不同临床分型的COVID-19 患者外周血免疫细胞水平分析*

许 娇，尚鹏程，毕 雷，李青峰

(成都市公共卫生临床医疗中心，四川成都 610000)

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种由β-冠状病毒感染引起的主要表现为呼吸道感染症状的新型传染病[1]。目前已在全球多个国家和地区暴发，全国粗死亡率为2.3%[2]。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的基因序列及其S蛋白结构已被科学家发现，但由于其流行时间短和传播力强等因素使得学者们对该病毒的致病机制还未全面掌握。现阶段COVID-19治疗的工作重心是减少重症患者的发生率和病死率。本研究通过回顾本中心收治的COVID-19 患者临床资料，分析患者外周血各类免疫细胞水平的变化，以期为COVID-19特别是重症患者的诊疗提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年1月18日至2月20日在本中心治疗的94例COVID-19患者为研究对象。选取同期体检健康人员50例作为对照组。收集患者的病历相关信息，包括流行病学、人口学、临床分型以及血常规和淋巴细胞亚群检测结果。COVID-19患者的临床分型参照《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》[3]。依据患者的临床分型将患者分为轻型和普通型组(轻普型组)68例，重型和危重型组(重危型组)26例。3组研究对象一般资料比较见表1。

表1 3组研究对象的一般资料比较

1.2方法 SARS-CoV-2由成都市疾病预防控制中心采用RT-PCR法按照相关规范进行实验室确认。血常规检测采用深圳迈瑞全自动血液分析仪6900及其配套试剂进行检测，淋巴细胞亚群检测采用美国贝克曼流式细胞仪DxFLeX及其四色检测试剂盒进行检测。上述检测过程按照实验室作业指导书进行。

2 结 果

2.1COVID-19患者与对照组白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞水平的比较 COVID-19患者与对照组白细胞计数比较，差异无统计学意义(t=0.567，P>0.05)；而COVID-19患者的中性粒细胞和单核细胞水平均高于对照组，差异均有统计学意义(t=2.210、3.376，P<0.05)。而COVID-19患者淋巴细胞则明显低于对照组(t=4.785，P<0.05)。见图1。

注：ns表示差异无统计学意义，*P<0.05，**P<0.001。图1 COVID-19患者与对照组白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞水平的比较

2.2轻普型组与重危型组中性粒细胞、淋巴细胞以及单核细胞水平的比较 轻普型组与重危型组间单核细胞水平比较，差异无统计学意义(t=0.786，P>0.05)；重危型组中性粒细胞与淋巴细胞水平低于轻普型组，差异有统计学意义(t=3.900、2.566，P<0.05)。见图2。

注：ns表示差异无统计学意义，*P<0.05，**P<0.001。图2 轻普型组与重危型组中性粒细胞、淋巴细胞以及单核细胞水平的比较

2.3不同型别COVID-19患者外周血淋巴细胞亚群水平的比较 94例患者中只有49例收集到入院时的淋巴细胞亚群检测结果。按照临床分型分为轻普型A组40例和重危型A组9例。结果显示，重危型A组CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞以及CD3+CD8+T细胞水平明显低于轻普型A组，差异均有统计学意义(t=2.510、2.444、2.248，P<0.05)。见图3。

注：*P<0.05。图3 轻普型A组和重危型A组外周血淋巴细胞亚群水平的比较

2.4轻普型A组和重危型A组中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、中性粒细胞/CD8+T淋巴细胞比值(N8R)以及中性粒细胞/CD4+T淋巴细胞比值(N4R)的比较 结果显示，重危型A组NLR、N8R以及N4R均明显高于轻普型A组，差异均有统计学意义(t=6.423、4.287、6.143，P<0.05)。见图4。

注：**P<0.001。图4 轻普型A组和重危型A组NLR、N8R以及N4R水平的比较

2.5ROC曲线分析 采用ROC曲线分析各指标对COVID-19患者临床分型的诊断价值。结果显示，各指标曲线下面积(AUC)由大到小依次为N4R>NLR>CD3+CD4+T细胞>淋巴细胞>CD3+T细胞>N8R>CD3+CD8+T细胞>中性粒细胞，见表2。

表2 各指标对COVID-19患者临床分型的诊断价值

3 讨 论

COVID-19是一种传染力极强的肺炎，而目前，研究者们对SARS-CoV-2以及感染宿主后发生免疫应答反应的机制了解有限。通过对临床资料的回顾分析能够发现COVID-19的临床特征，可以为该病的防治提供线索。本研究通过分析成都地区COVID-19患者的临床资料发现，重症患者中男性明显多于女性，且重危型组患者年龄高于轻普型组患者，结果与多篇报道相似[4-5]，这些结果均提示老年男性是发生重症COVID-19的高危人群，因此，对这部分人群重点干预可有效降低COVID-19的重症率和病死率。

本研究重点分析了COVID-19患者外周血常见免疫细胞表达水平，结果显示，COVID-19患者白细胞计数与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而淋巴细胞数量明显降低，中性粒细胞以及单核细胞数量较对照组升高(P<0.05)。比较轻普型组和重危型组患者外周血中性粒细胞、淋巴细胞以及单核细胞水平时，发现重危型组患者的淋巴细胞数量低于轻普型组患者(P<0.05)，提示淋巴细胞水平与疾病的严重程度可能具有一定相关性，淋巴细胞直接或者间接受到SARS-CoV-2 的感染和攻击。关于严重急性呼吸综合征(SARS)的研究也观察到，SARS冠状病毒可感染患者淋巴细胞，对患者免疫功能造成损伤[6-7]。有学者对中东呼吸综合征(MERS)研究后发现，MERS冠状病毒(MERS-CoV)可以直接感染树突状细胞、巨噬细胞以及T淋巴细胞等多种免疫细胞[8-9]，在SARS患者中则发现病毒通过改变抗原提呈细胞的功能以及损伤树突状细胞的迁移来诱导T细胞的功能缺陷[10]，SARS-CoV-2 引起淋巴细胞降低的具体机制还有待进一步的研究。

本研究对COVID-19患者外周血淋巴细胞亚群水平进行分析，结果显示，重危型A组患者的CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞以及CD3+CD8+T淋巴细胞水平均低于轻普型A组患者(P<0.05)。CD3+CD8+T淋巴细胞是人体内主要的具有病毒杀伤功能的免疫细胞，其数量减少往往表示患者的细胞免疫功能受损，COVID-19重症患者CD3+CD8+T淋巴细胞水平降低提示重症患者的细胞免疫功能较差，其具体机制还有待研究。CD3+CD4+T淋巴细胞则是免疫系统的重要调节细胞，其各种功能是通过分泌细胞因子来实现的，CD3+CD4+T淋巴细胞水平降低可能因为病毒导致体内细胞因子的大量产生，而引起CD3+CD4+T淋巴细胞的过度消耗。细胞因子水平升高甚至细胞因子风暴在SARS-CoV 或者 MERS-CoV 感染引起的急性肺损伤中已得到了证实[11-12]，COVID-19患者细胞因子水平及其与CD3+CD4+T淋巴细胞水平之间的关系还有待进一步的研究和证实。在分析轻普型A组和重危型A组患者NLR、N8R以及N4R水平时发现，重危型A组患者的3个指标水平均显著高于轻普型A组患者(P<0.05)，与患者外周血CD3+CD4+T淋巴细胞以及CD3+CD8+T淋巴细胞水平的表达相反，但4种指标均能反映重症患者与轻症患者之间的差异[13-14]。NLR、N8R以及N4R与COVID-19患者病情轻重程度的关系有待进一步研究和阐述。

本研究采用ROC曲线分析了中性粒细胞、淋巴细胞、CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、N4R、NLR、N8R对COVID-19患者临床分型的诊断价值，结果显示N4R、NLR以及淋巴细胞水平均有较好的检验效能，说明以上指标可辅助诊断COVID-19轻型患者和重型患者。

4 结 论

COVID-19患者的外周血淋巴细胞数量降低，且重症患者淋巴细胞水平显著低于轻症患者；外周血免疫细胞的检测水平可用于COVID-19患者临床分型的辅助诊断。