宫颈癌患者组织β-catenin、Wnt1表达及与新辅助化疗疗效的关系

谭建媛 阳莉 罗安莉

宫颈癌是全球第二大女性恶性肿瘤，数据显示，我国新发病例占发展中国家25%，且趋于年轻化，如何有效防治其发生发展是肿瘤科医生及医学界亟待解决问题之一［1-2］。化疗是当前治疗宫颈癌有效手段，特别是新辅助化疗，能显著降低肿瘤分期，延长生存期限，提高生活质量，但相关研究发现，30%以上Ⅲ～Ⅳ期患者对新辅助化疗不敏感［3-4］，因此及时、准确评估新辅助化疗疗效对临床调整化疗方案具有积极临床意义。新近研究发现，Wnt/βcatenin 信号通路参与宫颈癌发生发展，其中以Wnt1、β-连环蛋白（β-catenin）最受关注［5-6］，但关于其与宫颈癌新辅助化疗疗效关系仍缺乏循证支持，故本研究检测宫颈癌及良性子宫肌瘤患者组织β-catenin、Wnt1 表达，分析其与新辅助化疗疗效关系，以期为临床确定合理化疗方案提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2015年10月至2019年10月本院116 例宫颈癌患者作为研究组，年龄26～75 岁；体质量指数（BMI）19～24 kg/m2；选取95 例良性子宫肌瘤患者作为对照组，年龄24～76 岁；BMI18～25 kg/m2。本研究征得本院伦理委员会审核通过，患者及家属知晓并签署同意书。

1.2 纳入与排除标准

研究组纳入标准：①符合宫颈癌诊断标准［7］，结合病理学检查确诊宫颈癌；年龄＞18 岁；②属国际妇产科联盟（FIGO）Ⅰa～Ⅱb 期；③入院前1 个月无其他抗肿瘤治疗；④具备明确化疗指征。对照组纳入标准：①符合良性子宫肌瘤诊断标准［8］，表现为白带增多、经期延长、下腹坠胀、阴道流血、腰痛等症状；②术后病理结果证实良性子宫肌瘤。排除标准：①肝、心、肾等脏器器质性病变；②妊娠期及哺乳期女性；③合并其他恶性肿瘤；④近期接受放化疗及手术者；临床资料不完整者。

1.3 方法

1.3.1 检测方法

①标本采集。采集宫颈癌及良性子宫肌瘤患者手术期间切除组织，约100 mg，生理盐水清洗血迹，保存于液氮中备用。②主要设备与仪器。Wnt1 及β-catenin 一抗购自湖南远泰生物科技有限公司，Elecsys2010 电化学发光仪（瑞士Roche 公司），组织总蛋白提取试剂盒（上海邦奕生物科技有限公司）。③实时定量PCR（RT-PCR）。取手术切除组织进行石蜡包埋，提取组织总RNA，DNA 酶Ⅰ处理并纯化，3 μg RNA 及Superscript进行逆转录，生成cDNA，通过SYBP green 染料法进行定量检测，设计Wnt1、β-catenin 扩增引物序列，见表1，RT-PCR 扩增条件：94℃，5 min，10个PCR 循环［94℃，20 s，60℃，20 s，72℃，20 s，82℃，5 s］。各样品目基因及管家基因分别进行PCR 反应，根据绘制梯度稀释DNA 标准曲线，直接生成各样品目基因及管家基因浓度结果，Wnt1 mRNA 模板拷贝数以β-catenin 为内参得出校正后mRNA 相对值。

1.3.2 治疗方法

宫颈癌患者均采取新辅助化疗，静脉滴注135 mg/m2紫杉醇（四川协力制药股份有限公司，国药准字H20073913），3 h 后，静脉滴注80 mg/m2顺铂（江苏豪森药业集团有限公司，国药准字H20010743），1 d，前后两天水化，3 天一疗程，每个疗程间隔21 d，连续化疗3 个疗程。

1.3.3 疗效评价

化疗3 个疗程后进行疗效评价。按照世界卫生组织（World health organization，WHO）实体瘤评价标准评价［9］，包含完全缓解（Complete response，CR）、部分缓解（Partial response，PR）、疾病稳定（Stable disease，SD）、疾病进展（Progressivedisease，PD）等4 个等级，据此发现10 例CR、56 例PR，30例SD，20 例PD。

1.4 观察指标

①两组组织β-catenin、Wnt1 表达。②研究组不同临床病理特征组织β-catenin、Wnt1 表达。③β-catenin、Wnt1 表达与临床病理特征相关性。④研究组不同化疗疗效组织β-catenin、Wnt1 表达。⑤β-catenin、Wnt1 表达与化疗疗效关系。

1.5 统计学处理

采用SPSS 22.0 软件进行处理数据，计量资料以（）表示，行t检验，多组间比较用单因素方差分析，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，Spearman分析β-catenin、Wnt1 表达与临床病理特征相关性，Logstic 分析β-catenin、Wnt1 与新辅助化疗疗效关系，P＜0.05 表明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料

两组年龄、BMI、生育史、吸烟史、肿瘤直径等资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组临床资料［n（%），（±s）］Table 1 clinical data of 2 groups［n（%），（±s）］

表1 两组临床资料［n（%），（±s）］Table 1 clinical data of 2 groups［n（%），（±s）］

临床资料年龄（岁）BMI（kg/m2）生育史吸烟史肿瘤直径（cm）≥4＜4淋巴结转移有无组织分化低分化中、高分化FIGO 分期ⅠaⅡaⅡb病理类型鳞癌腺癌腺鳞癌研究组（n=116）50.48±10.33 21.51±1.12 104（89.66）13（11.21）60（51.72）56（48.28）32（27.59）84（72.41）42（36.21）74（63.79）18（15.52）58（50.00）40（34.48）63（54.31）32（27.59）21（18.10）对照组（n=95）51.27±9.59 21.38±1.33 86（91.49）10（10.53）45（47.37）50（52.63）----------t/χ2值0.571 0.771 0.044 0.025 0.396 P 值0.569 0.442 0.833 0.875 0.529

2.2 两组组织β-catenin、Wnt1 表达水平

研究组组织β-catenin、Wnt1 表达水平高于对照组（P＜0.05）。见表2。

2.3 研究组不同临床病理特征β-catenin、Wnt1 表达水平的比较

研究组不同肿瘤直径、淋巴结转移、组织分化、FIGO 分期患者β-catenin、Wnt1 表达比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表2 两组组织β-catenin、Wnt1 表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in 2 groups（±s）

表2 两组组织β-catenin、Wnt1 表达水平比较（±s）Table 2 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in 2 groups（±s）

组别研究组对照组t 值P 值n 116 95 Wnt1（2-△△c）16.47±4.94 11.50±3.44 8.295＜0.001 β-catenin（2-△△c）34.24±10.27 23.95±7.21 8.242＜0.001

2.4 β-catenin、Wnt1 表达水平与临床病理特征相关性

研究组组织β-catenin、Wnt1 表达与肿瘤直径、淋巴结转移、FIGO 分期呈正相关，与组织分化呈负相关（P＜0.05）。见表5。

2.5 研究组不同化疗疗效组织β-catenin、Wnt1 表达水平

化疗前研究组不同疗效患者β-catenin、Wnt1表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05），化疗后研究组CR 患者β-catenin、Wnt1 表达低于PR、SD、PD 患者（P＜0.05）。见表6。

2.6 β-catenin、Wnt1 与新辅助化疗疗效关系

Logistic 分析显示，β-catenin、Wnt1 与新辅助化疗疗效有关（P＜0.05）。见表7。

3 讨论

目前，宫颈癌的鉴别诊断及疗效评估多依赖于影像学、实验室检查，虽具有一定适用价值，但也存在不足之处，如影像学检查易受医师个人经验、费用等因素影响，实验室检查则存在取材质量不一、时间长等问题［10］。因此，探索一种高效、准确鉴别手段对宫颈癌早期诊断及防治具有重要意义。

宫颈癌是多基因、多因素、多阶段参与的生物学过程，当前证据证明，宫颈癌形成与Wnt/βcatenin 信号通路密切相关［11］。Wnt1 是Wnt 通路始动蛋白，其可刺激Wnt/β-catenin 信号通路，致使下游靶基因过度表达，最终导致肿瘤细胞过度增长。而β-catenin 是Wnt 信号向细胞核传递过程中的信号分子，疾病状态下，游离β-catenin 进入细胞核，调控靶基因表达，参与肿瘤细胞生长、侵袭［12］。靳妍霞等［13］发现宫颈癌患者癌组织Wnt1、β-catenin 呈高表达，与本研究结论相符，提示Wnt1、β-catenin 异常发表可能与宫颈癌发生、发展有关。郑小妹等［14］学者报道，随病理分级、肿瘤直径增加及淋巴结转移，β-catenin 表达逐渐升高，提示β-catenin 在宫颈癌发生发展起着关键作用。β-catenin 高表达可降低细胞上皮组织间黏附能力，增加细胞侵袭能力，加快癌细胞转移，导致宫颈癌病情进一步恶化［15］。进一步研究发现β-catenin、Wnt1 异常高表达可作为评估宫颈癌患者病情程度的指标之一。

表3 研究组不同临床病理特征β-catenin、Wnt1 表达水平比较（±s）Table 3 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different clinicopathological features of the study groups（±s）

表3 研究组不同临床病理特征β-catenin、Wnt1 表达水平比较（±s）Table 3 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different clinicopathological features of the study groups（±s）

临床病理特征年龄（岁）≥46＜46肿瘤直径（cm）≥4＜4淋巴结转移有无组织分化低分化中、高分化FIGO 分期ⅠaⅡaⅡb病理类型鳞癌腺癌腺鳞癌n 62 54 60 56 32 84 42 74 18 58 40 63 32 21 Wnt1（2-△△c）16.41±4.33 16.53±4.24 18.84±5.65 14.10±4.89 19.12±4.38 13.82±5.02 19.67±5.91 13.27±3.98 12.12±3.64 15.59±4.65 21.70±6.51 16.37±4.91 17.11±5.13 15.93±4.80 F/t 值0.150 4.816 5.256 6.953 400.815 0.404 P 值0.881＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.669 β-catenin（2-△△c）34.30±9.99 34.18±10.11 38.11±11.73 30.37±10.95 39.56±11.85 28.92±8.68 38.89±10.45 29.59±11.03 25.87±7.76 35.74±10.72 41.11±12.33 34.21±10.26 33.99±10.20 34.52±10.36 F/t 值0.064 3.667 5.310 4.447 12.114 0.165 P 值0.949＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.848

表4 β-catenin、Wnt1 表达水平与临床病理特征相关性Table 4 Correlation between expression level of β-catenin and wnt1 and clinicopathological characteristics

近年来随临床对Wnt/β-catenin 信号通路研究不断深入，部分学者发现，其水平升高是影响恶性肿瘤化疗疗效危险因素，并指出阻断其表达可抑制Wnt 信号所致Wnt/β-catenin 信号通路激活，诱导肿瘤细胞凋亡，促进疾病良好转归［16］。胡文勇等［17］认为，抑制Wnt/β-catenin 信号通路有助于增强骨肉瘤细胞化疗敏感性，改善患者生存期，为临床调整化疗方案提供理论参考。由此可见，Wnt/β-catenin 信号通路可为肿瘤分子靶向治疗提供新手段，但关于其在宫颈癌新辅助化疗中作用尚无相关研究，故本研究对此进行探讨结果发现β-catenin、Wnt1 可作为评估宫颈癌新辅助化疗的指标之一。

表5 研究组不同化疗疗效组织β-catenin、Wnt1 表达水平比较Table 5 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different chemotherapy effect tissues of study group（±s）

表5 研究组不同化疗疗效组织β-catenin、Wnt1 表达水平比较Table 5 Comparison of expression levels of β-catenin and wnt1 in different chemotherapy effect tissues of study group（±s）

疗效分级CR PR SD PD F 值P 值n 10 56 30 20 Wnt1（2-△△c）化疗前15.53±4.60 16.35±4.05 16.89±3.97 17.11±3.56 0.467 0.706化疗后12.44±3.73 14.89±4.46 18.56±5.57 21.67±4.26 14.572＜0.001 β-catenin（2-△△c）化疗前33.39±11.85 33.95±11.38 34.89±10.29 34.73±10.42 0.081 0.970化疗后22.78±6.84 26.61±7.99 35.57±10.67 40.33±12.10 15.366＜0.001

综上所述，宫颈癌患者组织β-catenin、Wnt1 呈高表达，其表达情况与临床病理特征、新辅助化疗疗效密切相关，有利于宫颈癌早期鉴别诊断及指导临床治疗。

表6 β-catenin、Wnt1 与新辅助化疗疗效关系Table 6 Relationship between β-catenin，wnt1 and neoadjuvant chemotherapy