miR-1181在胰腺癌患者中的表达水平及临床意义

张珍妮 张维明 叶坤伟

胰腺癌是一种高度恶性的消化腺肿瘤，具有恶性程度高、发病隐匿、早期诊断困难及治疗效果较差等特点，导致患者病死率居高不下[1]。早期胰腺癌患者无明显体征及临床症状，大多数患者就诊时往往已进展至中晚期，已发生远处转移，不适合行手术治疗，中位生存期为6～12个月[2]。目前关于胰腺癌的早期诊断标志物及新型治疗手段的研发已成为研究热点，以期改善胰腺癌患者的预后情况，从而提高生存率。随着分子生物学的进展及检测技术的进步，越来越多的非编码RNA被报道在胰腺癌中的表达水平发生显著变化，如微RNA(miRNA)、非编码长链RNA(lncRNA)等[3-4]。王杰等[5]发现，miR-1181可抑制肿瘤干细胞的成球形成率，同时减少侧群细胞形成，参与调控肿瘤细胞生物学功能，同时该课题组在体外实验中发现miR-1181可抑制胰腺癌细胞的增殖[6]，但目前关于miR-1181在胰腺癌组织中的表达情况及其意义的报道较少。本文拟通过阐明上述问题，为胰腺癌的进一步治疗提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2016年5月至2018年9月于广西医科大学附属武鸣医院就诊的75例胰腺癌患者，所有患者入院后均接受手术治疗，留取术中的肿瘤组织及癌旁组织，同时行术中快速病理检测明确为胰腺癌。75例患者中男性37例，女性38例，年龄为45～80岁，平均年龄为(57.21±6.39)岁。肿瘤分化程度及临床病理分期参考《胰腺癌诊治指南(2014)》[7]。肿瘤分化程度：高分化者33例，中低分化者42例；发生转移(包括淋巴结及肝脏等脏器转移)患者26例，无转移患者49例；临床分期：Ⅰ期19例、Ⅱ期22例、Ⅲ期20例、Ⅳ期14例。入选标准：(1)经术中病理检验明确诊断为胰腺癌，且同意入组；(2)首次发现，既往未接受手术治疗、放射治疗、化学治疗及其他综合治疗。排除标准：(1)合并其他系统恶性肿瘤；(2)合并严重肝、肾疾病，不适宜入组者。收集患者的肿瘤组织及距离肿瘤组织边缘>2 cm的癌旁组织样本(经病理证实为正常组织)，储存于液氮中备用。本研究所有患者的诊疗方案均获得医院医学伦理委员会审核通过，并获得充分知情同意权，入组即刻签署相关知情同意书。

1.2 检测肿瘤组织及癌旁组织的miR-1181水平

液氮中取出样本组织，应用TRIzol试剂及miRNeasy RNA isolation试剂盒(德国Qiagen公司)提取相关样本组织中的总RNA，提取过程严格按照试剂盒说明书操作，通过光密度测定法测量其浓度和纯度。应用Taq-Man miRNA Reverse Transcription试剂盒反转录合成 cDNA，以U6为内参，采用qRT-PCR法检测miR-1181扩增水平，每个样本重复检测5次，采用2-ΔΔCt计算miR-1181的相对表达量。qRT-PCR反应条件为95 ℃预变性5 min；57 ℃ 40 s、72 ℃ 40 s，共 40个循环。引物序列见表1。

表1 引物序列

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 胰腺癌组织与癌旁组织中miR-1181的表达

结果显示，miR-1181在胰腺癌组织中的相对表达量为0.45±0.11，显著低于癌旁组织(1.03±0.27)，差异有统计学意义(t=17.229，P<0.001)。如图1所示。

图1 胰腺癌组织及癌旁组织中miR-1181的表达水平

2.2 单因素分析miR-1181与胰腺癌患者临床指标的关系

以胰腺癌组织中miR-1181相对表达量的中位数(0.37)为界，将患者分为高表达组(miR-1181>0.37，n=36)和低表达组(miR-1181≤0.37，n=39)。结果发现，与低表达组相比较，高表达组中临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、高分化程度、无肿瘤转移者的比例高，差异均有统计学意义(P均<0.05)。如表2所示。

表2 单因素分析miR-1181与胰腺癌临床指标的关系

2.3 二元Logistic回归分析miR-1181与胰腺癌临床指标之间的关系

由表2可知，miR-1181表达水平与胰腺癌临床分期、肿瘤转移及分化程度相关，以临床分期(Ⅲ～Ⅳ)、发生肿瘤转移及分化程度(中低分化)为自变量，以miR-1181低表达为因变量进行二元Logistic回归分析，发现miR-1181低表达与胰腺癌临床分期及发生肿瘤转移密切相关，P均<0.05。见表3。

表3 二元Logistic回归分析miR-1181与胰腺癌临床指标之间的相关性

3 讨论

miRNA作为内源性的单链非编码RNA，通过与靶mRNA的3′-UTR结合，调节基因转录后表达，影响相关蛋白合成，调控细胞生物学行为，参与多种消化道疾病的发生、发展[8-9]。有报道指出，miR-17-92可通过MEK-ERK信号通路影响胰腺癌细胞生长周期，抑制胰腺癌细胞增殖[10]；ARK5/miR-1181/HOXA10轴的激活可促进肿瘤上皮-间质转化[11]；miRNA-330-5p在结肠癌中表达下调，发挥抑制结肠癌细胞增殖的能力[12]。目前关于miR-1181参与肿瘤发生的机制研究尚少，既往有体外研究发现，miR-1181可通过抑制STAT3影响胰腺癌细胞的侵袭转移能力，该研究指出敲低miR-1181可促进STAT3表达，通过影响F-actin发挥作用，而F-actin不被剪切，有利于肿瘤细胞伪足的形成，促进胰腺癌细胞的迁移能力[13]。本研究发现，胰腺癌组织miR-1181表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)，提示miR-1181在胰腺癌组织中表达下调，与以往的报道结果相似[5,13]。此外，本研究进一步评估了miR-1181与胰腺癌患者临床特征的相关性，发现miR-1181高表达组患者中，肿瘤分期为Ⅰ～Ⅱ、肿瘤高分化程度及未发生肿瘤转移的比例均显著高于miR-1181低表达组，表明miR-1181是一种抑癌基因，可抑制胰腺癌的进展[13]。同时，二元Logistic回归分析结果也验证了miR-1181低表达与胰腺癌进展有关，其是胰腺癌临床分期(Ⅲ～Ⅳ期)及肿瘤发生转移的独立危险因素。本研究的不足之处在于为单中心研究，样本量相对较小，且未进一步分析miR-1181抑制胰腺癌增殖的具体机制及下游靶点。综上所述，miR-1181可参与胰腺癌的发生、发展，是潜在的胰腺癌治疗的基因靶点。