羊只多种疫苗组合分点同时免疫效果对比试验

许 伟 ， 贺 文 ， 王 力 ， 马 杰 ， 董小强

(1.甘肃省庆阳市动物疫病预防控制中心 ， 甘肃 庆阳 745000 ； 2.甘肃省庆城县动物疫病预防控制中心 ， 甘肃 庆城 745100)

随着本市肉羊产业的快速发展，养殖数量逐年增加，由于羊只调引频繁，口蹄疫、小反刍兽疫等重大动物疫病传染风险不断增大；羊传染性胸膜肺炎、羊痘、羊梭菌病和布鲁氏菌病等人兽共患病呈地方性散发，严重影响本市肉羊养殖的健康发展，因此，做好免疫工作是当前本市羊只疫病防控的迫切需要，目前，羊只强制免疫的疫苗有口蹄疫、小反刍兽疫、布病S2株，因病设防的疫苗有山羊支原体肺炎、羊痘、羊三联四防，如果单种疫苗每种间隔7 d免疫注射，不仅免疫工作时间跨度长，而且增加了基层防疫人员免疫注射工作量和工作强度。为提高免疫工作效率，强化免疫效果，探索不同疫苗组合的免疫方法对其抗体产生的影响，试验将口蹄疫、小反刍兽疫，山羊支原体肺炎、羊痘4种疫苗每2种或3种进行不同组合，每组同时分点注射进行免疫效果检测。

1 材料与方法

1.1 试验动物 在庆城县葛崾岘乡一家规模羊场选取3月龄以上未注射过任何疫苗的健康羊230只作为试验羊，试验羊只临床检查健康，无临床疾病表现，试验羊按照规范进行饲养管理，精饲料为配合饲料，粗饲料为青干草，免疫前对试验羊进行基础抗体滴度测定，布鲁菌病抗体阴性，口蹄疫、小反刍兽疫、羊传染性胸膜肺炎、羊痘感染抗体阴性，免疫抗体滴度低于1∶16的选择为试验对象。

1.2 试验疫苗 使用疫苗名称、生产厂家、批号见表1。

表1 试验疫苗及免疫方法

1.3 试验分组 将选取的230只试验羊，随机分为9组。A1～A5组为试验组，每组30只(见表2)。B1～B4组为对照组，每组20只(见表3)。各组免疫后过敏和死亡情况见表2和表3。

表3 对照组分组免疫注射情况 (只)

表2 试验组分组免疫注射情况 (只)

1.4 免疫方法 2种和3种疫苗组合同时分点免疫方法，A1组和A4组分别注射于羊颈部两侧肌肉，A2组和A3组分别注射于羊颈部一侧肌肉和尾根内侧皮下，A5组分别注射于羊颈部两侧肌肉及尾根内侧皮下,B1～B3组颈部肌肉注射，B4组尾根内侧皮下注射。注射时严格消毒，规范操作，免疫剂量严格按照说明书要求注射(见表1)。

1.5 样品采集 免疫21 d后，分别对试验组A1～A5组和对照组B1～B4组共230只试验羊前腔静脉采血230份，每份5 mL，无菌分离血清后进行实验室免疫抗体检测。

1.6 检测试剂 口蹄疫O型、A型液相阻断ELISA检测试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，O型批号:20190305101-3、A型批号:20190314103-2。小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒，中国动物卫生与流行病学中心生产，批号:2019001。山羊传染性胸膜肺炎M0正向间接血凝诊断试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号:20180515。羊痘间接ELISA抗体检测试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号:20181121119。

2 结果

免疫结果检测结果见表4、表5。

表5 对照组免疫抗体检测结果汇总

表4 试验组免疫抗体检测结果

口蹄疫免疫抗体检测：严格按照试剂盒说明书进行操作，口蹄疫O型-A型液相阻断ELISA试验抗体效价≥27为免疫合格。试验组A1组A型口蹄疫合格24份、O型口蹄疫合格29份，合格率分别为80.0%、96.67%；A2组A型口蹄疫合格27份、O型口蹄疫合格30份，合格率分别为90.0%、100%；A5组A型口蹄疫合格28份、O型口蹄疫合格30份，合格率分别为93.3%、100%。对照组B1组A型口蹄疫合格18份、O型口蹄疫合格19份，合格率分别为90.0%、95.0%。

小反刍兽疫免疫抗体检测：严格按照试剂盒说明书进行操作，小反刍兽疫阻断ELISA阻断率(PB)>50， 判定为阳性。试验组A1组合格30份，合格率100%;A3组合格26份，合格率86.67%，A4组合格27份，合格率90.0%;A5组合格28份，合格率93.3%。对照组B2组合格19份，合格率95.0%。

山羊支原体肺炎免疫抗体检测：严格按照试剂盒说明书进行操作，正向间接血凝实验抗体效价≥23为免疫合格。试验组A4组合格30份，合格率100%。对照组B4组，合格20份，合格率100%。

羊痘免疫抗体检测：严格按照试剂盒说明书进行操作，羊痘免疫间接ELISA抗体检测OD450值≥0.25为抗体阳性。试验组A2组合格29份，合格率96.4%；A3组合格23份，合格率76.7%；A5组合格30份，合格率100%。对照组B3组合格18份，合格率90.0%。

3 讨论

3.1 对各组羊只免疫后副反应观察和抗体水平检测。结果表明：口蹄疫和小反刍兽疫；口蹄疫和羊痘；小反刍兽疫和羊痘；小反刍兽疫和山羊支原体肺炎；口蹄疫、小反刍兽疫和羊痘疫苗组合分点同时注射副反应率、副反应临床症状、免疫产生的抗体水平与单苗注射相比，差异不显著，不同疫苗产生的抗体之间相互干扰、拮抗作用不明显，抗体合格率在70%以上，均能达到国家规定的免疫抗体合格标准，因此该免疫接种方法在实际工作中可推广应用。

3.2 免疫试验过程中试验组A4组小反刍兽疫和山羊支原体肺炎，A5组口蹄疫、小反刍兽疫和羊痘，在免疫过程中个别羊只出现副反应并死亡，经临床观察分析，有可能是疫苗的剂量过大、个体差异所致，我们在今后的工作中，还需进一步做好小范围的免疫试验，以确保2种和3种疫苗分点同时注射免疫的安全可靠性。