湖羊长期冷冻精液和胚胎复苏繁育研究

章晓炜 刘莉君 马敏彪 刘雅丽

摘要：近年来，浙江省湖羊保种以活体保种为主，种羊场选种选育方向较为单一，羔皮特性逐渐减弱，公羊血统扩充困难。为进一步做好湖羊种质资源保护工作，浙江省专门向农业农村部畜牧业司申请使用湖羊冷冻精液和胚胎，在国家级保种场浙江华丽牧业有限公司和省级保种场长兴永盛牧业有限公司开展了湖羊冷冻精液和冷冻胚胎试验，共产羔羊103只，其中活羔95只。成功复苏繁育出冷冻羊，有较高的胚胎复苏产羔成功率、冷冻精液受孕分娩率及羔羊成活率，从冷冻羊初生鉴定和生产性能等结果，成功验证了生物保种保存技术的可行性。

关键词：湖羊;遗传物质;冷冻保存;复苏与繁育

湖羊是我国特有的优良地方品种，也是浙江省优势特色畜牧产业，因湖羊养殖具有节粮、绿色、低排放等优点，已成为现代畜牧业转型升级的领头羊、推进畜牧业供给侧结构性改革的重要突破口。2013年，浙江省启动实施了“湖羊产业振兴计划”，2015年，浙江省农业厅印发了《湖羊、兔、蜜蜂等特色优势畜牧业提升发展三年行动计划（2015—2017年）》，全省各级农业部门以实施提质增量、秸秆换肉、种业提升和精品培育四大行动为主要抓手，强力推进湖羊特色产业提升发展，取得了明显成效。但受市场需求影响，近年来湖羊种羊场选种选育方向较为单一，羔皮特性逐渐减弱，公羊血统扩充困难。为进一步做好湖羊种质资源保护工作，浙江省专门向农业农村部畜牧业司申请使用湖羊冷冻精液和胚胎，在国家级保种场浙江华丽牧业有限公司和省级保种场长兴永盛牧业有限公司开展了湖羊冷冻精液和冷冻胚胎试验，共产羔羊103只，其中活羔95只。

1  申请使用湖羊遗传物质

2018年2月，浙江省向农业农村部畜牧业司申请使用湖羊遗传物质，农业农村部全国畜牧总站先后两次派专家考察试验点试验条件，最终批复浙江使用1998年3只公羊的75剂冻精、1988年5只公羊的27剂冻精、1998年的4对公母羊的24枚胚胎。经查找历史档案，本次在浙江使用的冻精来自8只公羊，其中1988年制作的安瓿冻精27剂，来自5只公羊，无系谱档案，按5个血统计算;1998年制作的细管冻精75剂，来自余杭湖羊场（现为浙江华丽牧业有限公司）的3只公羊， 3只公羊为2个家系。冷冻胚胎24枚分别来自4对不同的公羊和母羊，其中2对采集吴兴区种羊场，2对采集于浙江华丽牧业有限公司。

2 商定湖羊冻精和胚胎繁育及复苏试验实施方案

在前期多次湖羊保种场实地考察调研的基础上，2月份浙江省畜牧兽医局组织召开湖羊冻精和胚胎试验论证会，与会专家详细分析了湖羊冻精和胚胎的系谱档案，1988年采集制作的冻精由于历史悠久，无详细档案（仅专家回忆采集于湖州吴兴区），1998年制作的冻精和胚胎采集于我省湖州吴兴区和杭州余杭区（现浙江华丽牧业有限公司）。综合考虑冻精和胚胎的采集历史、采集地点、公羊系谱、现有保种场试验条件和母羊状况等因素，最终确定湖羊冻精和胚胎试验选择在国家级保种场浙江华丽牧业有限公司和省级保种场长兴永盛牧业有限公司。

3 开展湖羊冻精和胚胎试验复苏繁育实验

3.1 挑选受体母羊并单独组群

邀请省内湖羊专家进场挑选受体母羊，选择遗传背景尽量一致，系谱记录完善，家系不同，健康，繁殖性能好（母性好），年龄在2～4胎的母羊。经专家挑选，永盛牧业选择10个家系60只母羊;华丽牧业选择7个家系90只母羊。

3.2 胚胎移植和冻精配种操作

在前期同期发情处理的基础上，从4月11日开始，由全国畜牧总站邀请国内专家采用内窥镜子宫角输精手术操作方式进行胚胎移植和冻精配种。本次实验24枚胚胎共移植到9只母羊（胚胎解冻镜检发现有2枚胚胎为不可用胚胎，9只母羊种4只母羊移植了3枚胚胎，5只母羊移植了2枚胚胎）;冻精配种共计79只母羊，其中华丽牧业配种46只，永盛牧业配种33只;鲜精对照组配种共计40只母羊，其中华丽牧业配种20只，永盛牧业配种20只。

3.3 B超妊娠检查

6月4～5日，在冻精配种和胚胎移植55天左右，邀请省农科院专家对所有冻精配种和胚胎移植的母羊開展妊娠检查，B超妊娠初步检查结果，永盛牧业冻精配种母羊怀孕10只，待确定8只;华丽牧业冻精配种母羊怀孕22只，待确定1只;胚胎移植母羊怀孕2只，对确认怀孕的母羊个体拍照存档。8月24日，产前肉眼观察，再次确认妊娠结果，永盛牧业冻精配种母羊33只，怀孕25只;华丽牧业冻精配种母羊46只，怀孕23只;华丽牧业胚胎配种母羊9只，怀孕6只，补拍了怀孕母羊个体照片存档。

3.4 冻精配种和胚胎移植羔羊出生

从8月29日至9月14日，冻精配种和胚胎移植的羔羊陆续出生，胚胎移植的母羊6只分娩，共出生9只，活羔8只;冻精配种的母羊48只分娩，共出生94只，活羔87只。鲜精对照组怀孕分娩母羊30只（永盛牧业16只，华丽牧业14只），出生羔羊共计68只，存活64只。

3.5 冻精和胚胎羔羊初生鉴定

羔羊出生后，邀请专家对小羔羊进行初生鉴定，按照湖羊国标要求，对羔羊初生重、花纹类型、花纹面积、花纹宽度、毛长、花纹紧密度、羔皮等级进行鉴定。

4 结果与分析

4.1 初生重

8只胚胎活羔的羔羊平均初生重3.59公斤;87只冻精活羔羊平均初生重3.28公斤，其中1988年冻精活羔平均初生重2.98公斤，1998年冻精活羔初生重3.48公斤;对照组鲜精的64只活羔羊平均初生重2.98公斤。

4.2  性别比例

对95只活羔羊公母进行鉴定，其中公53只，母42只，公母比1.26∶1（胚胎羔羊公母比0.6∶1，1988年冻精羔羊公母比0.96∶1;1998年冻精羔羊公母比2.56∶1）;对照组鲜精公羊37只，母羊27只，公母比1.37∶1。

4.3  优质羔皮羊比率

对湖羊冻精和胚胎95只活羔羔皮邀请专家进行鉴定，其中甲级羔皮羔羊32只、甲级羔皮占比34%（胚胎羔羊中甲级羔皮羊3只，甲级羔皮占比38%;1988年冻精甲级羔皮羔羊22只，甲级羔皮占比40%;1998年冻精甲级羔皮羔羊7只，甲级羔皮占比22%）。对照组64只活羔羊，其中甲级羔皮羔羊7只、甲级羔皮占比11%。

4.4  分娩率

本次冻精配种和胚胎移植试验羊母羊共计88只（其中胚胎移植9只，冻精配种79只），受孕分娩54只（胚胎6只，冻精48只），分娩率61%（其中胚胎移植母羊6只受孕分娩，受孕分娩率67%）;1988年冻精配种50只，受孕分娩32只，受孕分娩率为64%;1998年冻精配种29只，受孕分娩16只，受孕分娩率55%;对照组配种40只，受孕分娩30只，受孕分娩率75%。

4.5  冻精配种产羔率

湖羊冻精生出羔羊共计94只，受孕分娩母羊平均产羔1.96只，产羔率196%（其中1988年冻精羔羊出生61只，平均产羔1.91只，产羔率191%;1998年冻精羔羊出生33只，平均产羔2.13只，产羔率213%），对照组产羔68只，平均产羔2.27只，产羔率227%。

4.6 胚胎移植复苏产羔成功率

胚胎移植24枚（其中2枚不可用），复苏成功产羔9只，胚胎复苏产羔成功率38%。

4.7  活羔率

湖羊冻精和胚胎羔羊共计产活羔95只，活羔率92%，其中胚胎活羔羊8只，活羔率89%;1988年冻精活羔羊55只，活羔率90%;1998年冻精活羔33只，活羔率97%;对照组活羔64只，活羔率94%。