湛江驳骨消在骨折模型鼠骨折愈合过程中的作用研究

吴东明 李木英 陈桂鹏 杨苗健 黄濛偲 董 辽

广东省湛江市第二中医医院骨伤三科，广东湛江 524013

骨折是临床常见外伤，如何促进骨折愈合，是骨伤科的重要研究方向。骨折的愈合是重新获得骨结构的强度，再现胚胎原始骨发育方式，最终恢复原有的骨结构和性能。骨折经历血肿机化期，原始骨痂期，骨痂改造期，中医将骨折愈合过程分为瘀袪、新生、骨合三个阶段。中医在不同时期辨证治疗方案不同，早期以活血化瘀为主，中期以续筋接骨为主，后期以强壮筋骨为主[1-2]。湛江驳骨消是本土道地药材，该药在缓解骨折局部肿胀及疼痛，促进骨折愈合等方面具有较好的效果[3]，但目前缺少基础及临床研究。本研究探讨其在骨折模型鼠骨折愈合过程中的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 动物

SPF级大鼠80只，3个月龄，重量（350±25）g。随机分为4组，每组20只，分别为驳骨消内服组、驳骨消外敷组、接骨七厘片内服组、对照组。研究大鼠由广东医科大学实验动物中心提供；大鼠品系：SD大鼠。

1.2 骨折造模及给药方式

腹腔麻醉，大鼠仰卧，左下肢髌骨内缘1cm长纵切口，逐层切开，暴露股骨髁间凹，插入注射针沿髓腔扩髓值股骨粗隆间。逆行插入克氏针至股骨大粗隆外，逐层缝合切口。大鼠仰卧，左侧胫骨外展内旋为固定于造模支架的铁砧凹槽上，用砝码自25～30cm处自由落体撞击，建立大鼠骨折模型。

驳骨消内服组：正常饲养，驳骨消（湛江市宝满姨草药店提供新鲜草药）水煎服，每次0.2g，每日2次。驳骨消外敷组：正常饲养，250g驳骨消粉剂溶于500mL 75%酒精，外敷患处，每只每次外敷2～3g，每日2次。接骨七厘片（湖南金沙药业有限责任公司，国药准字 Z20003140，规格：0.30×60s）。内服组：正常饲养，接骨七厘片1片，碾碎，溶于水，灌服，每日2次。对照组仅给予正常饲养。

1.3 检测指标

分别于第1、2、4、6周每周每组各处死5只大鼠，处死前行血清学分析，处死后，观察左侧胫骨骨折愈合情况。血清学检测指标包括钙（偶氮胂Ⅲ法）、磷浓度（磷钼酸紫外法），血清总碱性磷酸酶（sTAP）（速率法）、血清骨钙素（OC）（ELISA测定法）。试剂盒均有中山标佳生物科技有限公司提供。

拍摄X线片，观察骨痂组织形成和骨折愈合进程。参考柴本甫等[4]骨折愈合评分方法，根据骨折断端边缘变化、骨痂量、骨痂密度、骨痂边缘情况评1～4分，计算总得分。总分4～16分。

1.4 统计学方法

应用SPSS20.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料以（）表示，多组比较采用F检验，组内两个时间点比较以及组间两两比较采用LSD-t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗后不同时间点血清骨钙素水平比较

在治疗后第1周、第2周、第4周及第6周，驳骨消内服组、驳骨消外敷组以及接骨七厘片内服组血清骨钙素水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 治疗后不同时间点各组血清总碱性磷酸酶比较

在治疗后第1周、第2周、第4周及第6周，驳骨消内服组、驳骨消外敷组以及接骨七厘片内服组血清总碱性磷酸酶水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 治疗后不同时间点血清骨钙素水平比较

表1 治疗后不同时间点血清骨钙素水平比较

注：（1）驳骨消内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05，与第4周比较，dP＜0.05；（2）驳骨消外敷组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05，与第4周比较，dP＜0.05；（3）接骨七厘片内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05,与第4周比较，dP＜0.05；（4）第1周、第2周、第4周及第6周与对照组比较，cP＜0.05

组别 第1周 第2周 第4周 第6周 F P驳骨消内服组 12.9±0.6c 15.1±1.1ac 18.8±1.2abc 13.1±1.0bdc 37.352 ＜0.05驳骨消外敷组 12.8±0.8c 15.0±1.0ac 18.6±1.3abc 13.0±1.1bdc 31.880 ＜0.05接骨七厘片内服组 12.6±0.7c 14.6±0.9ac 18.4±1.5abc 12.8±1.0bc 31.766 ＜0.05对照组 9.5±0.6 9.8±0.7 10.3±0.7 10.1±0.8 1.237 ＞0.05 F 29.009 37.317 58.771 10.753 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 治疗后不同时间点血清钙水平比较

在治疗后第2周、第4周，驳骨消内服组、驳骨消外敷组以及接骨七厘片内服组血清钙水平均显著低于对照组，第6周显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.4 治疗后不同时间点血清磷水平比较

在治疗后第2周、4周及6周，驳骨消内服组、驳骨消外敷组以及接骨七厘片内服组血清磷水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

2.5 治疗后不同时间点X线片检查结果比较

术后第1周、第2周、第4周以及第6周驳骨消内服组、驳骨消外敷组以及接骨七厘片内服X线片检查骨折愈合评分均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

3 讨论

骨折愈合经过三个时期，骨折后血肿逐渐机化，骨内外模处开始形成骨样组织，进入膜内化骨及软骨化骨过程，形成原始骨痂，然后原始骨痂进行改造塑形。年龄、全身健康状况、骨折局部情况是影响骨折后骨折愈合的主要因素。全身健康状况差，如营养不良、糖尿病、钙磷代谢紊乱、恶性肿瘤等患者，骨折愈合延迟[5-6]。另外，骨折部位的血运情况也是影响骨折愈合的重要因素。血液循环不佳，容易发生延迟连续、不连续或者骨坏死。

表2 治疗后不同时间点各组血清总碱性磷酸酶比较（，U/L）

表2 治疗后不同时间点各组血清总碱性磷酸酶比较（，U/L）

注：（1） 驳骨消内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；与第4周比较，dP＜0.05；（2）驳骨消外敷组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05，与第4周比较，dP＜0.05；（3）接骨七厘片内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05,与第4周比较，dP＜0.05；（4）对照组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（5）第1周、第2周、第4周及第6周与对照组比较，cP＜0.05

组别 第1周 第2周 第4周 第6周 F P驳骨消内服组 46.4±4.1c 71.6±8.8ac 64.2±7.5ac 56.8±6.8abdc 11.763 ＜0.05驳骨消外敷组 45.9±5.0c 72.1±8.9ac 65.1±7.2ac 55.3±6.0abdc 13.631 ＜0.05接骨七厘片内服组 46.0±4.8c 71.8±9.0ac 65.3±7.6ac 54.8±5.9abdc 13.199 ＜0.05对照组 39.4±2.5 53.6±5.7a 49.4±6.6a 44.1±6.0b 4.742 ＜0.05 F 3.170 6.156 5.734 4.440 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表3 治疗后不同时间点血清钙水平比较

表3 治疗后不同时间点血清钙水平比较

注：（1）驳骨消内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05；（2）驳骨消外敷组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05；（3）接骨七厘片内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05；（4）第2周、第4周及第6周与对照组比较，cP＜0.05

组别 第1周 第2周 第4周 第6周 F P驳骨消内服组 2.8±0.4 2.2±0.2ac 2.0±0.2ac 2.7±0.3c 3.379 ＜0.05驳骨消外敷组 2.8±0.5 2.1±0.2ac 1.9±0.1ac 2.6±0.2c 3.140 ＜0.05接骨七厘片内服组 2.7±0.4 2.2±0.2ac 2.0±0.2ac 2.6±0.3c 4.561 ＜0.05对照组 2.7±0.3 2.5±0.2 2.3±0.2 2.2±0.2 2.778 ＞0.05 F 0.101 3.750 4.615 3.782 P＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表4 治疗后不同时间点血清磷水平比较

表4 治疗后不同时间点血清磷水平比较

注：（1）驳骨消内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，第4周与第2周比较，bP＜0.05；（2）驳骨消外敷组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（3）接骨七厘片内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（4）对照组组内比较，与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（5）第2周、第4周及第6周与对照组比较，cP＜0.05

组别 第1周 第2周 第4周 第6周 F P驳骨消内服组 0.8±0.2 1.5±0.2ac 1.9±0.3abc 1.6±0.2ac 16.667 ＜0.05驳骨消外敷组 0.9±0.2 1.4±0.3ac 1.8±0.3abc 1.5±0.3ac 7.368 ＜0.05接骨七厘片内服组 0.8±0.2 1.4±0.4ac 1.9±0.2abc 1.6±0.3ac 9.593 ＜0.05对照组 0.7±0.2 1.0±0.2 1.4±0.1ab 1.1±0.2a 8.817 ＜0.05 F 0.833 2.980 3.116 4.359 P＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表5 治疗后不同时间点X线片检查结果比较（，分）

表5 治疗后不同时间点X线片检查结果比较（，分）

注：（1）驳骨消内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（2）驳骨消外敷组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（3）接骨七厘片内服组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05，与第2周比较，bP＜0.05；（4）对照组组内比较：与第1周比较，aP＜0.05；与第2周比较，bP＜0.05；与第4周比较，dP＜0.05；（5）第1周、第2周、第4周及第6周与对照组比较，cP＜0.05

组别 第1周 第2周 第4周 第6周 F P驳骨消内服组 5.4±0.5c 13.8±1.0ac 16.0±0.1abc 16.0±0.1abc 406.610 ＜0.05驳骨消外敷组 5.3±0.6c 13.6±1.1ac 15.9±0.1abc 16.0±0.1abc 321.590 ＜0.05接骨七厘片内服组 5.3±0.5c 13.7±1.1ac 15.8±0.2abc 16.0±0.1abc 336.690 ＜0.05对照组 4.3±0.4 10.4±1.0a 15.0±0.5ab 15.7±0.2abd 361.780 ＜0.05 F 5.278 12.349 13.495 6.429 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

中医对骨折的治疗有悠久的历史[7-8]。明代薛己《正体类要·序》中指出“肢体伤于外，则气血伤于内，营卫有所不贯，脏腑由之不和”，强调了气滞血瘀是骨折后的主要病理变化。清代陈士铎在《百病辨证录》中指出：“血不活则瘀不去，瘀不去则骨不能接。”指出骨折早期中在去瘀生新，中期当以续筋接骨药物促进骨折愈合，后期主要补益类药物增强肝肾功能，加速骨折愈合。中医根据辨证分型，在不同的愈合时期给予不同的治疗方案。在早期，主要为气血瘀阻，以活血化瘀、消肿止痛为主；中期主要为血瘀气滞，以续筋接骨、行气活血为主；后期主要为肝肾亏虚，以补益肝肾、强壮筋骨为主。中医历代医家在不断的总结和创新中，积累了丰富的经验，认为不管以内服或者外用药物均有活血化瘀、消肿止痛、续筋接骨的作用，补肾药物还有壮骨长骨的功能[9]。

湛江驳骨消是一种本都道地药材，性味苦、甘、平，有祛风止痛，袪瘀，续筋接骨，在当地民间骨伤科应用流传已久，用法上包括外敷与内服。该药在缓解骨折后局部肿胀及疼痛、促进骨折愈合等方面具有明显的效果[10-11]。在本研究中，驳骨消无论外敷或者内服，均可通过改善血清钙、磷水平，提高碱性磷酸酶、骨钙素水平，促进骨折的愈合，其效果与传统中药接骨七厘片相似，骨折愈合时间情况显著优于对照组。钙磷代谢是复杂的过程，体液中钙磷浓度直接和间接影响身体生理功能。正常情况下，骨盐不断被溶解，释放钙进入血液，而骨组织又不断从血液中摄取钙原色以供骨细胞钙化，以维持骨的更新及血钙、血磷的平衡。骨折后，断端附近骨细胞繁殖、分化、增生活跃，形成骨样组织，进而钙化、骨化，这个过程中大量的骨盐形成并沉积于此，在全身个组织器官调节下，骨细胞从血液中摄取的钙增加，可见在骨折愈合期，钙元素因大量沉积在骨折部位，因此血钙水平会反而下降，给机体为了维持正常的钙磷乘积，血磷水平升高[12-13]。本研究中可看出，在第1周四组血钙水平没有显著差异，进入第2周至第4周，驳骨消内服组与外敷组以及接骨七厘片内服组血钙水平均显著下降，明显低于对照组，X线片检查结果显示，在第4周，药物治疗的三组骨折基本愈合，因此在第6周，该三组的血钙水平逐渐回升，而对照组的血钙水平仍维持在较低水平，这也证实，对照组骨折愈合延迟，而药物治疗促进了骨折愈合。王爱明等[14]研究显示，驳骨膏骨折后外敷，可显著缩短骨折愈合时间，在骨折后第2、3、4周患者血管水平下降，血磷水平升高，这与本研究结果一致。张迪晖等[15]研究显示，使用夹板内固定配合驳骨油纱外敷治疗Colles骨折时，可促进骨折肿胀消失，提示其具有祛瘀消肿的作用。

综上所述，湛江驳骨消可显著促进骨折模型鼠骨折愈合，促进钙元素向骨折部位沉积，内服与外敷具有相似的作用。