防治火龙果炭疽病安全用药技术初探

张 怡，沈迎春

( 江苏省农药总站，江苏 南京 210036)

火龙果是一种风味鲜美的特色经济作物，营养丰富，深受广大消费者喜爱。自20世纪90年代初在我国台湾试种火龙果，火龙果产业逐渐发展，目前我国火龙果种植面积约有50～60万亩，主要集中在广西、广东、海南、云南、贵州等地[1]。近年来，农村种植业结构不断调整，华东地区温室火龙果栽培逐步兴起，温室火龙果定植后寿命可达50年以上，盛果期每667m2产量可达400～500kg[2]，按照市场价格30元/kg计算，效益十分可观，备受种植户青睐。

火龙果在温暖潮湿的条件下，肉质茎易被盘圆孢属(Colletotrichungloeosporioides(PenZ)真菌感染形成炭疽病，染病初期产生大量红色病斑，随着病情的扩散，病斑扩大并逐步连在一起，造成火龙果茎秆表面组织松弛，火龙果果实前期感染炭疽病不会表现症状，等生长成熟后病症逐步显现，果实出现水渍状的病斑[2-4]。火龙果种植面积的扩大，为其病害的大流行提供了条件和场所，陈圆等[5]在2014～2015对海南火龙果主产区调研发现火龙果炭疽病从幼苗到果实成熟都可以发病，尤其危害果实可直接影响外观和品质，从而影响销售。新修订的《农药管理条例》规定了农药使用者应当严格按照农药的标签、标注的使用范围、使用方法和剂量、使用技术要求和注意事项，不得扩大使用范围、加大用药剂量或者改变使用方法，而目前火龙果炭疽病并无登记药剂可用[6-10]，探索火龙果炭疽病防治技术，建立应急防治药剂数据库，确保农产品质量安全势在必行。

本研究通过田间药效试验，研究嘧菌酯、咪鲜胺对火龙果炭疽病的防治效果，探究炭疽病防治应用技术，并对选用农药进行残留验证，为果农防治炭疽病科学用药提供数据支撑和科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试靶标 火龙果炭疽病(Gloeosporiumsp)。

1.1.2 供试药剂 25%咪鲜胺水乳剂、250g/L嘧菌酯悬浮剂。

1.2 仪器设备 梅特勒AB135-S电子天平(精确度0.000 1 g)、试管、移液枪、JN-16C型背包式喷雾器等。

1.3 试验方法

1.3.1 田间药效试验 田间试验于2017年分别在镇江和上海的火龙果温室内进行。各试验地供试作物情况、靶标发生情况、施药日期如(表1)。施药剂量如(表2)，叶面喷雾处理，施药液量1 000L/hm2。镇江于火龙果炭疽病发病初期，均匀喷雾1次，间隔10～16d再喷1次，共喷雾2次；上海1次用药后，隔日用培养好的西瓜炭疽病菌种接种后闷棚2d，后按常规管理，第1次用药时火龙果炭疽病未发生，间隔7d再喷雾1次，共喷雾2次。末次药后10d调查防效。试验参照农业行业标准农药田间药效试验准则第98部分《杀菌剂防治芒果炭疽病药效试验》执行。

表1 田间管理措施

表2 供试药剂施药剂量设计

1.3.2 残留试验 残留试验于2017年在江苏、上海、广西进行。试验作物品种蜜宝(江苏)、玫瑰红(上海)、莲花8号(广西)。试验按照NY/T788-2004“农药残留试验准则”的要求进行，分为动态消解试验和最终残留试验。每处理重复3次，随机区组设计，每小区面积30m2。

消解动态试验：施药时选择叶片生长盛期的火龙果叶片，施药应保证用于动态试验的芋株均匀着药。施药剂量为田间药效试验最高剂量的1.5倍，喷雾后2 h、1、2、3、5、7、14、21、28 d采集火龙果茎叶样品。每次每小区采集≥2kg生长正常的火龙果样本，另设清水空白对照。处理间设保护间隔区。

最终残留试验：按照供试药剂田间药效试验推荐剂量和推荐剂量1.5倍2个剂量于火龙果叶斑病发病期施药处理，施药次数为2次和3次，对照区不施药。在末次施药后7 、14 和21d分别采样。另设空白对照，处理间设保护带。

1.4 样品采集 残留试验的田间样本在采集后，立即制备成实验室样品，放入冰柜中冷冻(4 h以内)。

火龙果动态样品的采集：采用棋盘式分布采集10株上的叶片，每株按照内、外、中采集，每小区采叶量≥2kg，充分混匀后，用四分法缩分，取150g装入封口容器中，容器内外各加上标签，保存在-20℃冰箱中待测。

最终残留火龙果样品的采集：于果实成熟期，每小区按随机取样法取火龙果，用毛刷和干布去除泥土及其他黏附物。样品采集量至少为6～12个个体，且≥2kg，将火龙果充分混匀后，用四分法缩分，取150g装入封口容器中，容器内外各加上标签，保存在-20℃冰箱中待测。

1.5 分析测定

1.5.1 咪鲜胺 样品(果实)经丙酮机械振荡提取，上清液浓缩近干，加入吡啶盐酸盐，在250℃沙浴锅中衍生化后，用石油醚萃取，取上清，浓缩至干，正己烷定容，待测。

色谱柱：DB-1701 (30m×0.32mm×0.25μm)；进样口240℃；检测器300℃；柱温80℃，保持1min，以30℃/min升至160℃，保持2min，以35℃/min升至245℃，保持2min；

总流量：29.4mL/min，尾吹2.5mL/min，分流比：10.0；进样量：2.0μL。

咪鲜胺标准曲线绘制：准确称取0.010 1g的三氯苯酚标准品配制标准储备液(1 000mg/L)。用正己烷逐级稀释成浓度为0.052、0.26、0.52、2.6、5.2mg/L的标准溶液，分别对应咪鲜胺的浓度为0.1、0.5、1、5、10ppm。在上述色谱操作条件下，分别进样2μL。测定三氯苯酚进样量与峰面积作标准曲线，线性关系良好。标样线性方程为：Y=239.2891X-3395.022 5，相关系数为：R2=0.999 0；其中Y为三氯苯酚峰面积，X为进样浓度。可见，三氯苯酚在0.052～5.2 mg/L范围内，对应咪鲜胺的浓度为0.1～10ppm，浓度与色谱峰面积呈显著的线性关系。

1.5.2 嘧菌酯 样品经乙腈机械振荡提取，匀浆2min，加入Nacl(2.0g)离心，吸取上清液过0.22m的滤膜，UPLC-MS/MS测定。

准确称取样品5.0g，放入具塞三角瓶中。加入25 mL乙腈，机械振荡1h，静置10min后加入2.0g的Nacl，在高速分散机中以1 000r/min匀浆2min，转速10 000r/min下离心10min，收集上清液，待净化。将C18固相萃取柱分别用1mL乙腈、1mL水和1mL的分析液与条件化，弃去流出液，再加入1.5mL的分析液，并用5mL的试管收集，过0.22mm滤膜，上机。

色谱柱：Agilent Eclipse plus C18100×2.1mm, 3.5m，柱温：40℃，流动相：A: 2/98=水/甲醇(V/V)+0.05%甲酸+5mmol的乙酸铵溶液 B:甲醇+0.05%甲酸，流动相采用梯度洗脱, 流速：0.2mL/min，进样量：5μL。电离方式：ESI+，毛细管电压：3.0kv，离子源温度：150℃，锥孔反吹气流量：50L/Hr，脱溶剂气温度：400℃，脱溶剂气流量：800L/Hr，监测模式：MRM模式

嘧菌酯标准曲线绘制：准确称取0.010 1g的嘧菌酯标准品配制标准储备液(1 000mg/L)。用丙酮逐级稀释成浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mg/L的标准溶液。在上述色谱操作条件下，分别进样5μL。测定嘧菌酯进样量与峰面积作标准曲线，线性关系良好。标样线性方程为：Y=868 565X+7 543.7，相关系数为：R2=0.998；其中Y为嘧菌酯峰面积，X为进样浓度。可见，嘧菌酯在0.01～0.2mg/L范围内，浓度与色谱峰面积呈显著的线性关系，可满足定量分析的需要。

1.5 计算方法 病情指数(叶)=[∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶数×9)] ×100

a—转化系数，咪鲜胺为1.906；嘧菌酯为1

R—样品中的农药含量，mg/kg

H(A)—样品峰面积

ES—标样浓度，mg/kg

V—定容体积，mL

m—称样量

国家估算每日摄入量(NEDI)

根据规范残留试验中值(STMR/STMR-P)计算或最大残留限量(MRL)计算某种农药国家估算每日摄入量(NEDI或TMDI)，计算NEDI时，如果没有合适的STMR或STMR-P，可以使用相应的MRL，应注明是使用中值和限量值混合评估的结果。

NEDI =∑[STMRi(STMR-Pi)× Fi)]

STMRi—农药在某一食品中的规范残留试验中值；

STMR-Pi —用加工因子校正的规范残留试验中值；

Fi—一般人群某一食品的消费量。

2 结果与分析

2.1 田间药效试验结果 镇江、上海两地施药后目测观察，供试药剂各用量对火龙果无不良影响，作物生长正常。田间药效试验结果表明，25%咪鲜胺水乳剂和250g/L嘧菌酯悬浮剂对火龙果炭疽病具有较好的防效，两地清水对照炭疽病病指分别为14.7和26.1，发生程度中等，咪鲜胺和嘧菌酯可以有效控制火龙果炭疽病危害。2种药剂对火龙果炭疽病的防治效果随着剂量增加而上升。

施用25%咪鲜胺水乳剂125～250g/hm2，末次药后10d防效在73.4%～88.3%之间，上海试验区咪鲜胺效果略好于镇江试验区，施用250g/L嘧菌酯悬浮剂100～200g/hm2，末次药后10d防效在62.0%～85.7%之间，总体而言，25%咪鲜胺水乳剂对火龙果炭疽病防效优于250g/L嘧菌酯悬浮剂。

表3 田间药效试验结果

2.2 残留试验结果 试验结果表明，咪鲜胺在江苏、上海、广西试验地火龙果叶片中咪鲜胺的原始沉积量为0.256～0.303mg/kg，在上海和广西试验点的残留试验中咪鲜胺在火龙果叶片中的平均残留量与施药间隔天数成明显的指数关系(图1)，江苏试验点的残留试验中咪鲜胺在火龙果叶片样品中的咪鲜胺消解极快，无法模拟消解动态方程。在上海、广西试验点火龙果叶片中的消解半衰期分别为6.54、4.20d。嘧菌酯在江苏、上海、广西消解动态(表4)，消解速度较快无法模拟动态曲线。

表4 250g/L嘧菌酯悬浮剂在火龙果叶片中的消解动态

续表

最终残留试验结果表明，于火龙果成熟期采样检测，江苏、上海、广西试验地火龙果叶片中咪鲜胺的残留量为<0.1～0.319mg/kg。嘧菌酯的残留量分别为：江苏为 <0.1～0.248mg/kg；上海为<0.1～0.229mg/kg；广西南宁为均<0.1mg/kg。

2.3 膳食风险评估 根据残留试验得出，咪鲜胺规范残留试验中值(STMR)为：0.1 mg/kg，最高残留值(HR)为0.32 mg/kg；嘧菌酯规范残留试验中值(STMR)为：0.1mg/kg，最高残留值(HR)为0.248mg/kg。(表6)结果显示，结合我国农药登记情况和我国居民的人均膳食结构，普通人群咪鲜胺的国家估算每日摄入量是0.581 3mg，占日允许摄入量的92.3%，嘧菌酯的国家估算每日摄入量是0.708 5mg，占日允许摄入量的5.6%，结果表明对一般人群健康不会产生不可接受的风险。

表5 残留试验结果汇总

表6 膳食评估风险

3 讨论

本研究中所涉及到的2种杀菌剂都是生产上使用广泛的杀菌剂，各具特色。咪鲜胺为广谱性杀菌剂，系抑制麦角甾醇生物合成，具有保护和铲除作用，对多种作物子囊菌和半知菌病害有显著防效。嘧菌酯是继1996年巴斯夫开发了第一个甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂醚菌酯后，于1997年由捷利康公司(现先正达)开发的，其比醚菌酯杀菌谱更广，适用作物更广泛，现在85个国家80余种作物上均有使用[11]。研究表明，咪鲜胺对火龙果炭疽病病菌有很好的室内活性，其EC50为0.109 3mg/L，优于苯醚甲环唑、戊唑醇和多菌灵。陈育民等[12]研究表明，50%咪鲜胺可湿性粉剂1 500倍液2次药后10d防效达83.4%，与本试验防效接近，效果优于噁霉灵、波尔多液、氨基寡糖素和嘧菌酯，3次药后各药剂对火龙果炭疽病防效无明显提高。控制火龙果炭疽病为害还需在前期辅以物理防治，如及时清园、摘除病叶、臭氧防治等，张耀良等[13]研究臭氧水在火龙果病虫害防治中的应用效果，发现每15d喷施臭氧水6～15mg/L，可抑制炭疽病病害增长4%～13%，可作为防治火龙果炭疽病的辅助手段。

残留试验期间江苏最高温度36℃，最低温度11℃，平均气温21.4℃，雨日44 d，总降水量428.8mm；上海试验点试验期间最高温度40℃，最低气温24℃，雨日18d；广西试验点试验期间最高气温35℃，最低气温24℃，雨日27日，降雨量235mm。光解、雨水冲洗和自然分解是农药在植物表层组织中的降解的主要影响因素，增长稀释及农药迁移则促进了内部组织中农药的消解。作物品种对农药在火龙果中的降解影响不大。咪鲜胺、嘧菌酯在火龙果叶片中的消解速率差异较小，且消解较快，这可能与其自身理化性质有关，在火龙果果实中残留很少。膳食风险评估结果表明25%咪鲜胺水乳剂250～375g/hm2和250g/L嘧菌酯悬浮剂200～300 g/hm2施药2次对一般人群健康风险可接受。

综合田间防效、残留试验结果，咪鲜胺和嘧菌酯适用于防治火龙果炭疽病，要注意轮换使用，防止抗药性的产生。