基质金属蛋白酶-2在非小细胞肺癌血清及组织中的表达

田凤霞

（河北省滦州市人民医院，河北 唐山）

0 引言

为更深入了解MMP-2在非小细胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancer, NSCLC）的血清、组织当中的具体表达以及临床引导价值[1]，通过不同手段对其进行检测，通过归纳非小细胞肺癌患者的血清以及癌组织当中的MMP-2表达情况，分析该指标对于转移评估、预后质量判断的关联性[2]，希望能为临床收治非小细胞肺癌患者的治疗方案制定提供可靠数据，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017～2019年在本院接受诊治的非小细胞肺癌患者且符合选择标准群体的为分析对象，在其中随机抽取85例设为观察组，该组所有患者均接受手术或者支气管镜确诊病情，在本次研究前患者并无接受放疗、化疗、免疫治疗等方案控制病情。纳入患者中男女所占例数分别为69例、16例；年龄 43～80岁，平均（61.31±3.14）岁；肿瘤类型中鳞癌与腺癌例数分别为48例、37例；有64例患者出现淋巴结转移情况。对患者应用1997年国际抗癌协会相关肿瘤临床分期标准，如下：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期例数对应为15例、29例、26例、15例。另随机在同期就诊确诊为肺良性病变患者群体中抽取20例设为对照组，男女所占例数分别为15例、5例；年龄42～79岁，平均（60.57±2.77）岁。两组患者在性别、年龄等基本数据分布方面经统计学软件处理后提示并无显著差异（P＞0.05），可做对比。

1.2 方法

所有研究对象受检前10～12 h禁食，术前1 d、术后10 d于清晨空腹状态下抽取肘静脉血量为3 mL，用3000 r/min速度做离心处理，时间为10 min，分离所得新鲜血清并放置于-80 ℃环境中保存备用。

本次研究所用主要试剂如下：MMP-2ELISA试剂盒、鼠抗人MMP-2单克隆抗体，相关免疫组化试剂盒。

实验操作方法具体如下：分别在观察组患者手术治疗前后对其血清当中的MMP-2指标进行检测，根据试剂盒说明说严格操作ELISA检验法。完成血清的收集后在96孔板当中加入稀释液，加样，孵化，时间为2 h，使用缓冲液清洗后加入MMP-2结合物，再加入底物以及终止液，应用酶标仪检测并记录相关数据[3]。

将两组患者的手术切除病理组织使用石蜡包埋块，常规完成脱蜡以及水化处理，加入3%双氧水后微波抗原修复，10%正常羊血清封闭[4]。滴入比例为1:200的MMP-2抗体，放置于4 ℃环境中过夜，再滴加辣根过氧化酶标记兔抗鼠IgG，放置在37 ℃环境中1 h，辅以DAB达到显色效果，然后对其应用苏木素复染，透明树胶封片，阴性对照物使用PBS代替，对照片进行同步操作以得到阳性。

1.3 免疫组化判断依据

MMP-2阳性细胞标准：肿瘤细胞膜或者是胞浆经复染后成为了棕黄色，使用高倍镜辅助所得视野之下对4个不同的视野进行观察，在所有视野当中对200个细胞进行计数观察，其中判定依据如下：（-）为无存在阳性细胞，（+）提示阳性细胞所占比例不足30%，（++）提示阳性细胞所占比例在30%～50%，（+++）提示阳性细胞所占比例超过50%，其中（++）、（+++）为阳性表达[5]。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS 20.0处理此次研究数据，计数资料由卡方检验，输出显示为（%）；计量资料使用t检验，以（±s）的形式描述，P＜0.05说明计数/计量数据间差异大，有统计学意义。

2 结果

2.1 血清中MMP-2表达情况

术前观察组患者血清MMP-2检测所得数据显著高于对照组，术后观察组患者血清MMP-2检测所得数据与对照组无明显差异，详情请见表1。

表1 两组纳入研究对象患者血清MMP-2指标比较（±s, ng/mL）

表1 两组纳入研究对象患者血清MMP-2指标比较（±s, ng/mL）

组别 例数 水平指标对照组 20 242.15±30.44观察组术前 85 529.24±57.15观察组术后 85 260.44±24.22

2.2 基线数据对MMP-2表达影响

观察组患者的肿瘤直径、肿瘤类型、肿瘤分期、淋巴结是否出现转移等对MMP-2有明显影响，详情请见表2。

表2 非小细胞癌患者基线数据与MMP-2表达情况比较（±s, ng/mL）

表2 非小细胞癌患者基线数据与MMP-2表达情况比较（±s, ng/mL）

项目 例数 MMP-2性别 男 69 529.32±59.41女16 528.88±47.87年龄（岁） ≤50 32 539.31±60.51＞50 53 523.14±54.73肿瘤直径（cm） ≤3 61 514.24±55.14＞3 24 567.34±43.45病理类型 鳞癌 48 515.82±58.83腺癌 37 550.48±47.80分化程度 高-中 63 532.32±55.34低22 520.31±62.62肿瘤分期 Ⅰ～Ⅱ 44 515.11±55.57Ⅲ～Ⅳ 41 545.10±55.35是否有淋巴结转移 - 21 484.24±41.64+64 543.98±53.95

2.3 血清MMP-2余癌组织MMP-2蛋白表达关联性

MMP-2蛋白阳性表达受到肿瘤直径、肿瘤类型、临床分期、淋巴结是否转移等有关联，详情请见表3。

表3 非小细胞癌患者MMP-2指标与病理参数关联性（n）

2.4 血清MMP-2与癌组织表达关系

观察组患者MMP-2蛋白阳性表达群体，自身血清MMP-2指标（560.36±45.04）ng/mL，显著高于组内阴性表达群体（490.71±46.27）ng/mL，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

在全球各种恶性肿瘤疾病当中，肺癌无论是发病率还是致死率均居于首位，大部分的肺癌患者死因为肿瘤转移、浸润等影响[6]，肿瘤转移是一个复杂过程，需要考虑到多种步骤和因素，基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinases, MMPs）属于细胞外蛋白水解酶，其作用在于能够将几乎所有细胞外基质当中的相关蛋白成分进行降解。

肺癌在当前临床收治各类恶性肿瘤疾病中，其发病率、致死率均相对偏高，肺癌对患者的致死威胁大部分为肿瘤转移、浸润等变化，肿瘤转移涉及到复杂的生理变化，其中有多种步骤、因素影响，基质金属蛋白酶（Matrix Metalloprotei-nases, MMPs）为细胞外蛋白水解酶，能够将大部分存在于细胞外基质的蛋白成分降解。基质金属蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2）是其中的一个重要家庭成员，在基底膜降解、加快新生血管形成当中扮演重要角色，在肿瘤细胞的浸润以及迁移中也发挥着不可忽视的作用[7]。

在本次研究中通过不同检查手段检测MMP-2指标于非小细胞癌患者中的血清还有癌组织表达关系，在所得数据当中可知此类患者血清MMP-2数据显著高于肺部良性病变群体，在手术治疗后指标明显下降且与对照组数据无显著差异，提示了该指标可作为判断疗效的一个标准。两种检测所得数据基本一致。MMP-2蛋白表达受到了肿瘤体积、病理类型、肿瘤分期以及淋巴结转移等因素影响，提示可将其作为评估肿瘤恶性进展的重要标志物[8]。

综上所述，为非小细胞肺癌患者进行MMP-2检测，在血清中与癌组织当中蛋白表达数据无显著差异，可将MMP-2指标作为判断肿瘤浸润、转移的一个重要指标，为患者治疗方案制定与调整做引导。