昆明市奶牛场鲜奶抗生素残留调查

周鹏宇　刘霄　唐恩应　胡映开　钟绍丽　杨国荣　尹革芬　亐开兴

摘要：为了解目前昆明市奶牛场抗生素使用及残留情况，对来自昆明地区6个奶牛场的鲜牛乳进行调查和抗生素残留检测。根据抗生素的抑菌作用，调查采用戴尔沃快速检测试剂盒（Delvotest SP），对来自昆明市3个规模化奶牛养殖场、3个奶牛养殖合作社共333份奶样进行抗生素残留检测。结果发现，333份生牛乳检样中共检出抗生素残留阳性样品44份，阳性率为13.21%，其中规模化奶牛场奶样36份中的阳性样品数为0，未检出阳性;而奶牛养殖合作社共297份样品，阳性样品44份，阳性率为14.81%;源于昆明市奶牛场的上市牛乳中存在抗生素残留，残留来源以合作社奶牛养殖场为主，表明不同管理模式对抗生素残留有重要影响。

关键词：鲜牛乳;抗生素残留;戴尔沃快速检测;抗生素

中图分类号：S851.2      文献标志码：A    doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2020.02.054

Abstract：In order to investigate the current status of antibiotic usage and residues in the fresh milk from 6 dairy farms in Kunming，the fresh milk samples were subjected to detect the antibiotic residues and educational level of staffs. Based on the antimicrobial activities，333 fresh milk samples from 3 large-scale dairy farms and 3 dairy cooperative farms were carried out to detect antibiotic residues using Delvotest Rapid Detection Kit（Delvotest SP）. The results showed that the 44 of 333 milk samples were positive，with an overall value of 13.21%，while there was 0 of 36 samples without positive detection from the 3 large-scale dairy farms，and 44 of 297 samples from 3 dairy cooperatives were positive with a value of 14.81%. It indicated that there existed antibiotic residues in the dairy farms in Kunming，mainly originated from dairy cooperatives，displaying that the importance of different management models to antibiotic residues.

Key words：fresh milk;antibiotic residues;Delvotest SP;antibiotic

牛奶是营养比较全面、最容易被人体所吸收的食品之一，但近年來牛奶污染事件频发，牛奶制品中的抗生素残留问题也逐渐成为全社会共同关注的公共卫生问题。牛奶抗生素残留是指在对奶牛使用药物治疗后或者以其他方式造成鲜奶的抗生素污染，导致抗生素以药物原型的形式在牛奶中出现。长期饮用含有低剂量抗生素的牛奶对人体的危害是多方面，例如动物机体在反复接触某一类抗生素后，体内的敏感菌株将受到选择性抑制，细菌产生耐药性，使疾病治疗变得困难，也能引起大肠杆菌耐药菌株的产生。经常食用一些含低剂量抗生素的牛奶还能使过敏性个体出现过敏反应，这些药物包括青霉素、四环素，以及某些氨基糖苷类抗生素等，严重者引起休克、喉头水肿、呼吸困难等严重症状，而青霉素引起的变态反应，轻者表现为接触性皮炎和皮肤反应，严重者表现为致死性过敏性休克;链霉素对脑神经有明显毒性作用，易引起耳聋。

为保证上市食用牛奶的质量，农业农村部于2003年5月发布《兽药停药期规定》对牛使用的停药期分别为土霉素7 d，弃奶期3 d;四环素12 d，产奶期禁用注射用青霉素钠，弃奶期3 d;磺胺二甲基嘧啶注射液28 d。牛奶中抗生素残留主要原因有 4个：①非治疗目的用药;②治疗目的用药;③非法人为掺杂;④挤奶器械污染[1]。不同给药途径和剂量会造成不同程度的抗生素残留[2]，为确保原料乳和乳制品中抗生素残留量符合抗生素最大残留限制要求，乳牛场、乳制品厂、政府监督部门都在努力探索准确可行的抗生素检测方法，许多大型化学试剂和仪器公司也致力于开发抗生素残留量的检测方法和仪器。牛奶中抗生素残留的检测方法主要有微生物检测法、理化检测法、免疫学分析法[3-5]。实际上，通常应根据测定目标来选择不同的方法[6-10]，Delvotest为最著名的微生物抑制法测定抗生素检测法，为了使此类试验更加操作易行，荷兰Gist-brocades BV公司开发了Delvotest-P，Delvotest-SP，Del-votest cow- test，Delvotest-MCS检测系列，而Delvotest cowtest适合奶牛场水平使用。为了解昆明市鲜牛奶中抗生素残留情况，试验采用价格低廉、操作简单、灵敏度高、重复性好的Delvotest SP试剂盒对奶牛场现采鲜乳进行抗生素残留检测，促进昆明地区奶牛养殖业的可持续发展，利于促进消费者健康和奶制品生产安全具有现实的社会意义。

1   材料与方法

1.1   试验材料

1.1.1    供测奶样

试验于2016—2017年3次对昆明市3家规模化奶牛养殖场和3家合作奶牛养殖场进行了现场采鲜乳的抗生素残留检测。

供测奶样来源见表1。

1.1.2   仪器和设备

采样管、冰箱、立式高压蒸汽灭菌器、数显恒温水浴锅等。

1.1.3   试剂

戴尔沃特快速检测试剂盒（Delvotest SP NT），荷兰DSM Gist-brocades公司提供。

1.2   试验方法

1.2.1   调查问卷制作

通过前期对文献的查阅与实地考察，确定调查问卷项目主要包括饲养管理人员受教育程度、奶牛场常用抗生素种类、患病奶牛的管理和治疗期奶牛乳汁的处理等。

1.2.2   鲜牛奶中抗生素残留的检测

（1）样品采集。要求着装为消毒服装;如果奶缸没有专用的搅拌机器，用专用清洁的奶耙上下搅动25次以上，使罐内牛奶充分混合均匀，通过专用取样勺取奶罐中部奶样。

取奶样时先用牛奶将采样杯润洗2次，再取样250 mL。对规模化奶牛养殖场从奶缸中取1份样品，对奶牛合作养殖场每户取1份奶样，共计采样333份。

（2）样品检测与结果判定。采用戴尔沃快速检测法，检测原理是利用微生物-嗜热芽孢菌在64 ℃条件下培养2.5～3.0 h后会产酸，酸引起指示剂BCP（溴甲酚紫）变为黄色;若牛奶样品中不含抗生素，培养后样品呈黄色，如样品中含有抗生素，嗜热芽孢菌生长受到抑制而无法产酸，指示剂不会变色。按试剂说明书进行操作和结果判定：在白色背景前观察，如果底部2/3固体介质是黄色，则为阴性;如果底部2/3固体介质是紫色，则为阳性;最终判定结果时与阴性、阳性对照管颜色作对比，如果阴性、阳性管显色不吻合，需重新检测。

1.3   数据分析与处理

采用SPSS 16.0软件中t检验和x2检验对试验数据作分析。

2   结果与分析

2.1   问卷调查统计与分析

调查共走访3个规模化奶牛养殖场和99个合作社奶牛养殖场生产管理人员共102人。

规模化奶牛养殖场调查问卷见表2，合作奶牛养殖场调查问卷见表3。

由表2和表3看出，规模化奶牛场生产管理人员均接受过专业教育，具备一定的专业知识，在药物使用及患病动物管理等方面处理措施相对合理;而合作社生产管理人员受教育程度多为初中以下，基本未接受过专业技能教育，生产管理多凭经验，在用药和病畜处理等方面缺乏系统管理。

2.2   抗生素残留

2016—2017年分3次对昆明地区3家规模化奶牛场和3家奶牛合作社养殖场进行生鲜牛乳的抗生素残留检测，3家规模化奶牛养殖场3次共抽检样品36份，均未检测出抗生素残留，阳性率为0。

规模化奶牛场抗生素残留见表4。

3家合作社奶牛养殖场3次共抽检297份，除合作社D第1次未检测出抗生素残留外，其余均检出抗生素残留。合作社D，E，F阳性率分别为22.67%，18.52%和10.12%，平均阳性率为14.81%。

合作社奶牛场抗生素残留见表5。

2.3   不同饲养管理方式对鲜牛乳抗生素残留的影响

3家规模化奶牛养殖场共计36份样品中未检测到抗生素阳性样本，阳性率为0%，3家奶牛养殖合作社共计297份样品中有44份抗生素陽性，阳性率为14.81%。不同养殖模式下抗生素残留情况差异明显，3次规模化场检出率为0%，严格遵照国家休药期规定、抗生素残留未检出阳性样品。

不同饲养管理方式对鲜乳中抗生素残留的影响见表6。

3   讨论

（1）通过问卷调查发现，合作社生产管理人员受教育程度多为初中以下，基本未接受过专业技能教育和培训，生产管理多凭经验，在用药和病畜处理等方面缺乏系统管理;奶牛群得不到良好的管理，导致奶牛疾病频发;由于不具备良好的药理药物知识，对休药期把握不准，对国家兽药方面的法规基本不了解，饲养管理仅凭经验。规模化奶牛养殖场生产管理人员均接受过专业教育，具备一定的专业知识，在药物使用及患病动物管理等方面处理措施相对合理，能严格遵照国家抗生素休药期规定、抗生素残留未发现阳性样品。

（2）奶牛养殖合作社多为近些年来发展起来的农村养殖集体，为多个养殖户集中养殖，各养殖户各自为阵、管理比较混乱。一些农户存栏头数较少，自身抵抗风险的能力低，在奶牛发病后，没有承受将“有抗奶”弃掉的经济能力，仍将奶牛牵去集中挤奶交售;有时挤奶缸清洗不干净，也会导致抗生素残留或交互污染。规模化奶牛场奶牛存栏数较多，饲养员或兽医会将患病奶牛分圈饲养，并做好治疗记录。在挤奶时首先将全部健康牛挤完后，治疗期奶牛才上机挤奶，并且进入一个专门的有抗奶缸，再由挤奶工仔细清洗并消毒挤奶设备，有效杜绝了“有抗奶”。

（3）从不同城市牛奶抗生素残留调查看，不管是市售生鲜奶还是巴氏消毒牛奶，抗生素残留情况都比较严重。宁鹏[11]利用TTC法对抗生素残留检测，西宁市个体饲养奶牛的鲜牛奶阳性率为6.15%（15/244）。马群飞等人[12]报道福建省鲜奶抗生素残留检出率阳性率为19.77%（17/86）。杨庆文等人[13]检测发现昆明市零售点市售不同包装的鲜乳抗生素残留阳性率为16.67%（18/108），而227 mL小包装消毒鲜牛乳较高，为38.46%（15/39）。赵杰等人[14]对贵阳市超市袋装奶和市郊散卖牛奶的检出阳性率为1.67%（1/60）。邓斌等人[8]对云南省市售鲜牛奶和巴氏消毒奶作调查，检出率最高的是头孢氨苄45.31%，其次是青霉素达35.94%。从超标的情况看，超标率达10%以上的药物有10种，超标率20%以上的药物有8种。牛奶中残留的抗生素主要为青霉素和磺胺类药物，其中头孢氨苄和青霉素残留最为严重。因此，加强鲜牛奶和乳制品的监管应该更细化，精确到各类抗生素，确保乳品安全[15]。

4   结论

（1）奶牛养殖合作社相对规模化奶牛养殖场管理混乱，生产管理人员文化水平偏低，各户各自为政，难以有效防止抗生素残留。

（2）昆明市鲜乳存在抗生素残留，检出率13.21%，不同饲养管理模式对抗生素残留具有明显影响，抗生素残留主要来自于奶牛合作社，规模化养殖场较为规范，调查中未发现阳性乳。

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