杞菊地黄丸对D-半乳糖模型小鼠抗衰老作用的研究

高立扬，薛丹，卫小杰，冯一丹，闫盎然，杨啸，吕蕊花

(陕西中医药大学，陕西 咸阳)

0 引言

衰老是生命体发展的必然趋势，自古以来长生不老都是人们向往的一种情境。我国是世界上老年人口最多、增加速度最快的国家，老龄化速度明显高于其他国家，因此研究衰老的机制、寻求抗衰老的方法刻不容缓。自由基与衰老密切相关，活性氧的增多会导致体内自由基失衡，促进体内脂质过氧化，对细胞产生损伤[1]。超氧化物歧化酶(SOD)是体内主要抗氧化酶，其活性的高低可间接反映机体消除自由基的能力[2]。自1969年被Irwin Fridovich发现SOD以来，便受到了国内外学者的广泛关注，涉及到化学、生物、医药等多个领域，近年来还发现SOD可以保护由辐射引起的肺纤维化[3]。

中医对于衰老的认识和研究历史源远流长，《黄帝内经》阐述了许多延缓衰老的养生方法，后代的众多中医药学家在此基础上进行发展与创新，完善并扩展了中医衰老理论，概括地说：主要是肾虚所导致的衰老、脾胃虚弱所导致的衰老、阴阳失调至衰、情志至衰等。杞菊地黄丸起自张仲景《金匮要略》的八味丸，由钱乙改良成六味地黄丸，后人在此基础上加了枸杞、菊花演变而成，具有滋肾养肝之功效，用于肝肾阴亏的眩晕、耳鸣、目涩畏光、视力昏花。

本实验旨在研究杞菊地黄丸对D-半乳糖引起的快速衰老小鼠SOD活性的影响，同时关注其对大脑、肾脏和脾脏系数的影响，以探讨杞菊地黄丸抗衰老的作用。

1 材料与方法

1.1 动物

SPF级KM小鼠30只(购自成都达硕实验动物有限公司)，雌性，4-5周龄，体重18-22g。

1.2 仪器

RT-2100C型酶标仪，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，恒温水浴锅，电热干燥箱，离心机。

1.3 药品与试剂

兰州佛慈杞菊地黄丸(采购自陕西中医药大学校医院)，D-半乳糖(Amresco)(采购自成都里来生物科技有限公司)，超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(采购自南京建成生物工程研究所)，0.22µm一次性针头式过滤器(Millipore)。

2 实验方法

2.1 动物分组与处理

适应性饲养2w后，将30只小鼠随机分为3组，每组10只，即空白对照组、衰老模型组、杞菊地黄丸组。衰老模型组和杞菊地黄丸组小鼠于每天上午10：00时，用一次性注射器经颈背部皮下注射过滤除菌的10%D-半乳糖，连续注射42d；杞菊地黄丸组的小鼠从第15d开始，采取灌胃的方式按照0.1g/10g的量给予10%的杞菊地黄丸溶液，每天10：00和18：00各灌胃一次，连续处理28d；空白对照组与模型组每次用等量的生理盐水灌胃。

2.2 小鼠一般行为学观察

每天对实验小鼠进行观察，包括活跃程度、进食量、饮水量、毛色等。

2.3 标本的采集及检测

2.3.1 小鼠脏器系数的测定

于最后一次给药的第二天，将各组小鼠分别称重并记录，取小鼠目内眦血后，采用颈椎脱臼法处死。分别取各组小鼠的大脑、肾脏、脾脏，用生理盐水洗净，滤纸吸干后称重，并计算其脏器系数[脏器系数(mg/g)=脏器湿重(mg)/小鼠质量(g)]。

2.3.2 小鼠血清SOD活性检测

将取出的小鼠目内眦血置于1mL离心管中，3000r离心10min进行血清分离，取上清液用于测定小鼠目内眦血血清SOD活性。

2.3.3 统计学方法

所有数据采用SPSS 25.0软件进行分析。

3 结果

3.1 行为学指标

经对小鼠行为学观察发现，空白对照组小鼠摄食量正常，饮水适量，精神良好，反应灵敏，毛色光滑。衰老模型组小鼠随着实验时间的延长食欲下降、自发活动减少、反应迟钝。杞菊地黄丸组相对衰老模型组小鼠症状有所改善。

3.2 脏器系数

测定结果表明，相对于空白对照组，衰老模型组的脑系数、肾系数和脾系数均下降，但差异不显著(P＞0.05)；将杞菊地黄丸组与衰老模型组进行对比发现，杞菊地黄丸组的脑系数、肾系数和脾系数均增高，差别也不显著(P＞0.05)(表1)。

表1 脏器系数测定结果

3.3 血清SOD活性

超氧化物歧化酶测定结果表明(图1)，与空白对照组相比，衰老模型组与杞菊地黄丸组的SOD活力明显下降，差异极显著(P＜0.01)，表明造模成功；杞菊地黄丸组与衰老模型组相比，SOD活力上升4.6%，但差别不显著(P＞0.05)。

4 讨论

杞菊地黄丸能改善由D-半乳糖所导致的快速衰老小鼠的外观，增加脑、肾、脾的脏器系数，使血液中的SOD的活力升高，但升高的作用不太明显，这可能与灌胃的剂量有关。杞菊地黄丸主要通过滋肾养肝健脾的方法延缓衰老。

图1 血清SOD活性测定结果

中医关于衰老的原因呈百家争鸣的状态，主要分为3个学说，一是肾脏虚衰学说，二是脾胃虚衰学说，三是心脏虚衰学说，现在大部分人认可的为第一种学说。杞菊地黄丸的主要成分是枸杞子和菊花，其中枸杞中的枸杞多糖可有效延缓衰老，对成纤维细胞的衰老具有拮抗作用，能延迟细胞进入衰老和凋亡状态[4]，此外，枸杞多糖对于D-半乳糖导致的亚急性衰老模型小鼠也具有抗衰老作用[5]。菊花归肺、肝经，其功能主治散风清热，平肝明目，不同类型的菊花均具有抗衰老、抗氧化和抗炎的功效[6]。

本实验结果表明，杞菊地黄丸具有一定的抗衰老作用，其作用主要途径是通过调节免疫系统、增强超氧化物歧化酶活性，但其具体机制还需进一步的深入研究。