免疫透射比浊法检测血清铁蛋白的性能评价*

刘 继，童辉纯，彭建明，袁春雷，叶贵诚，官燕飞

中山市博爱医院检验科，广东中山 528400

铁蛋白(FER)是一种相对分子质量约为450×103的含铁蛋白质，具有强大的铁结合和储备能力，是人体内除血红蛋白外含铁最丰富的蛋白质[1]，主要分布于骨髓、肝、脾内。FER在铁缺乏疾病中降低，是诊断缺铁性贫血最可靠和最敏感的指标[2]，特别是可极早诊断体内铁缺乏[3]。FER在铁超负荷疾病、炎症、肝脏疾病及恶性肿瘤时可以显著升高[4]，被广泛应用于肿瘤的筛查和辅助诊断。本文对免疫透射比浊法检测FER进行方法学评价验证，判断其是否能满足临床检测需求。

1 材料与方法

1.1试剂与仪器 免疫透射比浊法检测FER试剂盒、校准物、质控物均由重庆中元生物技术股份有限公司提供，仪器为美国贝克曼库尔特AU5800型自动生化分析仪。比对系统为罗氏Cobas E601全自动化学发光分析仪分析系统及配套FER试剂盒。

1.2免疫透射比浊法检测血清FER性能评价

1.2.2线性范围 参考CLSI EP6-A文件，取FER水平接近10 ng/mL及1 000 ng/mL血清标本各1份，按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H的关系配制，形成系列水平梯度。将每个标本重复检测3次，计算平均值作为实测水平(Y)，理论水平(X)与实测水平(Y)采用线性回归进行线性评价，并计算出回归方程及相关系数r2。

1.2.6参考范围验证 参照美国临床实验室标准化委员会C28-A2文件，选择在本院体检中心体检的健康体检者血清标本40份(男女各20例，年龄16～65岁)作为参考人群，将测定结果进行统计并对试剂说明书提供的参考区间进行验证。如果参考人群的FER检测值不超过4个落在厂家申明的参考区间外，则验证通过。

1.3统计学处理 利用SPSS20.0 统计软件和Microsoft Excel 2013软件进行数据分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1精密度试验结果 免疫透射比浊法测定FER低值、中值、高值批内CV分别为3.48%、0.97%、2.09%，批间CV分别为4.43%、2.88%、2.10%，均符合试剂厂家标明的精密度要求，见表1。

表1 FER批内及批间精密度

2.2线性试验结果 将FER理论值作为横坐标(X)，测量值为纵坐标(Y)进行线性回归分析。结果显示免疫透射比浊法检测FER在10～1 000 ng/mL，线性良好，回归方程Y=1.008 4X-1.679 7，r2=0.999 4，符合厂家要求，见图1。

图1 FER线性测定

2.3比对试验结果 免疫透射比浊法测定FER结果与电化学发光法检测结果相关性良好。线性回归方程Y=0.980 7X+1.391 3，线性回归系数r2=0.998 1。两个检测系统测定结果均值差异无统计学意义(P>0.05)，见图2。

图2 FER比对试验

2.4回收试验结果 回收率为96.02%～102.74%，平均回收率为99.94%，符合试验要求，见表2。

表2 免疫透射比浊法对不同水平FER样品的回收试验结果

2.5干扰试验结果 由表3可见，当标本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL时,对免疫透射比浊法无干扰。

表3 免疫透射比浊法对不同水平干扰物的回收试验结果

2.6参考范围验证结果 经验证FER水平有38个在试剂说明书提供的参考区间范围，有2个超出所验证的参考区间，参考区间通过验证。

3 讨 论

血清FER与骨髓铁染色结果相关性良好[5-7]，一般认为血清FER<15 ng/mL即可诊断为铁缺乏[8]，是反映体内铁贮存量最有价值的参数。肝脏作为合成和储存FER的主要场所，FER水平与肝细胞受损程度呈正相关[9]，故而FER可以作为诊断肝癌等肝脏疾病比较灵敏的指标[10]。除此之外，血清FER在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、恶性血液病患者中也明显增高[11-13]。

目前临床实验室测定FER的方法主要有化学发光法、放射免疫法等，前者检测的灵敏度高，反应时间短，线性范围广，但需要特定配套的化学发光仪和试剂盒，测定的成本较高,这也限制了其在基层单位的应用；后者加样、离心全部是手工操作，步骤较复杂，带来误差的环节较多，而且存在同位素的半衰期短、放射性的危害等缺点。

根据ISO15189对实验室质量的要求，实验室必须对检测系统进行验证。本文主要是对重庆中元生物技术股份有限公司生产的胶乳增强免疫透射比浊法FER检测试剂盒进行性能评价。在美国贝克曼库尔特AU5800型自动生化分析仪上，参照CLSI系列文件，结果显示，胶乳增强免疫透射比浊法检测FER批内和批间CV均小于5%，说明此试剂盒重复性较好，符合厂家声明的精密度的要求；在10～1 000 ng/mL线性良好(r2=0.999 4)，能较好满足临床需求；比对试验显示，免疫透射比浊法与化学发光法相比较二者相关性好(r2=0.998 1)；96.02%～102.74%的回收率提示免疫透射比浊法具有较高的准确性；当标本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL时，对免疫透射比浊法无干扰。

综上所述，免疫透射比浊法可应用于全自动生化分析仪检测FER，随机误差小、重复性好、线性范围广、抗干扰能力强，能满足临床需求；与化学发光法比较，结果准确，费用相对较低，能减轻患者负担，广泛适用于临床。