冠心病患者miR-126、sVCAM-1水平变化及临床意义

杨南然 王晓群 刘晓晖

[摘要] 目的 探討冠心病（CHD）患者血浆miR-126、可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）水平变化及临床意义。 方法 选择2018年2月—2019年12月在广东省普宁市人民医院住院的CHD患者103例，依据诊断标准分为急性冠脉综合征（ACS）组（58例）和稳定型心绞痛（SAP）组（45例），另选取非CHD体检者55例为对照组。所有患者接受冠状动脉造影术，并采用冠状动脉狭窄程度积分（Gensini）法评价冠状动脉狭窄，检测血浆miR-126和sVCAM-1水平，采用Pearson相关系数进行相关性分析。 结果 ACS组患者sVCAM-1水平、Genisi评分显著高于SAP组和对照组，miR-126均低于SAP组和对照组（均P < 0.05），且SAP组miR-126水平低于对照组，Gensini评分高于对照组（均P < 0.05）;冠状动脉多支病变和中重度病变患者miR-126分别低于单支病变和轻度病变患者（P < 0.05），多支病变和中重度病变患者sVCAM-1分别高于单支病变和轻度病变患者（P < 0.05）;相关性分析显示，CHD患者miR-126与病变冠状动脉支数（r = -0.536，P = 0.007）、Gensini评分（r = -0.574，P = 0.015）均呈负相关，sVCAM-1与病变冠状动脉支数（r = 0.619，P = 0.000）、Gensini评分（r = 0.644，P = 0.000）呈正相关，miR-126与sVCAM-1呈负相关（r = -0.685，P = 0.000）。 结论 CHD患者存在明显的miR-126表达下调和sVCAM-1表达上调，且上述指标与冠状动脉病变程度密切相关，或许可作为CHD诊断和治疗的参考指标。

[关键词] 冠心病;miR-126;血管细胞黏附分子-1

[中图分类号] R541.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）08（b）-0041-04

[Abstract] Objective To investigate the changes and clinical significance of plasma miR-126 and soluble vascular cell adhesion molecule-1 （sVCAM-1） levels in patients with coronary artery heart disease （CHD）. Methods One hundred and three cases of CHD patients hospitalized in Puning People′s Hospital of Guangdong Province from February 2018 to December 2019 were selected. They were divided into acute coronary syndrome （ACS） of 58 cases and stable angina pectoris （SAP） of 45 cases according to the diagnostic criteria， and 55 non-CHD patients were selected as the control group. All patients underwent coronary angiography and the Gensini′s degree integral method was used to evaluate coronary artery stenosis. The plasma miR-126 and sVCAM-1 levels were measured， and Pearson correlation coefficient was used for correlation analysis. Results The levels of sVCAM-1 and Gensini′s degree integral score in ACS group were significantly higher than those of SAP group and control group， the levels of miR-126 were all lower than those of SAP group and control group （P < 0.05）. And the level of miR-126 in SAP group was lower than that of control group， the Gensini′s degree integral score was higher than that of control group （P < 0.05）. The levels of miR-126 in patients with multiple coronary artery lesions and moderate to severe disease were respectively lower than those in patients with single coronary artery lesion and mild disease （P < 0.05）. The levels of sVCAM-1 in patients with multiple coronary artery lesions and moderate to severe disease were respectively higher than those in patients with single coronary artery lesion and mild disease （P < 0.05）. Correlation analysis showed that miR-126 was negatively correlated with the number of coronary artery lesions （r = -0.536， P = 0.007） and Gensini′s degree integral score （r = -0.574， P = 0.015）. sVCAM-1 was positively correlated with the number of coronary artery lesions （r = 0.619， P = 0.000） and Gensini′s degree integral score （r = 0.644， P = 0.000）. miR-126 was negatively correlated with sVCAM-1 （r = -0.685， P = 0.000）. Conclusion There are significant down-regulation of miR-126 expression and up-regulation of sVCAM-1 expression in CHD patients， and the indexes are closely related to the degree of coronary lesions， which may be used as reference indicators for the diagnosis and treatment of CHD.

[Key words] Coronary artery heart disease; miR-126; Vascular cell adhesion molecule-1

冠心病（CHD）是当今世界上死亡率最高的疾病之一，目前多数学者认为CHD主要是脂质代谢异常导致脂质浸入动脉内膜，沉积形成脂质斑块，即动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）病变，引起动脉管壁增厚、动脉弹性降低，导致血流受阻、心肌缺血，表现为心绞痛、心肌梗死、猝死等，严重影响人类的生活质量[1-2]。近年来CHD的发病率逐年上升，并且呈现年轻化趋势。寻找一个可靠的预测因子在早期指导CHD的发生、发展乃至预后中具有十分重要的意义[3]。微小RNA（microRNAs，miRNA）在心血管疾病中的作用是近年来的研究热点，广泛参与体内多种生理过程，在血浆中相对稳定，便于检测。miR-126是一种内皮特异表达的miRNA，研究中发现其参与了AS及高血压病的发生发展[4-5]。血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）能够促进淋巴细胞、血小板黏附在血管内皮上，在AS斑块的形成中发挥了重要作用[6-7]。本研究探讨CHD患者血浆miR-126和VCAM-1的变化水平及临床意义。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年2月—2019年12月在广东省普宁市人民医院住院的CHD患者103例，男61例，女42例;年龄34～76岁，平均（58.23±13.25）岁。依据疾病类型分为急性冠脉综合征（ACS）组（58例）和稳定型心绞痛（SAP）组（45例）。纳入标准：①接受冠状动脉造影术，并确诊为CHD;②病历信息完整无缺漏，完善相关检查;③患者或家属知情同意，签署知情同意书。排除标准：①既往有心肌病、严重心律失常、心功能衰竭、心脏瓣膜病病史;②自身免疫性疾病、恶性肿瘤、严重感染;③严重肝肾功能不全、周围血管病;④近期使用免疫调节药物，如肾上腺皮质激素、抗感染类药物;⑤怀孕妇女。另选同期接受冠状动脉造影且排除CHD的55例体检者为对照组，男35例，女20例;年龄31～75岁，平均（57.82±14.27）岁。通过病历和询问采集研究对象一般资料：年龄、性别、体重、身高、高血压病、糖尿病、心脑血管疾病史、吸烟史、既往用药史，计算体重指数（body mass index，BMI）=体重（kg）/身高的平方（m2）。本研究經过医院医学伦理委员会审查通过。

1.2 诊断标准

依据《急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南》[8]和《非ST段抬高型急性冠脉综合征管理指南》[9]进行诊断和分型。ACS包括急性心肌梗死和不稳定型心绞痛，症状为典型胸痛发作，疼痛剧烈可有濒死感，含服硝酸甘油可缓解或无缓解，心电图可见相邻ST段抬高或异常Q波，或ST段压低或T波倒置，也可无ST段改变，心肌酶水平高于正常上限2倍以上，冠状动脉造影显示前降支、回旋支、右冠状动脉中至少一支血管狭窄且狭窄≥50%。SAP是固定诱因的心绞痛发作，疼痛性质稳定，含服硝酸甘油可缓解，冠状动脉造影显示前降支、回旋支、右冠状动脉中至少一支血管狭窄且狭窄至50%。对照组：无心肌缺血证据，冠状动脉造影未发现有意义的血管狭窄。

1.3 观察指标

1.3.1 冠状动脉造影术  所有患者在入院后行冠状动脉造影术检查，由至少两名心血管内科介入医师采用Judkins法进行穿刺，行冠状动脉造影，并进行造影结果判定，单支血管狭窄≥50%即认定为病变血管，记录病变血管支数。冠状动脉狭窄程度评价采用Gensini法，根据冠状动脉血管狭窄程度分别计1、2、4、8、16、32分[10]。将各血管的狭窄程度得分乘以系数再求和得到总分。依据病变血管支数将患者分为单支病变者（病变血管支数为1）和多支病变者（病变血管支数>1），依据Gensini评分将患者分为轻度病变者（Gensini≤26分）和中重度病变者（Gensini>26分）[11]。

1.3.2 血液学指标  患者入院后次日清晨采集静脉血5 mL，使用罗氏P800全自动分析仪测定三酰甘油（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C），试剂盒购自上海一基实业有限公司（货号：FS15696）。另采集2 mL血液，静置后取血浆置于-80℃冰箱备用，采用双抗体夹心法检查可溶性VCAM-1（sVCAM-1）的浓度，采用美国R&D公司的试剂盒（批号：20171026），严格按照说明书操作。采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测血浆中的miR-126，使用Trizol法提取血浆标本总RNA，使用美国Bio-Rad公司的实时逆转录PCR试剂盒（批号：20171205）合成模板DNA，采用SYBR定量PCR试剂盒（美国赛默飞世尔科技公司，批号：20170519）检测miR-126的表达，表达水平采用2-ΔΔCt法进行计算，引物序列为，F：5′-GGGGTGGTACCGTT-3′，R：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′。内参基因序列为，F：5′-GACTTCATCACCGGGTGTAAATC-3′，R：5′-TATCG-TTGTTCTCCACT-CCTTGAC-3′。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0对所得数据进行统计分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验;多组计量资料比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验;计数资料采用百分率表示，组间比较采用χ2检验;相关性分析采用Pearson相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组一般资料比较

三组患者年龄、性别、BMI、吸烟史、高血压病、糖尿病病史及一般生化指标比较差异均无统计学意义（均P > 0.05），ACS组sVCAM-1水平、Gensini评分显著高于SAP组和对照组，miR-126均低于SAP组和对照组（均P < 0.05），SAP组miR-126水平低于对照组，Gensini评分高于对照组组（P < 0.05）。见表1。

2.2 冠状动脉病变分支与miR-126及sVCAM-1的关系

多支病变者miR-126水平低于单支病变者（P < 0.05），sVCAM-1水平高于单支病变者（P < 0.05）;中重度病变者miR-126水平低于轻度病变者（P < 0.05），sVCAM-1水平高于轻度病变者（P < 0.05）。见表2～3。

2.3 CHD患者miR-126及sVCAM-1与冠状动脉病变的相关性

Pearson相关分析显示，miR-126与病变冠状动脉支数（r = -0.536，P = 0.007）、Gensini评分（r = -0.574，P = 0.015）均呈负相关，sVCAM-1与病变冠状动脉支数（r = 0.619，P = 0.000）、Gensini评分（r = 0.644，P = 0.000）呈正相关，miR-126与sVCAM-1呈负相关（r = -0.685，P = 0.000）。

3 讨论

CHD的主要原因是AS，它形成的过程是一个慢性炎症过程，而细胞黏附分子是调节单核细胞、淋巴细胞与血管内皮细胞发生黏附，触发早期血管炎症的关键因子。当炎症细胞浸润到内皮细胞时，又会激活内皮细胞分泌各种细胞因子，加速局部炎症反应，形成粥样斑块，这是介导细胞与细胞、细胞外基质黏附的关键[12-14]。VCAM-1是细胞黏附分子的一种，主要在血管内皮细胞上表达，使循环中的白细胞与激活的血管内皮细胞紧密结合，当炎症激活血管内皮细胞后，大量分泌VCAM-1，促进淋巴细胞、单核细胞黏附在血管内皮上，并可加速白细胞穿透内皮细胞间的空隙向血管内皮下浸润，进而转化为泡沫细胞，加速血管内皮损伤[15-16]。这一过程可以给淋巴细胞提供抗原，诱导局部免疫反应，释放多种炎性细胞因子，促进平滑肌细胞表型改变，形成纤维斑块[17-18]。sVCAM-1是由内皮上脱落的VCAM-1溶解于血浆中形成的，其浓度可反映内皮细胞表达的VCAM-1含量，并且在冠状动脉腔内与外周血中的浓度几乎一致，可通过检测sVCAM-1代替VCAM-1[19]。本研究结果显示，ACS组患者sVCAM-1水平显著高于SAP组和对照组，提示sVCAM-1与心肌缺血严重程度有关;进一步对不同病变支数和不同Gensini评分患者sVCAM-1的相关性进行分析，结果显示sVCAM-1与病变冠状动脉支数、Gensini评分呈正相关，提示sVCAM-1与冠心病患者冠状动脉病变程度有关，对于评价冠心病严重性具有积极意义。

miRNA是一类高度保守的非编码小分子RNA，在转录水平上调节基因的表达，因其广泛存在于血液中，近年来将其作为新型标志物在心血管疾病、肿瘤、糖尿病中都进行了大量研究[20-22]。miR-126参与调控血管炎症过程，能够抑制VCAM-1的表达[23-24]。本研究结果显示miR-126与sVCAM-1呈负相关，SAP组miR-126水平高于ACS组，多支病变患者miR-126低于单支病变患者，中重度病变患者miR-126低于轻度病变患者，提示miR-126与冠状动脉病变有关。相关性分析也显示miR-126与病变冠状动脉支数及Gensini评分均呈负相关，提示miR-126可能是冠状动脉病变程度的保护因子。有研究通过敲除小鼠miR-126基因，发现血管内皮细胞受损，证实miR-126具有抵抗AS进展的作用[25]。

综上所述，CHD患者存在明显的miR-126表达下调和sVCAM-1表达上调，且上述指标与冠状动脉病变程度密切相关，或许可作为CHD诊断和治疗的参考指标。

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（收稿日期：2020-05-19）