痰液及血清中单核细胞趋化因子蛋白、白介素-35表达在肺结核患者检测中的临床意义

谢 巍，涂 宏

(四川省遂宁市中心医院，a.感染性疾病科；b.心血管三病区，四川 遂宁 629000)

肺结核(pulmonary tuberculosis，PT)系指由结核分枝杆菌所致的慢性传染病，人群普遍易感，病程长且病情较为复杂，病机与细胞因子或免疫调节等密切相关，目前PT在全球范围内广泛流行，成为危害人类生命健康的常见疾病之一[1]，近年来随着PT患者耐药现象的普遍，全球结核病疫情进一步加重，使得PT早期预测和早期防治成为临床关注的重点。研究发现[2]，结核病的病情发展不仅取决于结核分枝杆菌致病力的大小，且与机体细胞免疫反应减弱密切相关，此外文献报道结核分枝杆菌感染至肺部会导致单核细胞和巨噬细胞在感染部位聚集，引发肺部炎症、纤维化以及肉芽肿等的形成[3]，因而通过检测PT患者血清或痰液中相关因子水平或对疾病预测有积极作用。白介素-35(IL-35)在调节性T细胞功能以及抗炎症反应等过程中起到重要的作用[4]，单核细胞趋化因子蛋白(MCP-1)属于一种重要的单核细胞趋化及激活因子[5]。目前关于两者在PT患者痰液细胞和血清中表达水平及其临床意义的研究依然较少。本文探讨PT患者痰液细胞和血清中MCP-1及IL-35水平变化及意义，旨在为PT病情预测提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2016年7月至2019年7月本院收治的106例PT患者(疾病组)。纳入标准：①符合《肺结核诊断和治疗指南》[6]有关PT诊断标准，经痰涂片检查、结核菌素试验以及X射线检查确诊；②临床资料完善；③未合并其他类型传染病或肺部疾病；④健康体检者要求身体健康、既往无肺部疾病史、不存在免疫性疾病或炎性疾病。排除标准：①存在肝、肾、心等重要脏器功能障碍；②存在免疫系统疾病；③合并恶性肿瘤。疾病组依据随访资料分为疾病活动组(活动性肺结核，n=63)、疾病稳定组(稳定期肺结核，n=43)，同期收治的35例肺疾病患者(排除存在器质性病变者)为对照组。疾病活动组男41例，女22例，年龄11～60岁[(31.06±3.95)岁]；疾病稳定组男29例，女14例，年龄10～59岁[(30.99±4.02)岁]；对照组男22例，女13例，年龄21～59岁[(41.23±4.01)岁]。三组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P> 0.05)。

1.2 方法①分组方法：结核杆菌不复制或复制量很少，肺结核病灶无活动、空洞闭合，痰菌连续阴性(每月至少检查一次)均>大于6个月为肺结核稳定期；存在发热、咳嗽、咳痰、咯血或呼吸困难等症状且痰中查及结核菌，血沉增快，CT检查提示两上肺片状渗出影或有空洞为肺结核活动期。②标本采集：采集晨起痰液并放置在无菌螺旋盖痰瓶中，1500 r/min离心15 min后，上清液放置在低温处保存待测，林格液冲洗沉淀物1次后进行细胞涂片，吉姆萨染色法对涂片进行染色，计算痰液中单核巨噬细胞总数，确保三组痰液回收量无明显差异；痰液采集当日收集所有对象的晨起空腹外周肘静脉血5 ml，常规离心分离血清留存待测。③痰液细胞和血清中MCP-1及IL-35水平检测：酶联免疫吸附法(试剂盒及仪器由上海西唐生物科技有限公司提供，其中MCP-1试剂盒型号为DCP00，IL-35试剂盒型号为BMS2017)测定三组痰液细胞和血清中MCP-1及IL-35水平。

1.3 统计学方法采用SPSS 20.0统计学软件分析数据。计量资料两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析及SNK-q检验；相关性分析采用pearson相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疾病组、对照组痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平比较疾病组痰液细胞、血清中MCP-1表达水平高于对照组，IL-35表达水平低于对照组 (P<0.05)，且疾病组痰液细胞中MCP-1及IL-35表达水平高于血清中的水平(t=37.894、295.632，P<0.001)，见表1。

表1 疾病组、对照组痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达情况比较

2.2 不同年龄、性别的PT患者痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平比较不同年龄、性别的PT患者痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平比较，差异无统计学意义(P> 0.05)，见表2。

表2 不同年龄、性别的PT患者痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平比较

2.3 不同病情程度PT患者痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平比较疾病活动组痰液细胞、血清中MCP-1水平明显高于疾病稳定组，而痰液细胞、血清中IL-35表达水平明显低于疾病稳定组(P<0.05)；相关性分析显示PT患者病情程度与痰液细胞、血清中MCP-1水平呈明显的正相关(r=0.521、0.741，P<0.05)，但与痰液细胞、血清中IL-35水平呈明显的负相关(r=-0.851、-0.980，P<0.05)。见表3和图1，图2。

表3 不同病情程度PT患者痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平比较

图1 PT病情程度与MCP-1水平的关系 a.痰液细胞中；b.血清中

图2 PT病情程度与IL-35水平的关系 a.痰液细胞中；b.血清中

2.4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表达在PT病情诊断中的价值分析痰液及血清中MCP-1、IL-35联合检测诊断PT病情程度的灵敏度和准确度各为97.67%、94.34%，较痰液、血清MCP-1、IL-35各自检测诊断的灵敏度(81.40%、72.09%)、准确度(84.91%、79.25%)明显高，见表4。

3 讨论

PT为呼吸道常见传染病，我国为结核病流行最为严重的国家之一，年发病人数约为130万，占全球总发病率的14.3%，近年来随着国内对肺结核患者管理的松懈，导致耐药PT患者日益增多，使得PT患者的临床治疗面临着较大挑战，PT早期诊治成为临床研究的重点[7]。近年来有研究[8]指出结核病发生、发展和转归与机体免疫功能降低有关，其中IL-35作为新发现的炎性抑制因子，其可抑制效应性T细胞并扩增调节性T细胞，负向调节机体的自身免疫反应以及慢性炎症性反应，文献[9]报道IL-35可对自身免疫性糖尿病进行长效防护，体外动物实验同样证实IL-35可有效增加机体的IL-10因子的分泌，明显抑制IFN-γ的产生，有效改善机体炎性症状[10]，而对其在PT疾病进展中是否发挥重要调节作用尚未可知；MCP-1为趋化因子亚家族，其可吸引白细胞亚型至机体的炎性部位，在免疫反应中有重要调节作用，有研究[11]指出炎性部位的单核或巨噬细胞等，在结核分枝杆菌和其毒素作用下分泌MCP-1，并促进机体产生炎性反应，加剧病情进展。一直以来临床上主要通过检测PT患者血清中相关因子水平以评估疾病，而飞沫作为PT疾病传播的主要途径，考虑PT患者痰液中相关因子表达水平在PT病情预测中也有一定价值。

表4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表达在PT病情诊断中的价值分析

本次分析结果显示，疾病组痰液细胞、血清中MCP-1表达水平较对照组明显高，IL-35表达水平明显低于对照组，且疾病组痰液细胞中MCP-1及IL-35表达水平均明显高于血清中的水平，PT发病过程中因感染结核分枝杆菌会引发机体局部损伤，导致机体内的单核巨噬细胞以及淋巴细胞等被过度激活，导致大量的炎性因子被释放，因而痰液细胞和血清中MCP-1水平明显升高[12]，此外PT病理过程中机体免疫功能受损，因而痰液细胞和血清中IL-35水平明显降低，此外本分析结果发现痰液细胞中MCP-1、IL-35水平明显高于血清，提示痰液细胞中MCP-1、IL-35水平异常表达较血清中更为灵敏。本分析结果还显示，不同年龄、性别的PT患者痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平无明显差异，提示PT患者的性别、年龄等对痰液细胞、血清中MCP-1及IL-35表达水平以及病情进展的影响不大；进一步分析结果显示，疾病活动组痰液细胞、血清中MCP-1水平明显高于疾病稳定组，痰液细胞、血清中IL-35表达水平明显低于疾病稳定组，且相关性分析显示PT患者病情程度与痰液细胞、血清中MCP-1水平呈明显的正相关，但与痰液细胞、血清中IL-35水平呈明显的负相关，由此说明痰液细胞、血清中MCP-1、IL-35表达水平与PT患者病情严重程度密切相关，两者均可反映PT的病情程度；研究[13]发现，IL-35为白介素12的家族成员，可表达于多种细胞中，与Treg关系紧密，能够抑制人效应性T细胞功能，此外在调节Th1、Th17等辅助性T细胞中有显著作用，而随着PT患者病情严重程度加重，机体免疫功能受损更为明显，因此IL-35水平随之显著降低；在PT疾病活动期会出现急性炎性反应，机体内单核/巨噬细胞总数随之明显增高，由之分泌的MCP-1水平也显著增高[14]，相较于稳定期明显高，因此痰液细胞、血清中MCP-1水平可有效预测PT病情的严重程度，而具体机制尚需进一步研究证实。另外，本结果显示痰液及血清中MCP-1、IL-35联合检测诊断PT病情程度的灵敏度和准确度各为97.67%、94.34%，较痰液、血清MCP-1、IL-35各自检测诊断的灵敏度(81.40%、72.09%)、准确度(84.91%、79.25%)明显高，说明痰液及血清中MCP-1、IL-35联合检测有望提高PT病情程度诊断价值。

基于以上分析，PT患者病情严重程度与痰液细胞、血清中MCP-1、IL-35表达水平密切相关，为PT早期病情监测提供理论依据。但本研究为回顾性分析且样本量较少，研究结果或存在一定偏倚，未来进一步开展大样本量、多中心前瞻性研究。