碘伏溶液开瓶后在37 ℃恒温箱保存的可行性研究

闫国兴 王秋平 张翠霞 秦迎辉 唐玉珠 符倩男 王龙宾

(首都医科大学附属友谊医院平谷医院 1.导管室；2.手术室，北京 101200)

碘伏具有杀菌谱广、对生物膜有效[1-2]及低致敏性[3]的特点，被广泛应用于手术部位的消毒。有研究表明，在手术开始前将消毒剂加热至接近体温，患者皮肤冷感觉刺激发生率低，消毒后及手术结束时体温无明显下降[4-5]，对患者生理功能影响小[6]，杀菌效果确定[7]。张艳红等[8]研究发现，使用37 ℃碘伏消毒桡动脉穿刺术野能明显降低桡动脉痉挛的发生率。由于1瓶用于手术部位皮肤消毒的碘伏溶液其容量是500 mL，而手术野皮肤消毒单次用量一般为 50 mL 左右，所以，加过温的剩余碘伏是室温保存、继续加温保存还是丢弃尚有待进一步进行探讨，且继续加温存放多长时间内安全有效亦未见相关文献报道，上述问题均阻碍了碘伏加温在临床的广泛应用，影响了患者的舒适体验。为探讨碘伏开瓶后加温保存的安全性，笔者于2018年5—6月对开瓶后22 ℃室温及37 ℃恒温箱保存的碘伏溶液14 d内正常取用的碘伏的有效碘含量、杀菌效力、毒性变化进行了观察比较，以期为碘伏开瓶后37 ℃恒温箱保存提供数据支持，便于护士安心为患者提供舒适体验，减少围术期低体温的发生。现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 所需材料：(1)5 g/L的碘伏溶液(北京洗得宝消毒制品有限公司生产，产品批号为20180423)，共60瓶，容量均为500 mL。(2)0.1%mol/L硫代硫酸钠(德州安捷高科消毒制品有限公司生产)。(3)36%醋酸(北京北化精细化学品有限公司生产)。(4)电热恒温培养箱(北京科伟永兴仪器有限公司生产，型号：DH-250型)。(5)温湿度计(北京康威仪表有限公司生产，型号为WS-A2型)。(5)可溶性淀粉(天津市致远化学试剂有限公司生产，批号为20171102055)。(6)6只健康白色家兔，皮肤及眼睛无异常。(7)由我院化验室按照卫生部《2008消毒技术规范》[9]自行配制的胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)和普通营养琼脂培养基(NA)。(8)60名导管室及手术室的志愿医护人员。

1.2方法 将60瓶碘伏溶液分为两组，分别为37 ℃恒温箱保存组和室温保存组(20～25 ℃)，各30瓶。碘伏开瓶后每日定时模拟正常使用，每日取25 mL碘伏溶液进行有效碘含量测量，至第14天，每次取用完毕后放回37 ℃恒温箱或室温进行保存。于碘伏开瓶后第7天进行动物毒性试验，第14天进行碘伏消毒液染菌量测定和现场消毒效果鉴定试验，动物毒性试验已通过本院伦理委员会审核。

1.2.1有效碘含量测定方法 由经过培训的护理人员进行测定。提前将环境温度调至22 ℃，湿度50%；按照《2008消毒技术规范》[9]关于有效碘含量测定方法操作，碘伏开瓶后倒出30 mL至量杯中，用吸管精确吸取25 mL碘伏至100 mL碘量瓶中，加入36%醋酸5滴，用0.1%mol/L硫代硫酸钠滴定，边滴边摇匀，待溶液呈淡黄色时加入5 g/L淀粉溶液10滴，继续滴定至颜色消失，记录用去的硫代硫酸钠滴定液总量，并按《2008消毒技术规范》[9]所标示公式计算出有效碘含量。37 ℃恒温箱保存组将剩余的碘伏溶液瓶盖旋紧放入37 ℃恒温箱进行保存，室温保存组则放于20～25 ℃的手术间内进行保存。每日均按上述方法测量有效碘含量，直至开瓶后第14天。

1.2.2碘伏消毒液染菌量测定 于碘伏开瓶后第14日由经过培训的护理人员进行碘伏消毒液采样，操作在百级无菌手术间进行。先提前将室温调至22 ℃，湿度50%；按照《2008消毒技术规范》[9]关于消毒液染菌量测定方法操作，采用无菌吸管吸取碘伏溶液1 mL滴入盛有0.1%mol/L硫代硫酸钠9 mL的采样管内混匀，送至化验室。检测采用倾注法，分别取0.5 mL碘伏溶液放入2只灭菌平皿内，加入已熔化的45～48 ℃的普通营养琼脂15～18 mL，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置于20 ℃下培养7 d，观察霉菌生长情况，另一个平板置于(36±1)℃下培养72 h，计数菌落数，同时检测致病菌。

1.2.3现场皮肤消毒试验方法 于碘伏开瓶后第14天，应用两组碘伏溶液对导管室、手术室共60名志愿医护人员进行现场消毒效果鉴定，操作在百级无菌手术间进行。提前将室温调至22 ℃、湿度50%；按照《2008消毒技术规范》[9]规定的测定方法操作，让志愿者将左右前臂中段相互充分进行摩擦，将3 cm×10 cm的板放在志愿者左前臂内侧中段表面，用无菌棉拭在含10 mL稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后,在规格板框定的区域内，横向往返涂擦3遍，纵向往返涂擦10遍，每涂擦1遍将棉拭转动1次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管内，震荡混匀，作为消毒前样本；按碘伏常规使用方法对右前臂内侧进行消毒2 min，将3 cm×10 cm板放在志愿者右前臂内侧中段表面，用无菌棉拭在10 mL的0.1%mol/L硫代硫酸钠试管中浸湿，采用与对照组同样的方法进行采样，作为消毒后样本。将消毒前后样本分别取1 mL，以倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，置37 ℃恒温培养箱中培养48 h，观察最终结果，并计算杀灭对数值，将本研究未用完的同批次中和剂溶液、稀释液、棉拭、培养基等分别设阴性对照。

1.2.4毒性试验

1.2.4.1一次完整皮肤刺激实验 按照《2008消毒技术规范》[9]要求进行该实验。选择皮肤完好的健康白色家兔6只，分为两组，每组各3只。于碘伏开瓶后第6天用剪刀将白色家兔背部脊柱两侧约3 cm×3 cm 的毛去掉(不得损伤皮肤)；碘伏开瓶后第7天，分别选择37 ℃恒温箱保存组及室温保存组中有效碘含量测试最高的1瓶，取碘伏原液0.5 mL涂在白色家兔的一侧皮肤上，另一侧涂0.9%氯化钠0.5 mL作为对照，涂抹后4 h用温水擦净，分别于除去碘伏后的1 h、24 h和48 h对白色家兔皮肤局部反应进行观察，并行刺激反应评分。

1.2.4.2急性眼刺激试验 按照《2008消毒技术规范》[9]要求进行急性眼刺激试验。选择眼睛无异常的健康白色家兔6只，分为两组，每组各3只。于碘伏开瓶后第7天，分别选择37 ℃恒温箱保存组及室温保存组中有效碘含量测试最高的1瓶，吸取碘伏溶液原液0.1 mL滴入白色家兔一侧眼结膜囊内，将其眼被动闭合4 s，并于30 s后用0.9%氯化钠冲洗，肉眼观察白色家兔滴眼后1 h、24 h、48 h、72 h、7 d、14 d和21 d眼结膜、虹膜和角膜的损伤与恢复情况。按《2008消毒技术规范》[9]要求对白色家兔眼角膜、虹膜和结膜的急性刺激反应进行评分，并分别计算每只动物分别在24 h、48 h及72 h的角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿4个方面的平均评分。分别以动物眼角膜、虹膜和结膜充血、水肿的平均评分和恢复时间，按照眼刺激反应分级标准判定加温碘伏溶液对眼睛的刺激强度。

1.3观察指标 对两组碘伏溶液开瓶后第0～14天的有效碘含量、14 d后毒液染菌量、第14天细菌杀灭对数值、第7天白兔皮肤刺激反应评分及眼刺激反应结果进行观察并比较。

1.4统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，两组间有效碘含量、消毒剂杀灭细菌对数值比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组碘伏溶液有效碘含量比较 见表1。

表1 两组碘伏溶液有效碘含量比较 g/L

2.2碘伏消毒液开瓶后不同存放时间的染菌量比较 碘伏开瓶后，两组保存14 d下取原液行细菌培养，结果显示均无细菌及霉菌生长。

2.3两组现场皮肤消毒试验结果比较 同批次中和剂溶液、稀释液、棉拭及培养基等细菌培养均为阴性。见表2。

表2 两组现场皮肤消毒试验结果比较

2.4两组一次完整皮肤刺激实验结果比较 两组白兔第7天皮肤均未见红斑及水肿，刺激反应评分为0分，属无刺激性。

2.5两组急性眼刺激试验结果比较 碘伏开瓶后第7天，室温保存组选用当天有效碘含量最高为5.360 g/L的碘伏溶液对白兔进行急性眼刺激实验，结果白兔结膜水肿评分为(0.445±0.396)分，未见结膜充血、角膜及虹膜损害，7 d内完全恢复，按照《2008消毒技术规范》[9]白色家兔急性眼刺激反应的评分标准判定为无刺激性。37 ℃恒温箱保存组选用当天有效碘含量最高为5.365 g/L的碘伏溶液进行急性眼刺激实验，结果白兔结膜水肿评分为(1.556±0.335)分，结膜充血评分为(0.333±0.612)分，无角膜及虹膜损害，7d内完全恢复，按照《2008消毒技术规范》[9]白色家兔急性眼刺激反应的评分标准判定为无刺激性。

3 讨论

3.1开瓶后37 ℃恒温箱保存14 d内的碘伏有效碘含量稳定 碘伏是由单质碘与聚乙烯吡咯烷酮络合而成的不定型复合物，有效碘是衡量其氧化能力的标志。王芳等[10]研究发现，开瓶后室温保存下正常使用10 d内的碘伏，其有效碘含量在标准范围，但随着使用时间的延长及使用频率的增加，有效碘含量呈持续下降趋势。本研究中，室温保存组有效碘含量变化未呈现出持续下降趋势，原因可能是实验条件有所不同。因本研究测量的是用于大范围手术部位皮肤消毒的5 g/L的500 mL碘伏，取用状态是每天从瓶中倒出1次，开盖时间约为5 s，与王芳等[10]测量的用于静脉穿刺等小范围消毒的3 g/L的60 mL碘伏，取用状态为棉签蘸取消毒液10次，其瓶盖开瓶时间会更长一些。本研究中开瓶后37 ℃恒温箱保存下的碘伏随着时间的延长，有效碘含量呈逐渐增加又逐渐降低趋势，但仍高于开瓶时检测的数值。汪洋玉等[11]将碘伏开瓶后置于40 ℃室温下保存并测量10 d内的有效碘含量，结果显示随着时间延长其有效碘含量持续增加，但因样本量仅为1瓶，所以指导意义有限。赵春颖等[12]对DF-1型碘伏在10～40 ℃温度条件下的有效碘含量进行测试，研究结果认为温度对碘伏有效碘含量会造成影响，25～30 ℃温度下保存的碘伏有效碘含量最高，但其测试的碘伏浓度、容量及样本数量均未提及。本研究结果显示，两组碘伏14 d内有效碘含量比较，差异均无统计学差异(P>0.05)，有效碘含量稳定。

3.2开瓶后37 ℃恒温箱保存14 d的碘伏杀菌效果确定 陈祖毅等[13]分别测试了聚维酮碘在10 ℃、20 ℃和30 ℃温度条件下的杀菌效果，结果发现30 ℃温度条件下的细菌杀灭对数值最高。但赵丽霞等[14]研究结果发现，聚维酮碘开瓶后室温保存可在2周内保持杀菌效果不变。本研究中两组进行现场皮肤消毒实验结果显示，细菌杀灭对数值比较，差异无统计学意义(P>0.05)，皮肤表面自然菌的平均杀灭对数值≥1.00，判定为消毒合格。本研究中，两组皮肤表面自然菌的平均杀灭对数值均>1.00，高于消毒技术规范要求，说明开瓶后37 ℃恒温箱保存14 d的碘伏杀菌效果确定。按《消毒技术规范》要求，使用中的皮肤黏膜消毒液染菌量≤10 CFU/mL,本研究结果显示，两组均无细菌及霉菌生长，符合规范要求。

3.337 ℃恒温箱保存的碘伏毒性 本研究中，两组完整皮肤刺激实验结果均为无刺激性，与张倩等[15]研究结果一致。急性眼刺激实验发现，37 ℃恒温箱保存组的碘伏溶液与室温保存组的碘伏溶液均为无刺激性，但37 ℃恒温箱保存组的结膜充血及水肿评分均高于室温组。蒋劲等[16]研究发现，5.0%和2.5%聚维酮碘结膜囊滴眼消毒对兔角膜上皮细胞产生明显损伤作用。碘伏溶液在临床中应用广泛，除了用于术前手术野皮肤消毒外，还可用在手术中应用稀释的碘伏溶液滴注或灌注预防眼部、关节手术感染[17-19]，进行切口及胸腔灌洗以降低肺癌A549、胸腺上皮肿瘤细胞的种植扩散[20]。鉴于本研究中37 ℃恒温箱保存的碘伏溶液，虽急性眼刺激实验结果为无刺激性，但其结膜水肿和充血评分均高于室温保存的碘伏，且眼部应用碘伏面积小对体温几乎无影响，可不用37 ℃的碘伏溶液进行眼部的消毒。

综上所述，开瓶后37 ℃恒温箱保存14 d内的碘伏溶液有效碘含量稳定，染菌量检测无细菌及霉菌生长，消毒效果符合规范要求，对皮肤无刺激，可提高手术患者的舒适度，避免由于消毒液带来的低体温，降低冠状动脉介入治疗中桡动脉痉挛的发生率，可进一步推广应用。