长沙地区小儿反复呼吸道感染的病原体检测情况分析

唐晓林 赵紫平

小儿反复呼吸道感染(Recurrent Respiratory Tract Infection，RRTI)是一种上、下呼吸道感染频繁发作为特点的儿科疾病，好发于6个月～6岁患儿[1]。目前临床常多采用抗生素治疗，但长期使用同种抗生素治疗可使病原菌产生耐药性。既往研究[2]指出：RRTI致病病原体繁多，常见的有肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SP)、呼吸道合胞病毒( respiratory syncytial virus，RSV)及鼻病毒(rhinovirus ，HRV)等，且不同地区人群的病原体分布特征也有所不同。本地区以往研究[3]指出：RSV、腺病毒(adenovirus，AdV)和副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)为本地区儿童RRTI感染的主要病原。为了解现阶段本地区儿童RRTI感染的病毒病原流行情况，本研究检测了2017年01月-2019年01月间322例RRTI患儿咽拭子、肺泡灌洗液标本中的13项病原体，以期为长沙地区防治RRTI提供参考，现将结果报道如下。

资料与方法

一、 一般资料

2017年1月-2019年1月采集本院内因反复咳嗽或内科治疗疗效不佳的322例RRTI患儿行咽拭子检查，呼吸道13项病原体检测。其中，男性172例，女性150例，年龄：1月～14岁，平均(43.5±14.6)个月，BMI(22.46±3.52)kg/m2,病程均>7d。纳入标准 ①符合1987年全国小儿呼吸病学术会议制定的RRTI诊断标准[4](见表1)；②患儿家属均已签署知情同意书。排除标准 ①伴有佝偻症；②存在先天性心脏病、营养不良者；③合并有贫血、变应性疾病、免疫缺陷疾病者；④其他易引起RRTI的合并症；⑤先天性结构异常者。

表1 RRTI判断标准(次/年)

二、方法

(1)提取核酸 提取患儿咽拭子中的DNA/RNA，试剂盒购自罗氏公司，50 μl洗脱液溶解，-70℃冻存待测。(2)病毒核酸检测 采用多重反转录-聚合酶链反应检测，每个样本给予3个多重PCR扩增，电泳分析产物，检测AdV、PIV、RSV ，设置套系多重PCR反应条件;采用荧光定量PCR及实时荧光定量RT-PCR试剂盒检测鼻咽拭子标本中SP、肺炎支原体(mycoplasma pneumonia，MP) 、百日咳杆菌(bacillus pertussis，BP)、卡他莫拉菌(moraxelle catarrhalis，MC) 、HRV、流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae，Hi)、流感A型 (influenza A，INF-A)、流感B型(influenza B，INF-B)、博卡病毒(human boca virus，hBoV)、偏肺病毒(partial lung virus，hMPV)。MC购自上海联迈生物供货才能有限公司，HRV、Hi购自上海晅科生物科技有限公司，BP试剂盒购自上海一研生物科技有限公司，其他检测试剂盒均购自上海之江生物科技有限公司;以上操作均需严格按照试剂盒说明书进行[5]。

三、统计学方法

采用软件SPSS22.0处理数据，以n，%表示计数资料，多组之间比较采用χ2检验,多组之间两两比较采用P值修正的方法；以示计量资料，行独立t检验，以α=0.05为检验水准。

结 果

一、13种病原体检出情况

322例样本中检出阳性样本313例 ，总阳性检出率为97.20%，其中以BP 占比最高，为25.47%；其次为RSV ，占比22.67%；第三为SP，占比13.35%(见表2)。

表2 13种病原体检出情况 例(%)

二、四季间RRTI病原体总阳性检出率比较

RRTI病原体总阳性检出率在不同季节间差异无统计学意义(P>0.05)(见表3，图1)。

表3 四季间RRTI病原体总阳性检出率比较 例(%)

图1 四季间RRTI病原体总阳性检出率

三、不同年龄组间RRTI病原体总阳性检出率比较

RRTI病原体总阳性检出率在不同年龄组间差异有统计学意义(P<0.01)；不同年龄段两两差异比较，经P值修正后，差异均不具有修正统计学意义(P>0.0083)(见表4，图2)。

表4 不同年龄组间RRTI病原体总阳性检出率比较 例(%)

图2 不同年龄组间RRTI病原体总阳性检出率

四、四季间主要RRTI病原体阳性检出率比较

BP、RSV、SP、PIV、Hi在不同季节间差异均有统计学意义(P<0.05)，其中BP在夏季的阳性检出率明显高于秋季(P<0.0083)；PIV在春季的阳性检出率明显高于冬季(P<0.0083)；Hi在冬季的阳性检出率明显高于春、夏季(P<0.0083)(见表5，图3)。

表5 四季间主要RRTI病原体阳性检出率比较 例(%)

图3 四季间主要RRTI病原体阳性检出率比较

五、5不同年龄组间主要RRTI病原体检出阳性率比较

BP、RSV、SP、PIV在不同年龄间差异均有统计学意义(P<0.05)，其中BP在≤1岁组的阳性检出率明显高于3～≤6岁(P<0.0083)；RSV在≤1岁组的阳性检出率明显高于3～≤6岁组(P<0.0083),3～≤6岁组的阳性检出率明显低于>6岁，≤14岁组(P<0.0083)；SP在3～≤6岁组的阳性检出率明显高于≤1岁组及>6岁，≤14岁组(P<0.0083)；PIV在各组的阳性检出率比较，差异不具有统计学意义(P>0.0083)(见表6，图4)。

表6 不同年龄组间主要RRTI病原体检出阳性率比较 例(%)

图4 各年龄组间主要RRTI病原体阳性检出率比较

讨 论

RRTI是一种可反复发作的小儿呼吸道疾病，其发病机制尚不明确，其感染病原体种类繁多，可与病毒、细菌等感染有关，其中部分病原体感染有季节流行趋势。国内研究[6-7]指出：武汉地区病毒总检出率为56.08%，而泸州地区的总检出率为59.31%，其中MP占比最高为46.56%。而本研究中总病原体阳性检出率为97.20%，高于国内其他水平，其原因考虑与本研究纳入的为反复发作且难以治愈的RRTI患儿有关。BP是一种高度传染性病原体，可在学校、医院等区域内暴发，在BP疫苗出现以前，感染BP婴幼儿的死亡率较高，但自我国接种BP疫苗以来，BP的死亡率已得到了控制[8]。本研究结果则显示：病原体检出占比最高的为BP，提示近年来BP发生率有所上升，原因则可能与近年来，长沙地区部分婴幼儿未给予接种疫苗有关。

本研究中≤1年龄组的病原体总检出率明显最低为91.07%，而>1～<3岁组总感染率最高为99.04%。国内对广州地区患儿的研究则指出[9]：4～6岁患儿的病原体检出率最高，与本研究结果存在差异的原因可能与研究样本的不同有关。进一步分析结果显示：BP呈夏季流行趋势，与山东地区的研究结果一致[10]。且其多发于≤1岁的婴幼儿，分析由于≤1岁婴幼儿呼吸道尚未发育完全，加上未接种疫苗，极易感染BP。为更好的防控长沙地区BP的传播，各大医院应及时控制传染源 ，在BP流行季节，一旦发现前驱症状，家长应及早带患儿就诊；同时必须阻断BP，保持室内通风，曝晒衣物，消毒处理痰液及口鼻分泌物；宣传普及BP防治知识，孕妇在怀孕期间提前给予接种BP疫苗，减少母婴传播，为婴幼儿的健康生长提供预防基础[11]。

RSV是一种较为常见的肺炎病毒属，多见于下呼吸道感染。国内研究[12]指出：RSV在扬州地区的检出率均处于第一的地位。本研究中RSV检出率处于第二，为22.67%。本研究结果还显示：RSV在冬季的阳性检出率较春、夏有明显升高；且RSV多发于≤1岁的婴幼儿，国内研究[13]曾指出：RSV多在冬春季流行，且好发于1岁以下婴幼儿。考虑原因与婴幼儿呼吸系统及免疫功能均未完全发育，更易感染。因此，临床在冬季应注意预防RSV，并重点保护≤1岁的婴幼儿。SP是存在人体鼻咽部的一种正常菌群，但其常常可引发婴幼呼吸道系统疾病。国内研究[14]指出：SP检出率与PM2.5、PM10等指标呈明显正相关。而本研究结果也显示：SP的检出率居于第三位，考虑长沙地区SP检出率较高的原因也与空气污染，汽车尾气排放有关。同时有研究[15]中还指出：在夏季需预防SP引起的呼吸道感染，且其好发于幼儿及学龄前儿童。本研究中SP在冬季的流行趋势则较为明显，且其多发于3～≤6岁幼儿，考虑SP季节流行趋势存在差异的原因与地区温度、环境的差异有关。PIV共有四个亚型，感染后可引起毛细支气管炎、肺炎或下呼吸道感染，且可伴随发热、喘息等症状。研究[16]指出：其流行趋势与其亚型有关，但PIV常常发生于春夏季。另有研究则指出：PIV在1个月～3岁儿童中的检出率更高。本研究中，PIV在春季的阳性检出率明显高于其他季节，但其更易发生在3～≤6岁儿童中，存在差异的原因可能与地区差异有关。

目前，长沙地区引起RRTI的病原体种类繁多，且不同病原体引起的症状也有所相同，通过病毒核酸检测，能够帮助临床快速鉴定致病病原体，为临床选择合理的抗菌药提供了可靠依据。综上所述，长沙地区反复发作、难治性RRTI的主要病原体为BP 、RSV 及SP，在春、夏季临床需做好BP的预防工作，在冬季做好RSV、SP的防治工作等，临床可加强对长沙地区病原体的监测，达到合理用药，促进RRTI患儿早日康复的目的。但本研究存在不足，如研究结果可能存在地区差异，且未对不同病原体感染患儿预后进行分析等，需行进一步的大样本研究证实。