水溶性抗氧化剂脂质体的制备和性能研究

唐珍宝

摘 要 为确定脂质体的最佳配方，本课题对维生素C脂质体进行研究，采用薄膜分散—超声乳化法制备，以包封率为考察指标，通过测量脂质体在28天内的粒径分布，最终确定脂质体的制备方法及保存条件。

关键词 维生素C;脂质体;薄膜分散法;包封率

维生素C（Vitamin C）又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素，最早作为一种添加剂用在化妆品中，具有美白功效。维生素C安全性很好，但是其水溶液不稳定，容易变色且不易被皮肤吸收。经脂质体包封后，可增加维生素C的稳定性，并使其具有较长的功效，因此在化妆品工业、医药工业等方面能够得到更为广泛[1]。

1材料与仪器

试剂：抗坏血酸（AR）、三羟甲基氨基甲烷（AR）、浓盐酸（AR）、大豆磷脂（食用级）、乙醇（AR），胆固醇（AR）、甲醇（AR）、氯仿（AR）

仪器：电子天平、旋转蒸发仪、循环水式真空泵、Zeta电位纳米粒度分析仪、紫外可见分光光度计

2实验内容和方法

2.1 薄膜均质法机理

薄膜均质法是应用最广泛的制取脂质体的方法，将磷脂与胆固醇溶解于有机溶剂中，并将此溶液置于圆底烧瓶中，旋转减压蒸干，磷脂会在烧瓶内壁上形成一层很薄的膜，加入一定量的缓冲溶液，旋转震荡可以使烧瓶内壁的薄膜水化脱落，就可得到脂质体，这种方法对于水溶性药物可获得较高的包封率，但操作较烦琐。

2.2 薄膜均质法制备维生素C脂质体

具体操作步骤：称取0.02g胆固醇，2.5mL大豆卵磷脂溶液（32g/L），5mL乙醇依次加入到圆底烧瓶（250mL）中，45℃水浴下用旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，待有机溶剂挥发完后，真空继续抽吸30min后在圆底烧瓶底部形成均匀薄膜，量取15mLTris-盐酸缓冲液加入到烧杯（50mL）中，用电子天平准确称取一定量的抗坏血酸加入到缓冲液中，不断摇晃使抗坏血酸溶解在缓冲液中，将烧杯中缓冲液加入到圆底烧瓶中，旋转蒸发继续30～40min后至圆底烧瓶壁上脂质完全溶解，形成均一乳白色悬浊液，置于超声波清洗仪中超声8min，过微孔滤膜5-10次，编号保存于离心管中，并将制备好的样品放置于4℃的低温下避光保存[2]。

2.3 游离维生素C与维生素C脂质体的分离

具体操作：用20mL蒸馏水冲洗G-25凝胶柱，待柱子中的水滴完后，加1号样品，待样品滴加完毕后，用3mL蒸馏水润洗，直至液滴由乳白色变澄清。用20mL乙醇冲洗柱子，再用20mL蒸馏水冲洗柱子，待蒸馏水滴完后，加2号样品，待样品滴完后，用3mL蒸馏水润洗，直至液滴由乳白色变澄清。用20mL乙醇冲洗柱子，再用20mL蒸馏水冲洗柱子，待蒸馏水滴完后，加3号样品，待样品滴完后，用3mL蒸馏水润洗，直至液滴由乳白色变澄清。再用20mL乙醇冲洗柱子，再用20mL水冲洗柱子，待蒸馏水滴完后，添加4号样品，直至5号样品过完葡聚糖G-25凝胶柱子。

将收集在离心管中的5个维生素C脂质体样品悬浮液，放入超低温冰箱，冷冻24小时，在将样品放入冷冻干燥机，干燥24小时。将冻干后的样品用甲醇溶解，过滤，取滤液定容稀释至合适的浓度。紫外分光光度计测定维生素C的吸光度，计算出包封率。

2.4 维生素C标准曲线的制备

分析天平称取0.020g维生素C于小烧杯（50ml）中，并全部转移至容量瓶（100mL）用蒸馏水定容至刻度，并摇匀，得标准溶液，其浓度为200μg/mL。从容量瓶中用移液管分别取1、2、3、4、5mL维生素C标准溶液，加入到1、2、3、4、5支比色管（50mL）并用蒸馏水定容至刻度。

2.5 脂质体包封率的测定

冷冻干燥后的维生素C脂质体呈固态，需要溶解至澄清透明方可测量其吸光度，样品中游离的脂质体溶于水易被水乳化，呈乳悬状，为此需加入部分乙醇使游离的脂质体溶解，通过实验测试，最佳配置比乙醇：水为2：1，此时的溶液澄清透明。将五个样品先用乙醇再加水比例按2比1定容到50mL的比色管中，然后分别取1mL加入到10mL的比色管中，定容至刻度线，个别样品出现沉淀，用离心机离心后再定容，配置好后置于阴暗处避光待测[3]。

3结果与分析

3.1 维生素C对脂质体包封率的影响表1各样品对应包封率

3.2 结果分析

最终测出的实验数据表明5号样品的包封率最大，即最佳的质量配比卵磷脂：胆固醇：维生素C为4：1：5，2号样品的包封率最小，3号样品与4号样品的包封率近似相等。

4误差分析

①过葡聚糖凝胶柱有少量游离的维生素C未被除去，造成测量值偏高;②配置维生素C标准溶液样品未用乙醇：水为2：1的比例配制，而全部用水定容。造成测量时的误差;③维生素C易见光受热分解，试验中未能时刻保证制备的样品处于避光低温的状态，可能造成测量值偏小;④操作过程中有少量样品遗失，造成测量值偏小;⑤稀释时有个别样品出现微量沉淀物，可能实验操作或保存时混入杂质，对实验结果造成影响。

参考文献

[1] 刘亚文，曹光群，陈婷婷.維生素C脂质体的制备研究[J].大豆科学，2007（2）：270-272.

[2] 张树彪，许英梅，胡剑钧，等.脂质体研究综述[J].大连民族学院学报，2004（3）：6-9.

[3] 杜修桥，胥传来，乐国伟，等. VC新剂型——脂质体的制备及性质初探[J].粮食与饲料工业，2001（11）：27-30.