雏土鸡肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌混合感染的诊治

徐海军，白雪梅，左瑞华，张圣尧，王广林

(1.皖西学院 健康养殖与动物疫病监测预警工程技术中心，安徽 六安 237012；2.安徽金丰源畜牧科技有限公司，安徽 六安 237010；3.皖西学院分析测试中心，安徽 六安 237012)

近年来，我国优质土鸡的饲养规模不断扩大，成为农村新的经济增长点。然而土鸡由于采用开放饲养的养殖方式，非常容易受到环境中各种病原的侵害，严重阻碍了土鸡养殖产业的健康发展。肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌是2种人兽共患的条件性致病菌，其在土鸡身上的混合感染尚未见报道。本文报告了1例雏土鸡肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌混合感染的病原鉴定和诊治过程。

1 材料与方法

1.1 试剂和药品 胰大豆蛋白胨琼脂，购自北京奥博星生物技术有限责任公司；细菌药敏试纸片，购自杭州微生物试剂有限公司；革兰染色液，购自杭州天和微生物试剂有限公司；革兰阴性菌和革兰阳性菌检测卡，购自法国梅里埃诊断产品(上海)有限公司；2.5%兽用恩诺沙星可溶性粉，购自郑州世农兽药有限公司。

1.2 病样来源 2018年9月22日，淮南市寿县保义镇某土鸡养殖户送检3只雏土鸡(1只死亡，2只存活)。

1.3 方法

1.3.1 病史调查 通过询问养殖户，对整个发病过程进行调查。

1.3.2 临床症状和病理剖检观察 观察送检存活病鸡的临床症状，然后进行剖检，观察病变。

1.3.3 细菌分离、鉴定 剖检时无菌采集2只存活病鸡的肝脏组织，涂布接种于胰大豆蛋白胨琼脂平板，37 ℃培养18 h。对分离菌进行革兰染色镜检，并用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪细菌学专家系统进行鉴定。

1.3.4 药敏试验 采用纸片法对分离菌进行药敏试验。药敏试验结果判断标准：抑菌圈的直径在20 mm以上时为极敏；直径在15～20 mm为高敏；直径在10～14 mm为中敏；直径在10 mm以下时为低敏；直径为0 mm时为耐药。

1.3.5 防治措施 根据药敏试验结果选择敏感药物对土鸡群进行治疗，对病土鸡进行隔离治疗，同时对鸡舍和周边环境做好消毒。

2 结果

2.1 病史调查 该养殖户饲养了5 000只土鸡，发病时约1月龄。在送检时已发病2 d，发病第1天有10多只发萎，3只死亡；发病第2天时死亡增加至5只，发萎鸡数量也增加。

2.2 临床症状和病理剖检 送检存活的病鸡发蔫，缩头蜷卧，双翅下垂，闭眼，肛门周边羽毛有黄绿色粪便污染。剖检的主要病变包括肝肿胀，表面有少量出血点或不规则的黄绿色坏死灶；胆囊肿大，胆汁浓稠；肠道有点状或条块状出血；胸腺表面有出血点；盲肠扁桃体出血；肾脏稍肿大，输尿管充盈尿酸盐；肺呈暗红色、淤血；肌胃内容物常为绿色，嗉囊内有少量积液。

2.3 细菌分离、鉴定 从2只病鸡的肝脏中均分离出2种细菌，其中细菌1菌落呈圆形、边缘整齐、灰白色、不透明、隆起、表面湿润、直径约1mm，局部形成灰白色菌苔；细菌2分布于细菌1周围，呈浅灰色、半透明、迁徙生长的菌苔，长满整个平板。用接种环挑取单个细菌1的菌落用划线法进行纯化培养，由于细菌1和细菌2在初次分离时呈混合生长，所以经过6次纯化，并且缩短培养时间至10 h，才最终获得细菌1的单菌落。细菌2纯化时由于其具有迁徙生长的特点，因此始终没有获得单菌落。

将细菌1和细菌2涂片、革兰染色后镜检，发现两者均为革兰阴性菌(见中插彩版图1和图2)。其中，细菌1呈卵圆形或球杆状，单个散在或两两相连，有荚膜；细菌2两端钝圆，呈单个或成对的球状、球杆状、长丝状或短链状的多形性杆菌，以杆状为主，多单在。经VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪细菌学专家系统鉴定，细菌1为肺炎克雷伯菌(正确率为98 %)，细菌2为奇异变形杆菌(正确率为99 %)。

2.4 药敏试验 对2种菌分别进行药敏试验，结果见表1。从表1可见，肺炎克雷伯菌对头孢拉定极敏，对氧氟沙星、磷霉素、丁胺卡那霉素高敏，对强力霉素、多黏菌素中敏，对氟苯尼考耐药。奇异变形杆菌对氧氟沙星、磷霉素极敏，对丁胺卡那霉素、头孢拉定高敏，对氟苯尼考低敏，对强力霉素和多黏菌素耐药。

表1 药敏试验结果

2.5 治疗方法 根据药敏试验结果，选择氧氟沙星的同类药物恩诺沙星(因为兽用氧氟沙星自2016年12月31日起，停止经营、使用于食品动物)作为治疗药物，按使用说明，每1 L水用本品2 g，2次/d，饮水给药，连用4 d。1周后回访得知用药后已控制病情，鸡群恢复正常。

3 讨论

肺炎克雷伯菌是一类广泛分布于人和动物皮肤、呼吸道、消化道等部位及环境中的重要条件致病菌，可以引起人和动物的多种感染[1-5]。有学者认为肺炎克雷伯菌已成为仅次于大肠杆菌、绿脓杆菌，引起感染死亡率较高的条件致病菌[6]。我国关于鸡感染肺炎克雷伯菌的报道还较少[7-9]，这可能与临床上一般很少对病原菌进行鉴定有关，导致一些疾病治愈后也未能确诊病原。肺炎克雷伯菌感染动物后可引起肺炎、肠炎、子宫炎、腹膜炎，甚至引起败血症[9-10]，可见其引起的症状和病变十分广泛，缺乏特异性，这给基层兽医对该病的确诊带来了一定的困难。

奇异变形杆菌广泛分布于自然界及人与动物的体表，也是一种较常见的人兽共患条件致病菌。鸡奇异变形杆菌病是近些年来国内新发现的一种急性热性细菌性传染病[11-15]。本病的特征是呼吸困难、咳嗽、体温升高、腹泻，病鸡主要表现为菌血症、败血症，一侧性或两侧性瘫痪或水样腹泻，各种日龄的鸡群都可感染本病，但以7周龄以下的雏鸡最易感[15]。奇异变形杆菌用常规培养方法很难获得单个菌落，但在含 0.1%石碳酸或 0.4%硼酸的培养基上，该菌迁徙生长受到抑制，可形成单个菌落[14]。

本病例中，肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌发生混合感染，尚未见类似报道。2种菌混合感染也加剧了临床症状和病变的复杂性，单纯通过流行病学、临床症状和剖检病变难以作出确诊，必须通过细菌分离和鉴定才能获得确诊。由于这2种菌广泛存在于环境中，甚至也存在于动物(包括人)机体中，对它们的危害应引起足够重视。孙秋艳等(2006年)对来自于河南、安徽、山东、广西等省的鸡血清进行了流行病学调查，结果表明，奇异变形杆菌抗体阳性率普遍较高[12]。由于这2种菌感染后缺乏特异性的临床症状和病变，而基层兽医一般缺少细菌分离鉴定的条件，因此，这2种病的实际发生率可能远远高于人们的现有认识。研制这2种细菌感染的快速诊断方法，对于临床正确诊断和评估这2种细菌病的流行情况有重要作用。