不同免疫检测法在检测乙肝血清学标志物(HBsAg)中的价值对比

广东省茂名市电白区人民医院（525400）张北华 潘伟光

乙型肝炎病毒一种嗜肝细胞病毒，可引起乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）导致肝脏的病变，最终可发展成肝癌[1]。当乙型肝炎病毒复制活跃时，具有极强传染性，可通过血液和接触破损的皮肤黏膜等传染，严重危害人们的健康[2]。目前，临床实验室主要检查乙肝血清学标志物作为诊断依据之一，主要以HBsAg指标协助早期的诊断。为了及时、准确的发现乙型肝炎病毒的感染，通过早发现继而早诊断并得到最佳的治疗以改善患者的预后，选择最佳的检测方法是实验室检查值得探讨的问题。本文旨在研究不同免疫检测法在检测乙肝血清学标志物(HBsAg)中的价值对比。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2017年7月～2018年6月我院就诊于肝病门诊患者的血液标本共500例，其中男267例，女233例，年龄17～75岁，平均（46.23±6.72）岁。参考《WS299-2008乙型病毒性肝炎诊断标准》为诊断标准[3]，经病理确诊275例。纳入标准：患者及家属自愿签订知情同意书；配合临床检查者。排除标准：合并肿瘤及严重肝肾功能不全疾病者；不依从检查者。研究方案报经医院伦理委员会审议通过。

1.2 方法 于清晨空腹采集门诊患者静脉血10mL，离心、分离血清，将血清均分为三份，储存待检。采用酶联免疫法、免疫胶体金法、化学发光免疫分析法分别测定乙肝五项血清标志物，均严格按照标准步骤操作。酶联免疫法采用北京万泰生物药业股份有限公司生产的ELISA试剂盒；免疫胶体金法采用珠海丽珠试剂股份有限公司的胶体金免疫层析法试纸条；化学发光免疫分析法采用迈克全自动化学发光测定仪IS1200全自动化学发光测定仪及配套试剂。

1.3 观察指标 比较三种不同方法检测乙肝五项（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）血清标志物的阳性率，参考标准[4]：HBsAg＞0.2ng/mL时，HBeAb＞0.2PEIU/mL，HBeAg＞0.5PEIU/mL，HBsAb＞0.5ng/mL，HBcAb＞0.9PEIU/mL为阳性；比较三种不同方法检测乙肝血清学标志物（HBsAg）的灵敏度和特异性。

1.4 统计学处理 采用SPSS22.0进行统计分析，计数资料n(%)表示，行χ2检验比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2 结果

2.1 三种方法检测结果比较 乙肝五项血清标志物阳性率从高到低依次是：化学发光免疫分析法、酶联免疫法、免疫胶体金法，差异有统计学意义（P＜0.05）。见附表1。

2.2 三种检测方法灵敏度和特异性比较 灵敏度：化学发光免疫分析法高于酶联免疫法（χ2=21.626，P=0.000），酶联免疫法高于免疫胶体金法（χ2=4.849，P=0.028）差异有统计学意义（P＜0.05）；特异性：化学发光免疫分析法高于酶联免疫法（χ2=2.438，P=0.118），酶联免疫法高于免疫胶体金法（χ2=2.957，P=0.086）差异无统计学意义（P＞0.05）。见附表2。

3 讨论

乙型病毒性肝炎是一种以肝脏病变为特征的传染性疾病，乙肝病毒(HBV)为主要致病病毒，通过血液、性传播，成为全球性共同面临的传染性疾病。有报道显示[5]，与世界各国相比，在我国乙型病毒性肝炎疾病负担最为严重。新发和慢性乙型病毒感染者依然很多，仍然面临着预防、筛选、治疗等问题，因此要高度重视乙肝的防治工作。临床实验室的准确检测对于早期筛查和临床诊断，指导其治疗，有非常重要的临床价值。目前实验室乙肝五项血清学检测结果是作为临床诊断乙肝病毒、判断传染病性及病程的主要依据。人体感染乙肝病毒后，其病毒DNA经过转录、复制、翻译等系列变化，最早暴露出乙型肝炎表面抗原（HBsAg），通过检测HBsAg反映乙肝病毒的感染情况[6]。目前临床实验室常采用酶联免疫法、免疫胶体金法、化学发光免疫分析法等方法进行检测。

酶联免疫法是运用放射免疫技术来检测体液中微量物质的固相免疫测定方法。它的原理是让受检标本与抗原或抗体和酶连接成具有保持其免疫活性的酶标抗原或抗体结合，使其结合物与固相载体表面的抗原或抗体反应，通过洗涤的方法分离形成的抗原抗体复合物，再加入底物后，经酶的催化作用变为有色产物，通过观察颜色的深浅多少来定性或者定量的分析。酶联免疫法因其检测费用实惠，灵敏度和特异度较高等优点，广泛应用于乙型肝炎病毒的临床检测。但是也有步骤较多，操作时间长，操作过程可能会发生不稳定因素导致感染，影响其灵敏度和特异性，具有一定的局限性[7]。

附表1 三种检测方法检测结果比较[n(%)]

附表2 三种检测方法灵敏度、特异性比较

免疫胶体金法是以胶体金标记与抗原抗体反应相结合的免疫标记技术。该检测方法具有操作简便，时间短，成本低廉且胶体金本身为红色，不需加上色剂，对人体安全的优点。有临床研究提示[8]，免疫胶体金法对于浓度低呈弱阳性的标本检测力不够，容易出现假阴性的结果。

化学发光免疫分析法是运用化学发光物质经氧化等化学反应后形成激发态中间体通过免疫反应系统标记在被检测标本上，再用化学方法测定从激发态到基态状态发出的光子量的方法。此方法结合了的化学发光测定技术的高灵敏度与免疫反应的高特异性等优势，检测范围更广，是目前应用极为广泛，最为先进的标记免疫测定技术，尤其对于定量的检测。

本次研究通过以上三种方法检测乙肝血清学标志物（HBsAg），以病例确诊为金标准，进行准确度对比。结果显示，乙肝五项血清标志物阳性率最高为化学发光免疫分析法，最低为免疫胶体金法；化学发光免疫分析法的灵敏度均高于酶联免疫法和免疫胶体金法，有统计学差异；特异性方面，化学发光免疫分析法均高于酶联免疫法和免疫胶体金法，无统计学差异。说明对乙肝病毒血清学标志物检测中的灵敏性和检出率化学发光免疫分析法高于酶联免疫法和免疫胶体金法，可早期、准确的反应乙型肝炎病毒感染程度。化学发光免疫分析法出特有的灵敏度和特异度外，因实行全自动化，有配套的试剂，且弥补了酶联免疫法操作繁杂等问题，减少了环节误差，对检测结果具有很高的检出率，对于进行定量的检测，可极大的避免假阴性率，提高了灵敏度，对于避免漏诊、误诊有重要的意义[9]。因此检测乙肝血清学标志物的临床价值均高于酶联免疫法和免疫胶体金法。同时其费用也较高。通过本研究结果发现，三种方法在特异度方面相差不大，对于免疫胶体金法，其操作简便，快速等优点可用于急诊等需快速出结果的检测中。有研究报道[10]，酶联免疫法价格低，与化学发光免疫分析法相比，其高灵敏度和特异性，用于大批量检测标本有优势。

综上所述，三种方法中以化学发光免疫分析法检测乙肝血清学标志物（HBsAg）效果最佳，价值高。但在临床中还需根据具体情况结合三种方法的优势进行检测。