上机，反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值，点击Analysis自动获得分析结果，在Report界面查看结果。判定标准：<5.00 ×102 copies/ml为阴性，大于5.00 ×102 copies/ml为阳性。PCR实验室通过卫生部认定标准。

1.2.4 ALT测定  采用乳脱氢酶法测定，取患者静脉血3 ml，温育10 min后，4000 rpm离心4 min分离血清。试剂准备：该试剂是即用型ALT检测试剂盒，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。将样本编号、扫码、输项目、上生化检测仪检测，系统自动计算各样本ALT浓度。ALT正常设定范围为9～50 U/L。

1.3观察指标  观察A组大三阳、B组小三阳、C组小二阳的乙肝五项检测值、HBV-DNA定量血清ALT水平。

1.4统计学方法  应用SPSS 21.0软件分析数据，计数资料以（%）表示，采用？字2检验;计量资料用（x±s）表示，t检验，多组间的比较行方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同模式乙肝五项与HBV-DNA定量检测的关系  A组HBV-DNA定量阳性率高于B组和C组，B组高于C组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 HBV-DNA定量分析  A组HBV-DNA定量>1.0×105占比（64.84%）高于B组（18.47%）和C组（30.43%）; A组HBV-DNA定量<1.0×104占比（23.08%）低于B组（64.33%）和C组（60.87%）。三组HBV-DNA定量在1.0×104～1.0×105均为10%～20%，见图1。

2.3不同模式乙肝五项与血清转氨酶ALT的关系  509例乙肝患者血清中ALT≥50 U/L有70例，A组ALT≥50 U/L的比例高于B组和C组，差异有统计学意义（P<0.05），B组与C组占比比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

3讨论

乙型肝炎是有乙肝病毒引起的肝脏慢性炎症，HBV是病毒型肝炎中常见的病原体[6]。HBV感染是全球性的公共卫生问题，临床应高度重视以控制感染率。乙肝五项检查是临床检测HBV感染的常见方法，可判断是否感染HBV，反映病毒复制水平[7]。但乙肝五项模式多用于早期筛查，且其组合方式复杂多样，导致临床无法判断患者体内病毒复制状态，造成漏诊、误诊发生，对病情严重程度的评估参考性不大[8]。

随着近年FQ-PCR等分子生物学方法不断涌现，有学者发现其具有灵敏度高、特异性好的优点，很好地解决免疫学方法的缺陷，降低漏检率[9]。其中，FQ-PCR法因其具有更高的灵敏度，且可对病毒进行精确定量、操作简便等优势，在临床上应用最为广泛[10]。一般HBV-DNA定量检测值越高，传染性越强[7]。因此，进一步明确乙肝患者的两对半模式与HBV-DNA定量之间的关系，可更好地协助临床医生判断患者的病情，制定更具体的治疗方案。

本研究结果显示，A组HBV-DNA定量阳性率（87.50%）高于B组（50.64%）和C组（34.33%），B组阳性率高于C组，差异有统计学意义（P<0.05），与王碧玉等的研究结果一致[11]。A组HBV-DNA定量>1.0×105比例（64.84%）高于B组（18.47%）和C组（30.43%），A组HBV-DNA定量<1.0×104比例（23.08%）低于B组（64.33%）、C组（60.87%），说明不同模式的乙肝五项与HBV-DNA定量值有相关性，患者体内病毒复制情况不一样。此外，乙肝五项检测结果e抗原阳性患者中，HBV-DNA阳性检出率均较高，HBV-DNA定量值也高于未检出e抗原阳性患者，说明e抗原与HBV复制有关，这与其他文献报道的结果相一致[12]。本研究中部分血清学阳性的患者荧光定量PCR检测显示为阴性，分析原因可能如下：①部分患者用药治疗后，HBV-DNA先于血清标志物消失;②HBV整合进宿主肝细胞，导致血清中无法检测到游离HBV-DNA[13]。ALT在肝脏中含量最多，主要存在于肝细胞胞浆中，病毒性肝炎发病导致机体ALT浓度变化[14]。研究发现，ALT正常的HBV慢性感染者中20.7%有明显的肝纤维化，该类患者ALT轻微升高，其肝纤维化的风险则高达48%[15，16]。此外，A组患者中ALT≥50 U/L的比例为34.61%，高于B组（0.90%）和C组（0.89%），差异有统计学意义（P<0.05），B组与C组比较，差异无统计学意义（P>0.05），说明大三阳患者的ALT波动比较大，肝功能活动性与乙肝模式相关。

综上所述，不同模式乙肝五项与HBV-DNA定量以及ALT定量有关。因此，对不同模式的乙型肝炎患者采取不同模式模式乙肝五项检测，对乙肝诊治具有临床意义。

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收稿日期：2020-05-24;修回日期：2020-06-15

编辑/肖婷婷