2019年河南省新城疫专项监测评估

杨海波，王英华，宋 丹，程 果，方先珍， 闫若潜

(河南省动物疫病预防控制中心，河南 郑州 450000)

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的一种禽类的高度接触性烈性传染病，曾多次在世界范围内流行，对养禽业造成巨大经济损失。新城疫被世界动物卫生组织(Office Interirnation Epizooties,OIE)列为必须报告的动物疫病之一，被我国列为一类动物疫病[1]。NDV主要侵害鸡和火鸡，也可感染鸭、鹅等水禽，人偶尔也可感染[2，3]。禽感染 NDV 的主要表现为：病鸡呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜浆膜出血。新城疫病毒高毒株，被认为是一种人畜共患病毒，其潜伏期约48 h[4]。

据文献报道，新城疫病毒只有1个血清型、分为10个基因型[5]，在一些地区有基因Ⅷ型和Ⅸ型引起的散发流行，引起暴发流行的是基因Ⅶ型NDV[6]。新城疫流行范围很广，在我国大部分地区均有报道，该病流行的优势基因型为Ⅶ型，NDV的基因也在不断地发生着变异，其变化呈生物多样性[7]。

2019年3-6月份，从18个省辖市共采集禽病原学和血清学样品5 753份，分别进行了血清学和病原学检测，以期了解河南省鸡群新城疫病毒的抗体水平和感染情况，为河南省禽场ND防控预警提供科学数据，减少ND的发生和流行。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2019年3月-6月份从河南省18个省辖市共采集5 753份样品，其中病原学样品3 532份，来自于114个场点(鸡场97个，鸭场9个，鹅场5个，野鸟栖息地3个)，血清学样品2 221份，来自于74个鸡场。采样原则：每个省辖市随机抽6个场点，包括 1个活禽交易市场、2个种禽场 (含 1个肉种鸡场)、 1个商品禽场、1个水禽场、1个屠宰场的家禽进行监测,水网密集区选择1个野鸟栖息地。每个禽场随机抽取30份样品。

1.2 主要仪器与试剂

7500荧光定量PCR仪，由ABI公司生产；NP968全自动核酸提取仪，由西安天隆科技有限公司生产；BIOgafe 12二级生物安全柜，由上海力申科学仪器有限公司生产。

核酸提取试剂盒(批号：E0119040111)，由苏州天隆生物科技有限公司生产；新城疫病毒核酸检测试剂盒(批号：20190307)，由中山达安基因股份有限公司生产；新城疫抗原(批号：20180503)，由哈尔滨维科生物科技有限公司生产。

1.3 检测方法

参照国家标准《新城疫诊断技术》[8]，采用血凝抑制试验 (HI)检测血清样品；依据《新城疫病毒荧光RT-PCR检测方法》(FKZX/S Y005-2017)检测病原。

1.4 样品的实验室检测

参照国家标准，对采集的血清样品，用血凝抑制试验检测新城疫病毒免疫抗体。HI抗体效价≥24，判定为个体合格；存栏禽群抗体合格率≥70%，判定为群体合格。将采集的咽喉/泄殖腔拭子、粪便样品按照核酸提取试剂盒操作步骤进行，取200μL待检样品，加入含胰酶的核酸提取板中，用磁珠法提取RNA，然后用荧光RT-PCR检测试剂盒对核酸进行NDV检测。

1.5 检测结果的分析

血清学和病原学检测结果，在办公软件Excle 中录入、整理并绘制表格，分别从时间分布、空间分布及群间分布方面进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 总体检测结果分析

共检测74个场点的血清样品，其中合格场群 74个，平均场群合格率为 100%；共检测血清样品2 221份，检出合格样品2 015份，鸡新城疫的抗体平均合格率为90.72%，说明我省新城疫免疫效果较好；病原学共检测114个场点的拭子样品，有2个场点检测出新城疫病毒核酸阳性，群体检出率为1.7%，3 532份病原学样品中共检测出7份阳性，个体阳性率为0.19%。阳性样品主要集中在市场样品和屠宰场样品，其中市场样品的检出率最高,个体阳性率为0.38%。

2.2 不同时间的检测结果分析

本次采集的样品主要集中在3、4、5月份，抗体检测结果显示，新城疫病毒抗体合格率最高的是3月份，合格率为100% ，其次是 5月份，抗体合格率是89.48%；4月份抗体合格率是88.91%。病原学检测阳性检出率最高的是5月份，共检测出7份新城疫病毒阳性，3月和4月份未检出NDV阳性样品，出现差异的原因可能是，这三个月样品数量分布不均匀。

2.3 不同区域的检测结果分析

从全省5个区域的抗体检测结果看，新城疫以豫南地区的抗体合格率最高(94.98%)，其次为豫东地区(93.88%)、豫中地区(92.29%)，豫北地区(86.84%)，豫西地区的抗体合格率最低(85.91%)；全省5个区域的病原学检测结果显示，新城疫病毒主要在豫北地区有检出，共检测出7份新城疫病毒核酸阳性，其他四个区域均未检出，见表1。

表1 不同区域新城疫的血清学和病原学检测结果

2.4 不同场点的检测结果分析

不同监测场点禽的平均免疫合格率进行比较，种禽场抗体合格率最高(98.63%)，其次是商品场(98.45%)、农贸市场(96.67%)，屠宰场的抗体合格率最低(46.66%)；病原学检测结果显示，商品场的检出率最高，检测出5份阳性新城疫病毒，阳性率为0.20%，农贸市场检测出2份阳性新城疫病毒，阳性率为0.38%，详见表2。种禽场、屠宰场及野禽栖息地样品中未检出新城疫病毒阳性，可能是由于商品场的样品基数相对较大。

表2 不同场点新城疫血清学和病原学监测情况统计表

2.5 不同种属家禽的检测结果分析

血清学检测结果显示，鸡场的抗体合格率为97.83%。本次监测3 532份禽拭子样品，其中鸡拭子2 925份，鸭咽泄拭子300份，鹅咽泄拭子268份，野禽拭子样品39份。检测结果显示，2 925份鸡咽泄拭子样品共检测出7份阳性新城疫病毒核酸，阳性率为0.24%，鸭、鹅和野禽的拭子样品未检出新城疫病毒核酸阳性，详见表3。

表3 新城疫病毒核酸检测结果

3 讨论

血清学检测结果提示，全省新城疫免疫效果比较好，整体合格率为97.83%，高于农业部规定70%的标准。但是屠宰场和市场的抗体合格率较低，存在一定的风险，主要原因是农贸市场和屠宰场的鸡多数为养殖场淘汰的鸡只，后期的免疫不到位，造成了鸡体内抗体含量较低。个别种禽场抗体合格率低，主要原因是仅仅免疫了1次疫苗。建议广大养殖户加强免疫，减少发病风险。

新城疫是严重影响世界养禽业的传染病，疫苗免疫是防控该病的重要措施。环境、宿主、疫苗选择压力等诸多因素综合作用下，NDV在进化过程中发生着变化[9]。研究表明，NDV 不同分离株之间有一定的抗原性差异，有的相互之间不能产生较好的交叉保护，会造成免疫失败[10]。荧光定量RT- PCR 技术是检测新城疫病毒的重要方法[11]。本次病原学监测结果显示，我省的禽群有零星发病的现象，可能是免疫失败导致的。尽管新城疫病毒只有一个血清型，但在疫苗的免疫压力下，新城疫病毒也在发生着变异，出现了多种基因型，由于新城疫病毒疫苗种类较多，应该选择符合当地流行优势基因型的疫苗进行免疫。

近年来，有关水禽感染新城疫病毒的病例和统计数据逐渐增多[12]，2009年，刘华雷等[13]分析1997-2005年从水禽中分离出的10株新城疫病毒的分子流行病学特点，认为基因Ⅶ型NDV是造成我国近年来水禽发生新城疫的主要原因；2011年，徐家芳等[14]在发病天鹅的组织病料中检测出新城疫病毒核酸；2012年，胡北侠等[15]在樱桃谷鸭中成功复制出了基因Ⅶ型强毒。得出结论，NDV在感染宿主方面的确发生了很多新的变化，对鸭、鹅等水禽的致病性有明显的增强。

此次监测未检测出水禽有感染新城疫病毒的现象，但是发现广大水禽养殖户对水禽新城疫认识程度不够，仍认为新城疫病毒只感染家禽，对水禽危害不大，平时未免疫新城疫疫苗，存在水禽感染新城疫病毒的风险。 我们需要进一步研究水禽在NDV传播中的作用，提高广大水禽养殖户对新城疫的重视程度，养殖场要不断提高生物安全措施，避免家禽和水禽的混合饲养，防止传染病的种间传播。此外，广大水禽养殖户应该加强水禽新城疫病毒的免疫，相关部门要加强水禽中新城疫病毒的监测。

4 结论

河南省新城疫病毒抗体总体合格率达到了90%以上，取得较好的防控效果。但部分养殖及流通环节的免疫水平较低，病原学检测有零星阳性样品检出，存在一定的风险。因此，需要继续加强新城疫的科学防控，定期做好抽样监测和流行病学调查。本研究通过对河南省不同地区采集的禽类样品进行血清学和病原学检测，了解了全省的新城疫免疫抗体情况和新城疫病毒流行情况，为指导我省新城疫病的防控提供了科学依据。