生化检验并不是你想的那么简单

熊子明

生化检验是医学检验的重要内容，定量检测是其显著特征。很多人认为，生化检验中，只要使用先进仪器设备，配合合格试剂，由有资质的人进行操作，便可很好地开展生化检验工作。其实，生化检验并不是你想的那么简单。生化检验中存在诸多影响因素，稍有差池，便可能影响检测结果。

标本分离及测定

标本的及时分离及测定是反映标本真实情况的保障。通过NADH转化成NAD的变化，检测其物质含量的试验，血液存放时间或多或少存在影响。原因在于存放的时间越长，红细胞通过血清中的糖，实现无氧酵解，产生丙酮酸，丙酮酸促使NADH转化成为NAD，这样一来，检测结果容易出现假阳性，包括LDH、HBDH、ALT、AST、BUN等。另外，因为糖酵解，随着存放时间延长，血液中GLU按照5%～7%/小時的速度下降。故此，生化检验中要与临床做好沟通，加强抽血与标本运送人员的培训与指导，检测人员收到标本后，要迅速分离血清并完成检测。同时，全自动生化分析仪的延迟时间可设定超过60秒，延迟期内，试剂消除丙酮酸的干扰，避免假阳性。

规范抗凝剂使用

目前，临床上常用抗凝剂有肝素、枸盐酸钠以及EDTA-2K等。其中，TBA与AFU不可选择肝素作为抗凝剂，因为肝素会导致TBA与AFU试剂出现混浊现象，吸光度假性升高，影响检测结果。实际操作中，一定要按照试剂说明书正确使用。

仪器用水

合格的仪器用水直接关系检测结果准确性与可靠性。测定锌、钙、镁、磷、铜及铁等离子类项目时，仪器用水质量至关重要，虽然目前一般医院配备有生化仪制水系统，但是，制水系统基本上是制备去离子水，离子交换树脂使用一段时间后，交换能力随之下降，需要定期更换，否则制备的水离子含量较高，导致电导率升高。另外，二氧化碳、血氨等检测项目，若是水质不好，仪器用水含有的二氧化碳及氨含量较高，直接影响检测结果。如果血清中含有GLDH，仪器用水有氨，NADH被消耗，利用NADH的酶联连续监测法，结果偏高。故此，生化检验中需定期监测水质，若是仪器用水电阻<1.0M?，需要及时更换离子交换树脂或者活性炭。

试剂使用

1.参数设置。生化分析仪一般由分析程序供用户设置，如样品量、试剂量、波长以及分析方式与延迟时间、测试时间等。在此，以延迟时间与加样程序设定为例，分享如何准确设定分析参数。例如，肌酐苦味酸测定法，苦味酸基于碱性条件下，50秒前先快速与快反应物质（如乙酰、乙酸）产生红色化合物，120秒后，碱性苦味酸与慢反应物质形成阳性干扰，故此，延迟时间一般设定50～60秒，测定时间<60秒，如此一来，便可消除快反应与慢反应产生的干扰作用，提高检测的准确性与真实性。试剂说明书中关于参数的设置，一般是由厂家验证合理、有效的，不过，检验人员在实际操作中，还是需要根据实验室条件、样本结果以及仪器状态等情况适当调整，保证检测结果的可靠性。

2.校准液使用。目前，生产厂家提供的校准液一般仅仅适用于某一特定分析系统，同一项目不同方法的校准液不可混合使用。例如，胆红素钒酸盐法采用重氮法的校准液进行校准，TBA循环酶法用比色法校准液进行校准，影响检测结果准确性。不同厂家的校准品及试剂存在差异，建议检验人员选择与自己实验室相符合的校准品，保证检测准确性。

3.开瓶稳定性。开瓶稳定性是判断检验试剂质量的一个标准。现目前，某些项目的方法并不能达到人们索要求的试剂，开瓶后，在仪器内放的时间长，无须定标，例如，PH为碱性的试剂（如ALP、TP、GS），开瓶后，试剂吸收空气中二氧化碳，降低试剂本身的PH值，若是长时间开瓶不定标或者校准，检测结果便会出现偏差。故此，上机试剂量需根据实验室标本量决定，放置1～2天用量是可以的，试剂瓶的使用时间不可太长，需及时更换，另外，要根据试剂的特性及时校准。

交叉污染

全自动生化分析仪使用过程中，检验人员单做某一个项目时，结果没有问题，但是将其与某些项目组合在一起的时候，结果出现异常。这种情况，我们首先考虑是否是交叉污染。交叉污染在生化分析仪检测中很常见，原因可能是因为全自动生化分析仪的清洗系统随着仪器使用时间的延长，清洗效果下降，试剂交叉污染加剧。因此，检验人员一定要按照要求，定期维护保养全自动生化分析仪，及时更换零部件，定期对仪器进行校准，清洗到位，保证检测准确性;同时，一定要了解检验项目的试剂组成、反应原理以及所需条件，整合调整实验顺序，尽量避免交叉污染现象。