CDCA2在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

罗金武 肖亿 孙兴 覃鑫 苏泽 张智

(广西医科大学第五附属医院肝胆外科，广西 南宁 530021)

肝癌是常见的恶性肿瘤之一，病发率与死亡率高，对人类的生命与健康产生着极大威胁[1-2]。肝细胞肝癌是肝癌中国最常见的类型，约占肝癌85%～90%[3]，恶性程度高，侵袭性强。临床治疗肝癌的手段主要包括手术治疗、经肝动脉化疗栓塞术(TACE)及放化疗等方法[4-5]。细胞分裂周期相关蛋白2(cell division cycle associated 2，CDCA2)是蛋白磷酸酶1的一个结合亚基，主要作用是负责在有丝分裂后期，帮助蛋白磷酸酶与染色质的结合，协助细胞完成有丝分裂的过程。近年来研究[6-8]发现在肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺导管腺癌、口腔鳞状细胞癌中均发现其蛋白表达较高，并与肿瘤恶性程度相关。本研究通过分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库(http://cancergenome.nih.gov/)，探讨CDCA2基因在原发性肝细胞癌的表达情况以及与临床病理和预后的相关性。

1 材料与方法

1.1下载TCGA数据库 下载TCGA中TCGA LIHC Cohort (Liver Cancer)中相关的RNA-Seq数据，共纳入363例原发性肝细胞癌患者，其中癌与配对的癌旁组织50例。男246例，女117例。确诊时年龄16～90岁，临床分期：Ⅰ期168例，Ⅱ期83例，Ⅲ期84例，Ⅳ期4例，未知24例。

1.2ROC诊断试验及生存分析 通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)将原发性肝细胞癌363例患者与癌旁50例的CDCA2表达量进行分析其在诊断原发性肝细胞癌中的灵敏度和特异度。同时，将363例原发性肝细胞癌患者中CDCA2表达量与其对应的临床特征信息相匹配。以CDCA2表达量的中位数为界限，将原发性肝细胞癌患者分为低表达组和高表达组，采用Kaplan-Meier法和Log-Rank法检验绘制总体生存曲线图，并比较两组的差异。

1.3统计学方法 采用SPSS 23.0进行统计学分析，采用t检验比较CDCA2在原发性肝细胞癌和癌旁组织中表达水平的差异，采用χ2检验分析CDCA2表达水平与患者临床资料的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1CDCA2基因在原发性肝细胞癌组织中的表达情况 总体363例原发性肝细胞癌样本的癌和癌旁组织中的CDCA2的表达水平分别为(5.310 6±1.623 9)和(2.291 2±1.224)，差异有统计学意义(t=75.04，P<0.000)。50例配对的原发性肝细胞癌和癌旁组织中的CDCA2表达水平分别为(5.095 5±1.549 4)和(2.291 2±1.224)，差异有统计学意义(t=12.921，P<0.001)，说明CDCA2在原发性肝细胞癌中呈现高表达。

2.2CDCA2基因在原发性肝细胞癌中的诊断价值 结果分析发现，ROC曲线下面积AUC为0.929，其中敏感性为84.0，特异性为90.0，95% CI为0.900～0.952，见图1。

2.3CDCA2基因与原发性肝细胞癌患者临床病理特征的关系 结果表明，CDCA2基因表达与原发性肝细胞癌患者的年龄、AFP值、病理分级、T分期、M分期、临床分期均有关，差异均有统计学意义(P<0.05)，但与患者性别、肝功能分级、N分期无关，差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 CDCA2表达与原发性肝细胞癌患者临床病理特征的关系

2.4CDCA2基因与原发性肝细胞癌患者生存分析的关系 总体363例样本中CDCA2低表达组和高表达组的总体生存时间(overall survival,OS)分别为(938.98±777.51)和(721.15±679.54)d，差异有统计学意义(Log-rank=32.58，P<0.00)，说明CDCA2表达与原发性肝细胞癌患者的OS密切相关，见图2。同时研究发现CDCA2低表达组和高表达组的无复发生存期(recurrence-free survival,RFS)分别为(698.25±658.37)和(522.55±570.88)d，差异有统计学意义(Log-rank=32.58，P<0.001)，说明CDCA2表达与原发性肝细胞癌患者的RFS密切相关，认为CDCA2高表达的患者的生存预后较低表达CDCA2患者差，见图3。

3 讨 论

肝细胞肝癌是肝癌中国最常见的类型，约占肝癌85%～90%，具有恶性程度高，侵袭性强，由于在早期没有明显临床症状，发现时常处于中晚期，研究发现初诊时约50%的患者已经达局部晚期或出现肝外转移。研究[9]发现CDCA2可以在细胞周期中调节PP1γ依赖性必需DNA损伤反应的表达，同时CDCA2以PPI依赖性方式调节主要有丝分裂组蛋白H3的磷酸化[10]。此外，CDCA2蛋白还通过协调细胞核膜的重塑来参与有丝分裂时细胞核的重建,研究发现通过RNA干扰技术降低细胞中CDCA2蛋白表达时，不仅会使染色质的复制出现异常，还会出现异常畸形的细胞核[11]。研究[6]发现与匹配的癌旁组织相比，CDCA2在肺癌中呈现高表达，CDCA2的表达与Ki-67的表达呈正相关，CDCA2的表达量与肺癌患者的性别、肿瘤大小、TNM分期密切相关。在细胞水平上，通过沉默CDCA2基因发现，可通过诱导G1期阻滞肺癌细胞的增殖，而过表达CDCA2基因后则促进肺癌细胞增殖，此外，CDCA2的致癌活性在体内实验也得证实，CDCA2可以促进肺癌细胞的增值，其在肺癌的进展中发挥重要作用。M.Y.Wang等[7]研究发现，CDCA2在PDAC细胞中的表达显著高于癌旁组织，但与PDAC患者的临床特征均未发现相关。Y.Feng 等[8]研究发现CDCA2在结直肠癌(CRC)呈现高表达，高表达CDCA2与CRC患者的肿瘤大小、淋巴结转移显著相关，然而，CDCA2的表达与其他临床特征无关，通过下调CDCA2基因后发现CRC细胞生长明显受到抑制并在体内实验也得到证实，并发现其可能通过激活PI3K/AKT途径促进CRC细胞增殖和肿瘤发生，他们认为CDCA2可能作为CRC的潜在预后和治疗靶点。

本研究结果发现原发性肝细胞癌癌样本的CDCA2表达量显著高于癌旁组织(t=75.04，P<0.000)，50例配对的原发性肝细胞癌同样显著高于配对的癌旁组织(t=12.921，P<0.001)。本研还发现，CDCA2基因可作为一个灵敏度和特异度较高的原发性肝细胞癌诊断指标(敏感性为84.0，特异性为90.0，AUC=0.929)，CDCA2基因表达与原发性肝细胞癌患者的年龄、AFP值、病理分级、T分期、M分期、临床分期均有关，差异均有统计学意义(P<0.05)，但与患者性别、肝功能分级、N分期无关，差异无统计学意义(P>0.05)。

CDCA2基因不仅与癌症患者临床病理特征相关，还与癌症患者生存分析密切相关。R.Shi等[6]研究发现CDCA2高表达组的生存预后较CDCA2低表达组差，高表达CDCA2是肺癌的独立危险因素。M.Y.Wang等[7]发现CDCA2表达和淋巴结转移与PDAC预后显着相关，但PDCA患者的CDCA2表达不是独立的预后风险因素。S.Sugawara等[12]研究发现在膀胱癌患者中高表达CDCA2组总生存时间较低表达CDCA2组差。本研究发现，CDCA2表达与原发性肝细胞癌患者的OS密切相关；同时还发现CDCA2表达与原发性肝细胞癌患者的RFS密切相关，认为CDCA2高表达的患者的生存预后较低表达CDCA2患者差。

综上所述，本研究通过分析TCGA数据库分析，CDCA2在原发性肝细胞癌中高表达，且临床特征密切相关，其高表达对判断原发性肝细胞癌的生存预后及其诊断具有参考价值。