锁阳对家兔离体空肠平滑肌收缩功能的影响

李宏民

摘要：目的  研究锁阳水煎液对家兔离体空肠平滑肌自发性活动的影响。方法  选用体重为2.0～2.5 kg的新西兰大白兔10只，击打家兔后脑致昏后剖开腹腔，剪取15 cm空肠，采用离体空肠平滑肌灌流的方法，观察空肠平滑肌在不同浓度（0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml）锁阳水煎液作用下收缩频率及收缩幅度变化。结果  在正常状态下，空肠具有兴奋性、传导性、收缩性、节律性，且收缩舒张频率、平均张力、时间间隔都较稳定，整个波形无明显异常变化。不同浓度锁阳水煎液用药前后空肠平滑肌收缩频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。0.005 g/ml浓度锁阳水煎液用药前后空肠平滑肌收缩幅度比较，差异无统计学意义（P>0.05）;0.01、0.015、0.02 g/ml浓度锁阳水煎液用药后空肠平滑肌收缩幅度低于用药前，差异有统计学意义（P<0.05）;不同浓度锁阳水煎液空肠平滑肌收缩频率和收缩幅度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论  锁阳水煎液浓度为0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml时，对空肠平滑肌收缩频率有促进作用;锁阳水煎液浓度为0.01、0.015、0.02 g/ml时，对空肠平滑肌收缩幅度有抑制作用，兩种作用共同协作下可增强家兔离体空肠平滑肌的收缩功能。

关键词：锁阳;离体家兔;空肠平滑肌;收缩活动

中图分类号：R965                                 文献标识码：A                                   DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.19.023

文章编号：1006-1959（2020）19-0082-03

Abstract：Objective  To study the effect of Cynomoriumsongaricum decoction on the spontaneous activity of isolated rabbit jejunum smooth muscle. Methods  Ten New Zealand white rabbits weighing 2.0～2.5 kg were selected. After striking the back of the rabbits brain， the abdominal cavity was opened. The 15 cm jejunum was cut out. Using the method of isolated jejunal smooth muscle perfusion， the jejunal smooth muscle was observed to change the contraction frequency and contraction amplitude under the action of different concentrations （0.005， 0.01， 0.015， 0.02 g/ml） of Cynomoriumsongaricum decoction.Results  Under normal conditions， the jejunum had excitability， conductivity， contractility， and rhythm， and the contraction and relaxation frequency， average tension， and time interval are relatively stable， and the entire waveform had no obvious abnormal changes. There was a statistically significant difference in the contraction frequency of jejunum smooth muscle before and after the administration of Cynomoriumsongaricum sylvestris with different concentrations （P<0.05）. There was no significant difference in the contraction amplitude of jejunal smooth muscle before and after the administration of the 0.005 g/ml Cynomoriumsongaricum decoction （P>0.05）; the jejunal smooth muscle contraction amplitude was lower after the administration of the 0.01， 0.015， 0.02 g/ml Cynomoriumsongaricum decoction Before the medication， the difference was statistically significant （P<0.05）; there was no statistically significant difference in the contraction frequency and amplitude of jejunal smooth muscle with different concentrations of Cynomoriumsongaricum decoction （P>0.05）.Conclusion  Cynomorium decoction concentration of 0.005， 0.01， 0.015， 0.02 g/ml could promote the contraction frequency of jejunum smooth muscle; when the concentration of Cynomoriumsongaricum decoction was 0.01， 0.015， 0.02 g/ml， it could contract jejunal smooth muscle the amplitude had an inhibitory effect， and the two effects could enhance the contractile function of rabbit jejunum smooth muscle in vitro.

Key words：Cynomoriumsongaricum;Isolated rabbit;Jejunum smooth muscle;Contractile activity

锁阳（Cynomoriumsongaricum）俗称“不老药”，又名绣铁棒、地毛球、黄骨狼、锁严子[1]、乌兰一告亚（蒙名）、沙漠人参等，为锁阳科（Cynomoriaceae）植物锁阳的干燥肉质茎，始载于《本草衍义补遗》及《本草纲目》中。锁阳具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效，多用于肾阳不足，腰膝酸软，肠燥便秘等疾病的治疗[2]。药理学研究显示[3-5]，锁阳具有提高性生殖能力、提高免疫能力、抗氧化抗衰老、抗糖尿病、抗应激、抗疲劳、抑制艾滋病病毒、食疗、保健等作用，现被广泛应用于各类中药复方中，其系列产品涵盖医药、食品、发酵等各个方面，是河西走廊地区的道地药材之一，也是一味传统的名贵补益中药材，具有非常高的药用价值。但在消化系统研究方面，国内有关锁阳对离体空肠活动影响的作用机制尚不明确。本研究基于锁阳“润肠通便”的功效，采取离体空肠平滑肌灌流的方法，探讨不同浓度锁阳水煎液对家兔离体空肠平滑肌自发性活动的影响，为临床用药提供合理依据，现报道如下。

1材料與方法

1.1仪器  TME BL-420F生物信息采集与分析系统（成都泰盟科技有限公司），TME SV-8离体组织器官恒温灌流装置（成都泰盟科技有限公司），FT-100生物张力传感器（成都泰盟科技有限公司），HW-500超级恒温水浴槽（成都泰盟科技有限公司），常用手术器械一套。

1.2药品  NaCl（天津益仁达化工有限公司，生产批号：20160620），10%KCl（烟台市双双化工有限公司，生产批号：20150402），10%MgSO4·7H2O（天津市凯信化学工业有限公司，生产批号：20170603），5%NaH2PO4·2H2O（天津市致远化学试剂有限公司，生产批号：20161225），NaHCO3（天津市凯信化学工业有限公司，生产批号：20161208），无水CaCl2（天津市致远化学试剂有限公司，生产批号：20170413），葡萄糖（天津市致远化学试剂有限公司，生产批号：20170310）。

1.3台氏液的制备  1000 ml台氏液含：NaCl 8.0g、10% KCl 2.0 ml（0.2 g）、10% MgSO4·7H2O 2.6 ml（0.26 g）、5 %NaH2PO4·2H2O 1.3 ml（0.065 g）、NaHCO3 1.0 g、无水CaCl2 1.8 ml（0.2 g）、葡萄糖1.0 g。

1.4锁阳水煎液的制备  称取50 g锁阳（由惠仁堂连锁药店提供），加250 ml蒸馏水，文火煎制，抽滤、浓缩至100 ml，装瓶消毒，即得含生药0.5 g/ml的锁阳水煎液[4]。

1.5实验动物  新西兰大白兔（张掖市誉诚医药生物科技有限公司提供）10只，雌雄不限，体重1.5～2.0 kg。实验前12 h禁食，饮水不限。

1.6家兔离体空肠平滑肌标本的制备  用木槌击打家兔头部，昏迷后快速沿腹正中线开腹，迅速取出空肠15 cm，剪成约1.5～2.0 cm的肠段数段，置4℃新鲜台氏液中并通入空气备用[5]。将家兔的空肠段随机分成对照组和实验组，在灌流浴槽中注入37℃的台氏液，将空肠管两端对角中一端用小钩钩住固定于张力换能器上，另一端固定于通气钩上，将通气小钩连同肠肌放入浴槽中，定容10 ml。张力换能器与生物信息采集与分析系统通道连接。选择电脑实验项目中“消化道平滑肌生理特性”实验模块，设置控制参数：T 3 s;扫描速度：2.50 s/div;滤波F 50 Hz;增益G 1 mv。先观察正常情况下离体空肠平滑肌的自主收缩状态10 min，然后向离体组织器官恒温灌流装置中逐次加入0.5 g/ml锁阳水煎液0.1、0.2、0.3、0.4 ml使10 ml台氏液中含药量分别达到0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml，同一浓度分别作用于不同肠管，重复10次，记录肠管的收缩变化情况。在每个剂量作用下出现反应后，用台氏液冲洗标本3次，待肠管运动恢复正常后再进行下个剂量的处理。

1.7实验数据测量  测量1 min内曲线全部收缩波的平均幅度作为收缩力（g），测量1 min内曲线收缩波的个数作为收缩频率（次/min）。于给药前和给药后2 min分别对收缩力和收缩频率进行测量。

1.8统计学方法  应用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1正常状态下空肠平滑肌的收缩舒张情况  在正常状态下，空肠具有兴奋性、传导性、收缩性、节律性，且收缩舒张频率、平均张力、时间间隔都较稳定，整个波形无明显异常变化，见图1。

2.2不同浓度锁阳水煎液对家兔离体空肠平滑肌的影响  将浓度为0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml的锁阳水煎液分别作用于正常状态下的空肠平滑肌，测定肠管的收缩频率，结果显示不同浓度锁阳水煎液用药前后空肠平滑肌收缩频率比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。0.005 g/ml浓度锁阳水煎液用药前后空肠平滑肌收缩幅度比较，差异无统计学意义（P>0.05），0.01、0.015、0.02 g/ml浓度锁阳水煎液用药后空肠平滑肌收缩幅度低于用药前，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。不同浓度锁阳水煎液空肠平滑肌收缩频率和收缩幅度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

3讨论

肠平滑肌自发性收缩活动的产生和传导易受神经递质、离子环境、胃肠激素等生物活性物质和药物的影响[6]，其次小肠平滑肌的活动与其电活动密切相关，平滑肌上分布有M、β、α等多个受体，而兴奋M受体后可引发电位敏感性Ca2+通道开放，促使Ca2+浓度偏高，进而激活肌纤蛋白-肌凝蛋白-ATP系统，使平滑肌发生收缩。胃肠平滑肌离体后，虽然失去了植物性神经系统的调控，但其运动依然受到壁内神经丛的局部调节，因此离体后仍可以进行正常的收缩舒张运动。

锁阳，作为名贵的补益中药材，其化学成分复杂多样，包括黄酮类、三萜类、挥发性成分、有机酸、糖和糖苷、鞣质、无机离子等[7]，其中对平滑肌起主要作用的是无机离子[8]、多糖[9]等成分。小肠自发节律性收缩活动是由十二指肠纵行肌和环行肌之间的Cajal细胞产生的慢波（slow wave，SW）节律来起步的[10]，任何刺激（如化学物质或扩张刺激）作用于空肠平滑肌，都是在SW的基础上产生动作电位，进而引起平滑肌收缩[11]。锁阳中的有效成分无机离子能起到兴奋平滑肌的作用[12]，其中以K、Na、Cl、Mg等含量较高，负离子测定结果以Cl-、SO42-、PO42-含量较高，且可溶性无机物含量约为生药量的7%，但排除鞣质成分。其次，锁阳多糖能加快肠蠕动，促进小肠推进功能，且成剂量依赖性[13]。本研究结果显示，不同浓度锁阳水煎液用药前后收缩频率比较，差异有统计学意义（P<0.05），说明0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml浓度时，锁阳对平滑肌收缩频率有促进作用，且随着给药浓度的增加，平滑肌收缩频率有减少趋势，提示在高浓度下，平滑肌可能处于低渗环境，进而引起肠功能紊乱，与张百舜等[13]研究结论相似。

平滑肌张力产生的机制主要有：①平滑肌细胞的Ca2+通道：Ca2+内流产生动作电位，肌细胞内Ca2+浓度增加途径为肌浆网释放和从细胞外摄取[14];②横桥循环与平滑肌张力的维持;③平滑肌收缩的神经体液调节[19]。本研究中在0.005 g/ml浓度锁阳水煎液用药前后空肠平滑肌收缩幅度比较，差异无统计学意义（P>0.05），0.01、0.015、0.02 g/ml浓度锁阳水煎液用药后空肠平滑肌收缩幅度低于用药前，差异有统计学意义（P<0.05），说明在0.01、0.015、0.02 g/ml浓度下，锁阳对收缩幅度有抑制作用，其机制可能是选择性的激动M受体，产生M样作用[15]，导致平滑肌舒张，张力减小;也可能是肌细胞内Ca2+浓度增加而诱发的平滑肌收缩，且随着剂量加大抑制作用增强[16]。除此之外，Ca2+还可引起肠管平滑肌痉挛，导致平滑肌张力异常变化。此外，本研究还发现，不同浓度锁阳水煎液空肠平滑肌收缩频率和收缩幅度比较，差异无统计学意义（P>0.05），天汇锁阳水煎液能促进平滑肌收缩频率，抑制平滑肌收缩幅度，在两种作用的共同协调下，产生温和的“润肠通便”作用，不至于引起腹泻。

综上所述，锁阳水煎液浓度为0.005、0.01、0.015、0.02 g/ml时，对空肠平滑肌收缩频率有促进作用;锁阳水煎液浓度为0.01、0.015、0.02 g/ml时，对空肠平滑肌收缩幅度有抑制作用，两种作用共同协作下可增强家兔离体空肠平滑肌的收缩功能。

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收稿日期：2020-07-13;修回日期：2020-07-25

编辑/刘欢