加味舒心汤对急性心梗大鼠再灌注损伤的干预

林冬铭　陈超　陆明　杨明　石晨卉　黄抒伟

[摘要] 目的 探讨加味舒心汤对急性心梗大鼠再灌注损伤的保护作用。 方法 45只SD大鼠，建立气虚血瘀模型，随机分为假手术组（Sham组）、模型组（Control组）及加味舒心汤干预组（Treated组）。Sham组只开胸穿线不结扎，Control组与Treated组建立心梗再灌注模型。再灌注1周后观察各组的超声心动图，比较心肌无复流面积、心肌梗死面积及HE染色。 结果 超声心动图结果显示Control组的左室收缩末内径（LVESD）和左室舒张末内径（LVEDD）较Sham组扩大（P<0.05），左室短轴缩短率（FS）较假手术组降低（P<0.05）;Treated组与Control相比，LVESD及LVEDD有改善（P<0.05），且LVEF和FS得到提高（P<0.05）;心肌无复流面积和心肌梗死面积比较，Treated组的梗死面积和无复流面积较Control组缩小（P<0.05）。 结论 加味舒心汤可改善急性心梗大鼠的再灌注损伤。

[關键词] 加味舒心汤;急性心肌梗死;再灌注损伤;大鼠

[中图分类号] R542.22          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）14-0034-04

[Abstract] Objective To explore the protective effect of Jiawei Shuxin Decoction on reperfusion injury in rats with acute myocardial infarction. Methods The qi deficiency and blood stasis model was established for 45 SD rats and they were randomly divided into sham operation group（sham group）， model group（control group） and Jiawei Shuxin Decoction intervention group（treatment group）. The Sham group was only given open chest surgery and needle threading without ligation. The control group and the treatment group were given the established myocardial infarction reperfusion model. The echocardiogram in each group was observed after one week of reperfusion， and the myocardial no-reflow area，myocardial infarction area，and HE staining were compared. Results The echocardiographic results showed that the left ventricular end systolic diameter（LVESD） and left ventricular end diastolic diameter（LVEDD） in the control group were larger than those in the sham group（P<0.05）. Left ventricular short-axis shortening rate was lower than that in the sham group（P<0.05）. Compared with the control group，the LVESD and LVEDD in the treatment group were improved（P<0.05）， and LVEF， FS was improved（P<0.05）. Myocardial no-reflow area and myocardial infarction area were compared，and the infarct area and no-reflow area in the treatment group were smaller than those in the control group（P<0.05）. Conclusion Jiawei Shuxin decoction can improve reperfusion injury in rats with acute myocardial infarction.

[Key words] Jiawei Shuxin decoction;Acute myocardial infarction;Reperfusion injury;Rats

近年来，虽然急性心肌梗死的死亡率较前下降明显[1-4]，但其总体预后仍有待进一步提高。急性心肌梗死主要是在冠状动脉病变的基础上，发生冠状动脉血供的中断或急剧下降，使心肌严重而持久的急性缺血，最终出现心肌细胞坏死。其病理进程相对明确，但如何进一步优化其治疗，仍是研究的重要课题。在优化急性心梗西医治疗方案的同时，中医中药亦发挥着重要作用。诸多研究证实，中医药可以改善急性心肌梗死的再灌注损伤。

加味舒心汤是全国名老中医药专家学术经验继承工作指导老师程志清教授针对气虚血瘀型冠心病拟定的经验方，其以益气活血、化瘀通络为治则，在临床上取得了良好的疗效[5-8]。但对于该经验方的病理生理作用及机制尚未进行深入研究。本研究拟在临床研究的基础上开展实验研究，探讨加味舒心汤对急性心梗的再灌注影响，为该方的应用提供理论基础。

1 材料與方法

1.1 实验动物

SD大鼠45只，雄性，体重（250±10）g，购于浙江中医药大学动物实验研究中心，许可证号：SYXK（浙）2018-0012;实验动物生产单位为上海西普尔必凯实验动物有限公司，许可证号为：SCXK（沪）2013-0016。

1.2 实验药品

加味舒心汤：该方以黄芪为君药，由生黄芪15 g，太子参15 g，麦冬12 g，五味子5 g，丹参15 g，绛香9 g，赤芍12 g，柴胡10 g，枳壳12 g，红景天12 g，瓜蒌皮12 g，薤白9 g，郁金12 g组成。研究采用原方等量颗粒剂（根据颗粒药材说明书，折合成颗粒剂为：黄芪颗粒2.25 g，太子参颗粒 2.25 g，麦冬颗粒3.60 g，五味子颗粒0.83 g，丹参颗粒3.00 g，降香颗粒0.75 g，赤芍颗粒1.80 g，柴胡颗粒1.67 g，枳壳颗粒2.00 g，红景天颗粒1.20 g，瓜蒌皮颗粒3.60 g，薤白颗粒2.25 g，郁金颗粒1.20 g），中药颗粒购于浙江中医药大学附属第二医院。

1.3 建模及分组

1.3.1 气虚血瘀型大鼠模型建立  （1）饥饿：测得SD大鼠常规饮食量为25 g/（只·d），按60%的常规饮食量饲养，即15 g/（只·d），分为早晨8点8 g/（只·d），晚8点7 g/（只·d）;（2）疲劳：每天在深45 cm水桶中游泳，水温（37.5±0.5）℃，出现下沉时捞出;（3）高脂饮食：每天按10 mL/kg脂肪乳灌胃。以上操作程序持续10 d。

1.3.2 动物与分组  45只气虚血瘀型SD大鼠，随机分为3组，每组15只。（1）假手术组（Sham组），只开胸穿线不结扎，每天予等量生理盐水灌胃;（2）模型组（Control组），每天予等量生理盐水灌胃;（3）加味舒心汤干预组（Treated组），将颗粒剂溶于500 mL生理盐水，以10 mL/（kg·d）给药，每天灌胃。各组在心肌梗死再灌注模型构建成功后当天开始灌胃给药，灌胃给药治疗共计4周。

1.3.3 心梗再灌注模型的建立  除假手术组只开胸穿线不结扎外，其余各组均参照文献[9]建立心梗再灌注模型。方法如下：麻醉后固定大鼠，气管插管连呼吸机;碘伏消毒胸前区，从左侧3～4肋间打开胸腔，放入扩胸器充分暴露心脏;镊子拨开心包，充分暴露肺动脉圆锥及左心耳下缘，结扎部位为肺动脉圆锥与左心耳下缘连线中点靠下处，使用6-0号线结扎该处心肌（Sham组大鼠只穿线不结扎）;观察心脏变化，左室前壁及心尖部由红色变为苍白色说明结扎成功，否则重新结扎。结扎1 h后，解开结扎线进行再灌注，关胸缝合皮肤，再次用碘伏消毒，待大鼠脱机后拔出气管插管，并放回笼内饲养。

1.4 观察指标

1.4.1 各组间用心脏超声评价心功能  再灌注1周行超声心功能检查[包括左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（FS）、左室收缩末内径（LVESD）和左室舒张末内径（LVEDD）]。

1.4.2 心肌无复流面积和心肌梗死面积比较  1周后处死大鼠，处死前予伊文氏蓝、硫黄素染色，取下心脏，切片行石蜡包埋。以AutoCAD2019图形设计软件计算大鼠心肌各断面缺血区域面积（Risk area，RA）、梗死区域面积（Myocardial infarction area，MIA）及无复流区域的面积（No-reflow Area，NRA）。大鼠心肌缺血区面积以各断面RA之和/左心室各断面面积（Left ventricle area，LVA）之和表示，即RA/LVA;梗死面积则为各断面MIA 之和/LVA之和，即为MIA/LVA;而无复流的面积则为NRA之和/LVA之和，即NRA/LVA[10-11]。

1.4.3 各组间Hematoxylin-Eosin（HE）染色病理组织学比较  1周后处死大鼠，取下心脏，切片行石蜡包埋。经过切片与贴片、脱蜡、水化、染色、脱水透明、封固处理，比较各组间HE染色结果。

1.5 统计学处理

采用SPSS 21.0统计学软件处理。计量资料均以（x±s）表示，方差齐性者，三组间比较用方差分析，多个均数间两两比较用LSD-t检验;两组间比较用独立样本t检验，若方差不齐性者，两组间比较用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 再灌注1周各组大鼠超声心动图结果比较

再灌注1周后心超比较，模型组（Control组）、假手术组（Sham组）及加味舒心汤干预组（Treated组）三组间有差异。模型组（Control组）的左室收缩末内径（LVESD）和左室舒张末内径（LVEDD）较假手术组（Sham组）扩大，左室短轴缩短率（FS）较假手术组（Sham组）降低;加味舒心汤干预组（Treated组）与模型组（Control组）相比，LVESD及LVEDD有改善，且LVEF和FS得到提高，见表1。超声心动图见封三图2。

2.2 各组再灌注心肌心肌梗死、无复流面积比较

模型组（Control组）与加味舒心汤干预组（Treated组）相比缺血面积比相似（P>0.05），表明各组间基线一致，其梗死面积及无复流面积具有可比性。与模型组（Control组）相比，加味舒心汤干预组（Treated组）的梗死面积和无复流面积缩小，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 各组大鼠心肌组织HE染色病理变化

假手术组（Sham组）HE染色可见大鼠心肌组织排列规则整齐，胞质染色均匀成粉红色，细胞核形态规则，椭圆居中，淋巴细胞较少。模型组（Control组）梗死区心肌细胞排列紊乱、增粗，间隙较正常增大，细胞核形态不规则改变，并出现炎症细胞浸润和间质纤维化。加味舒心汤干预组（Treated组）心肌组织较模型组（Control组）明显改善，见封三图3。

3 討论

在心血管领域，冠脉介入及溶栓技术的发展使冠脉大血管问题迎刃而解，然而缺血再灌注损伤仍是一个棘手的难题[12]。急性心肌梗死最重要的治疗手段是尽早恢复冠脉血供，但缺血的心肌组织再次恢复灌注时会发生不可逆的损伤，被称为缺血再灌注损伤。研究证实其机制主要与氧化应激反应、钙超载、炎症因子及线粒体膜通透性等相关[13-14]。

祖国医学在减少缺血再灌注损伤方面进行了不少探索，诸多研究证实，中医药不仅能改善心肌缺血症状，还存在对缺血再灌注的保护机制。在中药单体方面，Liu H等[15]发现姜黄素可改善心肌缺血再灌注损伤，且机制与氧化应激相关。研究发现，栀子提取物栀子苷能减少LDH、CK的漏出，提升SOD的活力，降低MDA的含量，减轻心肌细胞损伤[16]。还有学者发现，苦豆子的有效成分苦豆碱能降低心肌细胞中的炎症因子，如TNF-ɑ、IL-6和IL-1β浓度，并通过增加p-PI3K和p-AKT蛋白水平发挥细胞保护作用[17]。于佳慧等[18]认为中药丹参提取物丹参酮ⅡA可改善心肌细胞活性，降低P62、Beclin-1及LC3Ⅱ等自噬相关蛋白表达，促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，改善细胞凋亡;Refli Hasan等[19]研究认为月桂叶提取物可改善大鼠心肌梗死，且机制与C反应蛋白与髓过氧化物酶相关。在中药组方方面，益气解毒方可减轻细胞钙超载，并通过调控外源性凋亡途径改善心肌细胞凋亡[20]。芪参颗粒[21]能降低细胞内炎症因子相关基因的表达，从而发挥减轻心肌细胞的损伤作用。痰瘀同治方[22]可减少自噬小体，降低Beclin-1的表达，表明中药复方痰瘀同治方预处理可以保护心肌细胞的缺血再灌注损伤;芪参胶囊可通过MEK/ERK途径改善心肌梗死大鼠心功能并促进新生血管生成[23]。

加味舒心汤是全国名老中医药专家学术经验继承工作指导老师程志清教授的经验方，程老认为冠心病的发病基础为心气虚，“气虚而血滞”及“气弱而血不行”，正如王清任所言“元气既虚，必不能达于血管，血管无气，血液在血管中运行势必迟缓乃至瘀阻”。程老对气虚血瘀型冠心病治以益气活血、化瘀通络之法，在陆青芷教授舒心宝基础上拟定加味舒心汤，在临床上应用取得良效。该方以黄芪生脉饮为基础方：方中黄芪甘温，补气固表，太子参甘微寒，补心阴振元气，益气复脉安神。麦冬甘寒，具有滋阴益精、养阴益气之功效。五味子酸温，敛肺止汗，生津止渴，兼敛耗散之气，收先天天癸之原。太子参、麦冬、五味子三药相合，补、清、敛相得。方中加用丹参、降香、赤芍、柴胡、枳壳以行气活血化瘀;红景天健脾益气，活血化瘀;瓜蒌皮、薤白舒胸宣痹;郁金理气活血;全方共奏益气养阴、活血舒痹之功效。

本研究以经验方加味舒心汤为研究对象，开展实验研究，研究发现心梗缺血再灌注大鼠予加味舒心汤治疗1周后左室内径和射血分数等均有所改善，提示加味舒心汤可改善心室重构、降低心梗后心衰的发生率;同时实验结果显示其能减轻急性心肌梗死后的心肌损伤，缩小NR面积，为中医药治疗缺血再灌注损伤提供新的途径;心肌细胞HE染色亦证实，加味舒心汤可以改善炎症细胞浸润及心肌纤维化。

但本研究仍存在一定的局限性，因研究样本量较少，故需要更多的样本来明确加味舒心汤的疗效，且研究周期短，需进一步延长再灌注后观测时间来评估加味舒心汤的中远期疗效，再者本研究未涉及机制研究，仅局限于动物实验。

下阶段拟进一步扩大样本量，拟再次证实加味舒心汤对于急性心梗大鼠缺血再灌注的保护作用。同时，目前对于加味舒心汤的作用机制尚不明确，将以Neuregulin-1自分泌为靶点进一步探讨其作用机制。

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（收稿日期：2019-12-30）