不同富硒产物对小鼠急性肝损伤的保护作用

武 炜，李成会，郑素玲，朱莲英，朱粉侠

（1. 唐山师范学院 生命科学系，河北 唐山 063000；2. 唐山华闻饲料有限公司，河北 唐山 063000）

硒元素在动物体内发挥多种重要的生理功能，可消除体内自由基，有效抑制过氧化物的产生，清除体内有毒重金属，从而提高机体抗氧化能力，增强机体免疫能力[1]。中国是缺硒国家，2/3 以上地区饲料和牧草中硒的含量小于0.05 mg/kg，不能满足动物的正常生理需要。与无机硒相比，有机硒具有吸收率高、生物活性强、毒性低等特点，是硒在动物体内发挥作用的主要形式，高效有机硒源的开发与应用是国内外动物营养学的研究热点之一[2]。CCl4所致急性肝损伤是外源性氧化损伤的最佳动物模型。以往研究表明硒对CCl4所致小鼠急性肝损伤有一定治疗效果，但富硒花生、富硒大豆、富硒大麦对其作用均未见报道。试验研究不同富硒产物对小鼠CCl4急性肝损伤的保护作用，为开发多种富硒产品提供理论支持。

1 材料

1.1 试验动物

70 只清洁级雄性昆明小鼠，体重22±2 g，购自华北理工大学试验动物中心。

1.2 富硒产物

富硒大麦、富硒大豆、富硒花生，唐山师范学院动物饲料与营养实验室提供。分别用亚硒酸钠溶液浸种并在发芽前期间歇短时喷淋，种子发芽一定时间后，干燥、粉碎后过60 目筛，得到富硒大麦粉、富硒大豆粉、富硒花生粉，经氢化物原子荧光光谱法检测，硒含量分别为135.0，29.0，36.1 mg/kg。

1.3 试剂

亚硒酸钠（分析纯），郑州诚旺化工有限公司提供；橄榄油（分析纯），河北省固安县海雅有限公司提供；四氯化碳（分析纯），北京五洲世纪红星化工有限公司提供；谷丙转氨酶试剂盒、谷草转氨酶试剂盒、超氧化物酶试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒、丙二醛试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.4 仪器

722N 型紫外可见分光光度计，济南上地电子科技有限公司产品；HH-8 型数显恒温水浴锅，金坛市医疗仪器厂产品；WT603T 型电子天平，常州万泰天平仪器有限公司产品。

2 方法

2.1 试验动物分组与给药

选择70 只雄性昆明小鼠随机分成7 组（对照组、模型组、亚硒酸钠组、富硒花生组、富硒大豆组、富硒大麦组、复合富硒组），每组10 只。对照组及模型组饲喂普通鼠粮，其他组饲喂在普通鼠粮中分别添加一定比例的亚硒酸钠、富硒花生、富硒大豆、富硒大麦、复合富硒产物（富硒大豆粉、富硒花生粉、富硒大麦粉按照2.40∶2.40∶2.32 比例混合） 制成的富硒鼠粮（硒含量均为0.4 mg/kg）。饲喂28 d 后，模型组及各试验组小鼠腹腔注射0.2% CCl4橄榄油溶液（10 mL/kg），对照组腹腔注射等体积橄榄油溶液。

2.2 指标测定

末次注射后，禁食、不禁水16 h，摘眼球取血，静置1 h，以转速3 000 r/min 离心10 min，采集血清。处死小鼠，采集肝脏，制备10%匀浆液，以转速3 000 r/min 离心10 min，取上清液。按试剂盒说明书检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST） 活性，肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX） 的活性及丙二醛（MDA） 含量。

2.3 统计学分析

采用SPSS 21.0 软件对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均数±标准误”表示，采用LSD 法进行多重比较，p<0.05 表示差异显著，p<0.01 表示差异极显著。

3 结果与分析

小鼠血清中ALT、AST 活性及肝组织中SOD、GSH-PX活性、MDA 含量比较见表1。

由表1 可知，与对照组相比，模型组小鼠血清ALT、AST 活性极显著升高（p<0.01），肝组织SOD和GSH-PX的酶活力值极显著下降（p<0.01），MDA含量显著提升（p<0.01）。与模型组相比，富硒花生组、富硒大豆组、富硒大麦组、复合富硒组血清ALT、AST 活性均极显著下降（p<0.01），肝组织SOD 和GSH-PX的酶活力值均极显著或显著上升（p<0.01 或p<0.05），MDA 含量均极显著或显著降低（p<0.01 或p<0.05）。其中，富硒大豆组和复合富硒组小鼠血清ALT、AST 极显著低于富硒花生组和富硒大麦组（p<0.01），肝组织GSH-PX的酶活力值极显著或显著高于富硒花生组和富硒大麦组（p<0.01或p<0.05）。与亚硒酸钠组相比，其他富硒组小鼠血清ALT 活性均极显著下降（p<0.01）。

表1 小鼠血清中ALT、AST 活性及肝组织中SOD、GSH-PX 活性、MDA 含量比较

4 讨论

硒元素在自然界中有无机态和有机态2 种存在形式，因有机硒具有高效、安全等特点，已逐渐取代无机硒在动物营养中广泛应用。前人研究表明，富硒花生、富硒大豆等有机富硒产物可显著提高机体抗氧化能力。王光[3]使用亚硒酸钠通过花生幼苗生物转化作用富集有机硒，证明硒代氨基酸是富硒花生有机硒的主要形式，可提高细胞抗氧化能力，并具有较强的免疫调节活性。高林等人[4]检测富硒花生发现，样品硒含量的变化与其抗氧化活性的变化趋势一致。王凤杰等人[5]以亚硒酸钠为硒源、大豆为富硒载体制备富硒大豆，其中所含的大豆多肽能有效提高脂肪肝大鼠肝内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化反应，降低肝组织内GRP78 表达。

CCl4所致动物肝损伤是经典的急性氧化应激模型，能全面反映化学性肝损伤导致的一系列过氧化反应。CCl4被肝微粒体细胞色素P450 代谢激活后，产生大量活跃的三氯甲基自由基，导致氧化体系过度活化，引发脂质过氧化反应，生成大量MDA 等脂质过氧化产物，同时抑制体内抗氧化体系中自由基清除酶SOD、GSH-Px 活性，改变细胞膜的流动性和通透性，细胞内转氨酶（ALT，AST） 等可溶性酶渗入血液、活性升高。前人研究表明，富硒产物对CCl4所致小鼠急性肝损伤有一定治疗效果。张岩等人[6]研究发现，给小鼠灌胃100，200，400 mg/kg·bw富硒玉米肽15 d 对CCl4所致小鼠急性肝损伤有显著的保护作用，能极显著抑制小鼠血清ALT 活性，极显著提高肝组织中SOD、GSH-Px 活力，降低MDA含量，改善肝组织损伤程度。相关研究表明，一定剂量的甘草硒多糖、山药硒多糖均对CCl4诱导的小鼠肝损伤有保护作用，其机制可能是通过清除自由基而达到防治肝细胞损害的疗效[7]。

结果显示，相比对照组，模型组小鼠血清ALT、AST 水平极显著升高，肝组织SOD 和GSH-PX的酶活力值极显著下降，MDA 含量显著提升，说明CCl4引起肝细胞受损，小鼠体内发生氧化应激反应，内源性转氨酶释放到胞外，提示建模成功；与模型组相比，富硒花生组、富硒大豆组、富硒大麦组、复合富硒组血清ALT、AST 活性均极显著下降，肝组织SOD 和GSH-PX的酶活力值均极显著或显著上升，MDA 含量极显著或显著降低，表明以上有机富硒产物均对CCl4致肝损伤有一定的保护作用，且效果优于相同剂量的亚硒酸钠。其中机理可能是硒可保护肝细胞膜不受到过氧化物的破坏，同时参与构成机体内GSH-PX，显著增强其活性，及时消除自由基的堆积，从而保护肝脏。

结果显示，富硒大豆组和复合富硒组小鼠血清ALT、AST 极显著低于富硒花生组和富硒大麦组，肝组织GSH-PX的酶活力值极显著或显著高于富硒花生组和富硒大麦组，说明富硒大豆和复合富硒产物对急性肝损伤的保护效果好于富硒花生和富硒大麦。其原因可能是富硒大豆中除了硒元素外，还含有大豆皂甙、大豆异黄酮、大豆磷脂、大豆多肽等多种成分，均具有抗脂质氧化和降低过氧化脂质的作用，可防护CCl4对肝脏的损伤；而复合富硒产物中富硒花生含有白藜芦醇等活性物质也可有效减轻小鼠的肝组织损伤程度。

5 结论

富硒花生、富硒大豆、富硒大麦均对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用，效果优于相同剂量的亚硒酸钠，其作用机制可能与通过抗氧化作用提高肝细胞内的SOD、GSH-Px 活性，减少MDA 产生，保护肝细胞膜有关。