血清MMP-9和LCN-2水平在乳腺癌患者中表达意义及相关性分析

赵凌云

乳腺癌属国内女性常见且高发的恶性肿瘤疾病，因乳腺癌生物学特性影响，其癌细胞可经血液循环途径与淋巴途径呈隐匿性转移，进而诱导癌细胞浸润其他器官组织致功能衰竭，导致患者死亡率较高［1］。近年临床针对乳腺癌的诊治技术发展，乳腺癌患者5年生存期得以延长，但依旧有25%～37%的患者因乳腺癌复发、转移致死［2］。故如何有效防控乳腺癌复发、转移成为业界研究热点。张冬冬等［3］指出，乳腺癌复发及癌细胞转移均与毛细血管再生及细胞外基质损伤有关。研究认为［4］，基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）可降解细胞基底膜，促毛细血管生长效应，亦增强癌细胞侵袭、转移功能。曹亚男等［5］研究指出，脂质运载蛋白-2（Lipocalin-2，LCN-2）与诸多恶性肿瘤发生、进展有密切关联。对此本研究将，探析血清MMP-9 和LCN-2 表达水平在乳腺癌患者中的意义及临床病理特征的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集本院2018年3月至2019年12月收治的乳腺癌患者80 例，设为乳腺癌组，年龄36～71 岁，平均年龄（53.76±9.74）岁。29 例肿瘤直径＜2 cm，51 例肿瘤直径≥2 cm，48 例伴有淋巴结转移。病理诊断符合中国临床肿瘤学会（CSCO）《乳腺癌诊疗指南》标准［6］。基于《乳腺及女性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》组织学分类标准［7］，收集同期收治的乳腺良性病变患者43 例，设为乳腺良性病变组。另收集医务志愿者40 例，对照组。各组年龄比较无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：①乳腺癌经病理诊断；②临床资料齐全；③检测前未开展放化疗或激素干预；④知情同意，经医院医学理论委员会讨论批准。排除标准：①合并代谢性疾病者；②肝肾功能不全；③伴严重感染者；④合并心血管疾病。

1.2 方法

取各组外周静脉血（空腹、晨间）3 mL，离心10 min（3 000 r/min），分离血清。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清LCN-2（RD 公司生产试剂盒）、MMP-9（晶美生物技术公司生产试剂盒）表达水平，严格遵循试剂盒操作标准执行，根据标准曲线计算LCN-2、MMP-9 含量。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行分析，计量资料采用（）表示组间比较采用t检验或方差分析，计数资料用n（%）表示比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman 法，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清MMP-9、LCN-2 的含量比较

血清MMP-9、LCN-2 表达水平比较结果为：乳腺癌组＞乳腺癌良性病变组＞对照组，差异无统计学意义（P＞0.05），表1。

表1 各组血清MMP-9、LCN-2 的含量比较（±s）Table 1 Comparison of serum MMP-9 and LCN-2 levels in each group（±s）

表1 各组血清MMP-9、LCN-2 的含量比较（±s）Table 1 Comparison of serum MMP-9 and LCN-2 levels in each group（±s）

注：与乳腺良性病变组比较a P＜0.05，与健康对照组比较b P＜0.05。

组别乳腺癌组乳腺良性病变组对照组F 值P 值n 80 43 40 MMP-9（ng/mL）96.02±23.25ab 27.26±14.47 23.22±11.85 286.44＜0.001 LCN-2（ng/mL）95.27±27.68ab 54.39±21.23 48.57±19.09 66.99＜0.001

2.2 血清MMP-9、LCN-2 表达与乳腺癌临床病理特征的关系

乳腺癌患者血清MMP-9、LCN-2 表达水平与肿瘤直径、TNM 分期期、淋巴结转移、ER、PR 明显相关，差异有统计学意义（P＜0.05），与年龄、分化程度、组织学类型无相关，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 血清MMP-9、LCN-2 表达与乳腺癌临床病理特征的关系（±s）Table 2 Relationship between serum MMP-9、LCN-2 expression and clinicopathological characteristics of breast cancer（±s）

表2 血清MMP-9、LCN-2 表达与乳腺癌临床病理特征的关系（±s）Table 2 Relationship between serum MMP-9、LCN-2 expression and clinicopathological characteristics of breast cancer（±s）

项目年龄（岁）＜50≥50肿瘤直径（cm）＜2≥2 TNM 分期Ⅰ～ⅡⅢ～Ⅳ淋巴结转移有无ER+-PR+-分化程度低分化中分化高分化组织学类型特殊型非特殊型n 27 53 29 51 49 31 48 32 58 22 50 30 13 52 15 14 66 MMP-9（ng/mL）91.05±28.54 97.33±34.07 80.25±21.04 127.85±35.19 87.25±20.22 133.76±41.08 119.25±30.86 73.06±20.41 124.73±30.58 85.62±24.07 108.69±33.46 76.89±23.58 92.66±24.29 86.24±29.33 83.67±28.26 90.28±31.46 98.77±24.21 t/F 值0.822 6.631 6.753 7.443 5.391 4.565 0.38 1.129 P 值0.414＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 0.687 0.262 LCN-2（ng/mL）89.67±31.02 95.33±27.54 67.29±24.36 113.07±35.72 71.08±19.33 107.36±31.82 99.35±30.85 68.92±21.03 93.17±18.25 79.36±31.05 99.28±27.63 76.15±31.07 101.22±39.56 91.69±35.52 96.25±31.13 91.68±30.74 95.14±27.61 t/F 值0.833 6.131 6.352 4.871 2.459 3.459 0.41 0.418 P 值0.408＜0.001＜0.001＜0.001 0.016 0.001 0.665 0.677

2.4 血清MMP-9、LCN-2 相关性分析

经Spearman 相关性分析，乳腺癌患者血清MMP-9、LCN-2 表达与ER、PR 均呈正相关（P＜0.05），乳腺癌患者血清MMP-9 与LCN-2 亦呈正相关（P＜0.05），见表3。

表3 血清MMP-9、LCN-2 相关性分析Table 3 Correlation analysis of serum MMP-9 and LCN-2

3 讨论

乳腺癌复发及远端转移属预后结局高危独立影响因素［8］。因细胞基底膜损伤，导致细胞与细胞连接基质防御结构异常，致使肿瘤原发病灶周围结缔组织浸润，进而引发远端转移。研究发现［9］，MMP-9 则是细胞外基质降解重要参与蛋白水解酶之一，可降解细胞基底膜，破坏基底膜屏障，提高癌细胞组织浸润、转移风险。研究指出［10］，正常人机体内MMP-9 含量较低，但受癌细胞及相关致癌因子刺激，可诱导分泌MMP-9，造成血清MMP-9 表达增高。Rašić 等［11］研究，MMP-9 可对肿瘤基因转录调节，降解纤维粘连蛋白、Ⅳ型胶原，还能增加癌细胞黏附能力，在肿瘤复发、浸润、转移等环节均有促进作用。周宁等［12］发现，乳腺癌病理特征与MMP-9 水平有明显关联。故众学者认为，通过测定患者血清MMP-9 水平表达可评估恶性肿瘤进展程度。

本研究结果发现，乳腺癌患者血清MMP-9 含量明显高于健康人员及乳腺良性病变患者，且血清MMP-9 水平与肿瘤直径、淋巴结转移、ER、PR表达相关；与患者年龄、分化程度、组织学类型并无关联。证实血清MMP-9 表达水平可评估乳腺癌复发或转移情况。李金涛等［13］动物研究发现，MMP-9 与肿瘤毛细血管生成因子有明显协同作用，且血清MMP-9 表达水平越高，其肿瘤血管生成率越大。本研究中，乳腺癌患者ER、PR 表达与血清MMP-9 呈正相关，说明在乳腺癌病变进展过程MMP-9、ER、PR 存在相互协同效应，但受研究样本限制，相关协同机制尚未解析。

早期研究证实，LCN-2 对细胞信号传递、内环境调控及免疫调节均有积极参与。多项研究发现［14］，LCN-2 在肺癌、肝癌、食管癌、乳腺癌等诸多恶性肿瘤中均呈表达上调，推论LCN-2 在常见恶性肿瘤的发生、进展扮演重要角色。Bauer 等［15］研究，乳腺癌细胞的凋亡、浸润、转移过程中LCN-2 均有参与。毕泗成等［16］研究，血清LCN-2 水平与恶性肿瘤淋巴结转移、HER2/neu 过表达及Ki67 均有明显相关性。研究指出［17］，LCN-2 基因抑制可延缓乳腺癌肿瘤生长，抑制癌细胞增殖及转移。反之LCN-2 高表达可诱导EMT，增加癌细胞复发、转移风险。本研究结果提示LCN-2 高表达参与乳腺癌病理进展过程。

研究报道［18］，恶性肿瘤患者血清LCN-2 过表达可抑制MMP-9 降解效率，LCN-2 与MMP-9 可生成复合产物NGAL/MMP-9，提高癌细胞浸润反应。张萍等［19］研究亦发现，血清LCN-2 与MMP-9 高表达患者5年预后生存质量较差，存活率显著低于LCN-2 与MMP-9 低表达患者。本研究中乳腺癌患者血清LCN-2 与MMP-9 表达呈正相关，经分析可能与LCN-2 保护调节MMP-9 活性，促进乳腺癌生长进展相关。提示LCN-2 与MMP-9 高表达属乳腺癌复发、转移的主要影响因素，与病情进展相关。

综上所述，乳腺癌患者血清LCN-2、MMP-9 均呈高表达，增加乳腺癌细胞浸润、转移风险；联检血清LCN-2、MMP-9 表达水平，有助于预测评估乳腺癌复发、转移情况。