荧光RAA检测方法快速诊断一起猪附红细胞体病

郑秀红，袁 莉，乔启波，李丽婧，杜秋明*

1.吉林省龙井市德新乡畜牧兽医站，吉林龙井 133400；2.吉林省龙井市老头沟镇畜牧兽医站，吉林龙井 133400；3.吉林省延边州动物疫病预防控制中心，吉林延吉 133000；4.吉林省龙井市动物疫病预防控制中心，吉林龙井 133400

1 概述

附红细胞体可寄生在多种动物的红细胞表面、血浆、骨髓等部位，使感染动物发生附红细胞体病[1～3]，该病也可以感染人，是一种人兽共患传染病[4～7]。猪附红细胞体病可在不同日龄的猪群发生，仔猪的发病率和死亡率都相对较高，母猪感染情况也较为严重。本病的传染源主要是患病猪和隐性感染的猪只。本病可通过虱子、蚊子、蜱虫、疥螨等媒介昆虫传播，也可通过猪只咬尾、舔舐伤口等方式传播，不更换注射器，使用同一支注射器对多个猪只进行免疫或注射也可造成该病的传播。发病猪临床多表现为体温升高、精神沉郁、眼结膜苍白或黄染、贫血、生长缓慢、甚至死亡。黄疸、皮下组织水肿、心包积液、肝脾肾肿大、淋巴结水肿是该病的主要病理变化。该病的临床症状和病理变化均无特异表征，是导致该病临床诊断困难的主要原因。

2 常规实验室检测方法

因通过临床症状和病理变化无法对该病进行准确的诊断，为提高诊断的准确性和检出率，血液镜检、血片染色、ELISA等血清学检测方法相继应用到该病，但上述方法在敏感性、特异性上都存在不足，致使该病的检出率和诊断准确性未能得到大幅度提高。PCR方法的应用让检测该病的敏感性和特异性都得到了提高，但PCR检测对仪器、检测环境、人员技术水平、都有特定要求，操作复杂、耗时较长不适合临床快速诊断。

3 荧光RAA检测方法

荧光RAA检测方法是利用重组酶介导的等温扩增技术在37～42 ℃恒温条件下完成靶模板链的扩增，并利用荧光探针方法检测荧光信号[8]。重组酶介导的等温扩增技术的应用提高了检测方法的敏感性，荧光探针方法保证了检测的特异性。整个过程不像PCR方法需要频繁的升降温度，对仪器要求不高，检测用时短，在20 min内均可完成。该方法敏感、特异、耗时短、操作简便的特点适合临床快速检测。

4 检测诊断

2020年3月，一生猪养殖户猪只出现发热、贫血、消瘦、毛色暗淡等症状，对出现症状的猪只随机挑选3头，每头采集血液样本1份，对采集的样本分别进行猪瘟、高致病性蓝耳病、非洲猪瘟PCR检测和猪附红细胞体荧光RAA检测。结果猪瘟、高致病性蓝耳病、非洲猪瘟PCR检测均为阴性，3份样本猪附红细胞体荧光RAA检测均为阳性（图1），根据检测结果并结合临床症状确诊发病猪群患有猪附红细胞体病，并根据诊断结果指导养殖户对该病进行防治，经7 d的治疗，该猪群临床症状逐渐消失。

5 讨论

防治猪附红细胞体病应加强饲养管理减少因混群等原因导致的咬伤、舔舐伤口等方式传播，合理补充微量元素减少咬尾事件发生，在治疗注射和免疫注射时做到“一畜一针”，避免因注射交叉使用造成的该病传播，做好防虫工作减少媒介昆虫传播。

近年动物疫情形势复杂，疫病种类不断增加，猪附红细胞体病也常常呈现继发感染和混合感染的情况，在诊断该病时要注意与其它疫病的鉴别诊断，在选择诊断方法时尽可能的选择敏感性高和特异性强的检测方法，以确保检出率和诊断的准确性。

图1 猪附红细胞体荧光RAA检测结果