乙型肝炎病毒血清标志物常用检测方法的比较

【摘要】目的：比较时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）在乙型肝炎病毒血清中五种标志物检测中的优劣。方法：选取已经确证的80例患者标本，分别采用TRFIA和ELISA两种方法检验，对实验结果有差异的标本采取双孔平行试验，保障结果有效可靠。结果：阳性检出率高的是时间分辨荧光免疫技术对HBcAb、HBeAb的比较差异有重要统计学意义（P<0.05），相反这两种方法对其他三种HBVM检出阳性率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：这两种常见的方法都是可以用于乙型肝炎诊断，符合率也比较高，但是时间分辨荧光免疫技术阳性检验率比较高、特异性更高稳定性也更加好，可以更好的对乙型肝炎患者体内的病原体定量， 该实验结果分析对临床医师诊治乙型肝炎疾病提供比较重要的科学依据和实验数据，有发展推广应用的价值。

【关键词】乙型肝炎病毒;酶联免疫吸附试验;时间分辨荧光免疫

【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2020.12.274

1 资料与方法

1.1对象

选取本院2018年-2019年一年中收治的乙肝患者随机抽取其中80例作为本次实验研究对象，80例病患都已完全符合乙型肝炎临床诊断标准，抽取患者血清样本化验分析。

1.2方法

嘱咐患者抽血前几天不饮酒，不吃过于油腻辛辣的东西。在几天后早上患者处于空腹状态 抽取每位患者5～10ml静脉血，然后放置在促凝剂黄色真空管内和含惰性分离胶内，用离心机分离血清样本，然后进行检测，严格遵守试剂盒说明书方法和检测仪器的操作规范来进行。酶联免疫吸附法为定性检测方法，先把试剂盒拿出恒温室，使用加样枪滴取微量样本于板孔底部，再加稀释液振荡混匀后上机检测。依据仪器检测结果判读阴性或者阳性，若HBV-M中的某一项为弱阳性则将其标记并设置2个平行孔复查。同样的患者标本，时间分辨荧光免疫法为定量检测方法，检测时同样先将试剂从冰箱复温，检查仪器是否正常以及准备工作完成后，直接将患者血清样本上机进行测试，将测试结果与正常范围参数进行对比，超出正常参考范围值则判断为阳性，相反为阴性。

1.3观察指标

用不同方法记录分析对乙型肝炎病毒标志物的阳性数目，并计算其阳性检出率。酶联免疫吸附法依据HBcAb、HBeAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg各项指标的密度来判读阴、阳性;时间分辨荧光免疫法检测指标及其正常范围为HBcAb（0～0.9 PEU/ml）、HBeAb（0～0.2 PEU/ml）、HBsAb（0～10 mU/ml）、HBeAg（0～0.5 PEU/ml）、HBsAg（0～0.5 ng/ml），指标值超过正常范围则视为阳性。阳性率=（阳性的列数/总例数）×100%。阳性符合率=（ELISA阳性检出例数/TRFIA阳性检出例数）×100%。

2 结果

通过实验结果见表1。

3 讨论

通过本研究计算表明利用时间分辨荧光免疫法检出的HBcAb和HBeAb的阳性率都显著高于酶联免疫吸附法，其中的差异性都有重要统计学意义，其余各指标相互间无比较差异和无统计学意义。

通过对抗体抗原酶标记在载体上来进行定性分析是传统技术酶联免疫吸附法的核心原理，对血清检标本检测不能定量但是能定性，有操作简单承认低检测出结果快的优点，所以毕竟符合病毒的初步筛查核验，适合条件不是很好的基础医疗诊所应用;但是无法对病毒进行定量检测，只能定性检测分析，没有办法对血清中的病毒动态检测计算，检测灵敏度比较多，人工检测操作易污染，如果患者血清中含有的病毒浓度较低就比较难以检测出来，无法为临床诊治医师提供详细的数据来判定患者的感染情况，病毒的复制情况，从而达不到临床合理用药和诊治。时间分辨荧光免疫法检测能够覆盖传统酶联免疫吸附试验一些不足，通过延长响应时间，有效降低非特异性荧光信号干扰，甚至可以忽略检测灵敏度高，血清病毒标志物的特异性含量可通过标准曲线详细分析得到。因此，时间分辨荧光免疫分析法弥补了酶联免疫吸附法不能准确定量分析的缺陷，整个血清样本检测过程由自动检测仪完成，避免了人为操作和技术差异造成的检测误差，保证了检测结果的准确性和可靠性。与其他检测方法相比，有比较大的优势，值得推广应用

4 结论

综上所述，酶联免疫吸附试验（ELISA）可用于基础设施落后的基层医疗机构。它具有技术要求低、检测方便、快速、经济等特点。时间分辨荧光免疫分析具有灵敏度高、特异性强、核心抗体检出率高的特点。因此，对乙型肝炎患者的诊断更为准确可靠，同时，适用于已感染者，能准确分析血清样本，得到特异性病毒含量。为临床感染程度和疾病发展程度提供了明确的参考依据，为临床医生治疗乙肝患者提供了重要的科學依据。从而达到降低患者发病率的目的。

参考文献：

[1]王丽萍.时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的对照探究[J].国际检验医学杂志，2015，19（7）：994-995. 

[2]董志宁.乙型肝炎病毒表面抗原光激化学发光免疫测定试剂及人类免疫缺陷病毒时间分辨荧光免疫检测试剂的研制[D].广州：南方医科大学，2012. 

[3]罗惟，张杰.时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较[J].现代医药卫生，2015，25（12）：1855-1856.

作者简介：

范芬芬（1976.2-），女，汉族，河南省灵宝市，大专，技师，研究方向：医学检验。