正交实验优选醋制当归炮制工艺*

杨宋一莎，聂诗明，刘艺莹，余晗，刘艳菊，宋天宝

(1.湖北中医药大学药学院，武汉 430061；2.武汉大学基础医学院，武汉 430071)

当归为伞形科植物当归[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根，具有补血活血、调经止痛、润肠滑肠功效，为临床使用频率最高的中药之一。醋当归仅见于名老中医用药及古籍记载，醋制的意图在清代《本草述钩元》中记载：“如吐衄崩下药中，须醋炒过，少少用之，多则反能动血[1]。”清《本草必用》：“酒洗去节，入止血药中醋炒。”古人认为醋制缓当归辛烈之性而专于止血，为止血崩或治吐血可醋炒用之。醋当归饮片并未列入《中华人民共和国药典》，笔者未见炮制工艺研究及相关现代研究，基于古代用药经验及中医处方用药需求，有必要对其探讨开展相关研究，以更好地传承祖国医学。笔者在本实验通过正交实验法，以鞣质、阿魏酸和挥发油含量为考察指标，研究醋当归炮制工艺，以期为醋当归饮片生产企业提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 安捷伦1260液相色谱仪(美国 Agilent公司，UV检测器)；HP色谱工作站 (美国Agilent公司)；BP121S分析天平(德国Sartorius公司，感量：0.1 mg)；BP211D分析天平(德国Sartorius公司，感量：0.01 mg)；PM PLUS 型红外测温仪 (美国 Raytek 公司) ；C18色谱柱(Thermo，4.6 mm×250 mm，5 μm)；圆底烧瓶；电热恒温鼓风干燥箱(SFG-02.500)；PTHW型普通恒温电热套；KQ-400KDB 型高功率数控超声波清洗器 (江苏昆山市超声仪器有限公司)；CY-640型炒药机(周口制药机械厂有限公司，设备参数：50～180 kg·h-1，28 kW)。

1.2试药 当归药材{湖北天济中药饮片有限公司，经湖北中医药大学中药鉴定教研室杨红兵教授鉴定为伞形科植物当归[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根}。老陈醋[山西水塔醋业股份有限公司，浓度：6 g·(100 mL)-1]，阿魏酸对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号：H27J7L16718)，没食子酸对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号： YA0505YA14，20 mg，含量≥98%)，乙腈(色谱纯，Thermo)，磷酸，超纯水(优普超纯水器制备，UPCII-20T)，其余试剂均为分析纯级别。

2 方法与结果

2.1因素水平的设计 根据预试验与相关文献并结合实际，针对炮制工艺对饮片质量的影响，主要因素为辅料用量、炮制时间、炮制温度，因此选取醋用量、炒制温度、炒制时间3个因素，进行L9(34)正交设计实验考察，以确定其合理炮制工艺条件参数。其因素水平设计见表1。

表1 因素水平

2.2实验方法 取净当归片9 份，每份400 g，按表1设定组合条件，均用电热炒药机炒制，炒制温度通过红外测温仪监测控制锅底温度。具体操作方法如下： 取净当归400 g，加醋拌匀，闷润1 h，炒制，取出，放凉，筛去碎屑，封口袋密封，即得1～9号样品。

2.3检测项目 根据中药炮制存性的基本要求，当归为调血之要药，现代研究表明其活血化瘀主要活性成分为阿魏酸、挥发油等，所含鞣质则具有较确切的止血功能，因此，将阿魏酸、挥发油、鞣质作为考察指标，分析不同炮制条件的影响。

2.3.1鞣质含量测定 将醋当归样品粉碎，过三号筛(筛孔内径297 μm)，取粉末适量，精密称定，按《中华人民共和国药典》2015年版(四部)通则2202测定鞣质含量，同时进行干酪素吸附空白实验，计算扣除空白值。结果见表 2。

2.3.2阿魏酸含量测定 将醋当归样品粉碎，过三号筛(筛孔内径297 μm)，取粉末适量，精密称定，按《中华人民共和国药典》2015年版(一部)当归项下含量测定法测定样品阿魏酸含量。

2.3.3挥发油含量测定 将经不同炮制方法处理的醋当归样品粉碎，使能通过二号至三号筛(筛孔内径297 μm)，取粉末适量，称定质量，按《中华人民共和国药典》2015年版(四部)通则2204挥发油测定法乙法测定，读取挥发油量，并计算醋当归中挥发油的含量(%)。

2.4评分标准 笔者在本实验采用多指标加权评分法处理试验数据：对应每个成分以含量最高的样品定为100分，其余各次的试验依次换算成相应的指标分数(计算公式为a/b×100%，其中a为实际值，b为9个值中最大值)。权重的分配，鞣质易与蛋白质结合，使创伤组织表面形成痂膜，减少分泌与血浆渗出，其药理作用表现为能在血管破损处形成硬块而止血。鞣质在内服或外用时，均具有止血和收敛的功效[2]。研究报道止血功效与炮制后鞣质含量增加呈正相关[3]。因此，将醋当归中鞣质含量的权重设为60%；阿魏酸和挥发油作为当归的主要有效成分，且2015年版《中华人民共和国药典》规定其为评价当归质量的指标性成分，其作用与当归主要功效一致：阿魏酸具有抗炎、止痛、抗血栓形成等药理作用[4-5]；当归挥发油的主要成分藁本内酯，具有抗血栓、抑制血小板聚集、抗贫血、缓解平滑肌痉挛等作用[6-8]。因此各给予20%权重。

综合质量评分=(各样品中挥发油含量/9个样品中挥发油最高含量)×20%+ (各样品中阿魏酸含量/9个样品中阿魏酸最高含量)×20%+(各样品中鞣质含量/9个样品中鞣质最高含量)×60%。

2.5结果 挥发油、阿魏酸、鞣质含量正交实验成分测定和评分结果见表2，正交综合评分方差分析表见表3。

方差分析表明，3个影响因素顺序为B>A>C，在给定的水平条件下，即炒制温度>醋用量>炒制时间，其中炒制温度对炮制工艺的影响有显著差异。结合直观分析，优选工艺可定为A3B1C2，即15%醋，在进药锅温为120 ℃下炒制6.5 min。

2.6验证实验 按优选的炮制工艺条件制备3批醋当归样品，对其进行挥发油、阿魏酸和鞣质含量测定。综合评分均值为95.33，且各指标的RSD<0.5%(n=3)，说明制备出的醋当归质量稳定，优选出的工艺稳定、可行、合理。实验结果见表4。

2.7中试验证 取3批生当归各1.7 kg，按优选的炮制工艺进行中试试验，由于参数放大，药材炒制效率降低，根据实际中试炒制情况，因已达到工厂所用仪器生产的批量要求，故将炒制时间延长至13.5 min。结果见表5，综合评分均值为96.21，且各指标的RSD<1%(n=3)，说明优选的工艺能适合于工业化生产。见表5。

3 讨论

鞣质、阿魏酸和挥发油为当归理血功效的活性成分，且含量受炮制条件的影响。因此，笔者在正交实验中选择鞣质、阿魏酸和挥发油含量(均以干燥品计算)作为正交实验的主要评价指标。评分采用各指标当次实验实际值占9次实验最高值的比值按百分制进行打分，再通过不同权重进行统合计分，经统计得到优选工艺，即醋当归的炮制工艺，确定为用15%醋，在120 ℃下炒制6.5 min。验证实验和中试实验数据表明，优选的炮制工艺条件制备的醋当归质量稳定，说明优选出的工艺稳定、合理、可行。

表2 挥发油、阿魏酸、鞣质含量正交实验成分测定和评分结果

表3 正交综合评分方差分析

表4 挥发油、阿魏酸、鞣质含量和综合评分结果

表5 挥发油、阿魏酸、鞣质中试含量和综合评分结果

研究显示，影响当归醋制效果的因素顺序为炒制温度>醋用量>炒制时间，其中醋当归的炒制温度对炮制品质量有显著性影响，应给予重视。炒制温度导致挥发性成分散失、阿魏酸含量减少、鞣质类成分增加，与文献报道一致[9-10]。

本实验以鞣质、阿魏酸和挥发油3项指标加权评分醋当归的质量，能较好地体现醋当归的质量内涵，评级方法合理，实验结果可靠。优选的工艺为产业化生产提供了科学依据。

醋当归的处方应用已有较长的历史，但当今仅见于少数名中医的用药经验，现行中药饮片缺乏该品种，更无醋当归的炮制方法和饮片标准。我国传统炮制中药特点就是通过炮制，从而达到改变药性、扩大用药范围的目的。鉴于目前对于醋制当归的炮制方法、炮制原理、临床应用等方面的研究不足，总结历史用药经验，结合现代科学技术，开展相关研究和探讨，对传承祖国医学、传承我国古代炮制经验、炮制理论及丰富中医临床用药具有重要意义。