大枣花清蒸后主要活性成分含量变化的初步研究

刘世军，张 阳，唐志书，张 娱，宋忠兴，崔春利，许洪波，刘红波，张军武，王少程

(陕西中医药大学/陕西省中药资源产业化协同创新中心/秦药特色资源研究开发国家重点实验室(培育)/陕西省创新药物研究中心，陕西 咸阳 712083)

大枣花为鼠李科植物枣ZiziphusjujubaMill的干燥花朵。一般5-7月左右开花，掉落到地上的花朵被人们当做垃圾处理，非常可惜，而没有被充分利用。目前，对于大枣果实和大枣叶的研究比较多，而对于大枣花的研究很少，几乎没有。根据研究者对大枣和大枣叶的研究和我们前期对大枣花定性预试验研究发现大枣花含有酚类、黄酮、三萜、生物碱、皂苷、多糖等成分，课题组对大枣花酒蒸前后其活性成分总酚、总黄酮、总三萜、总生物碱、总皂苷、总多糖含量的变化进行研究，为大枣花进一步研究和产品的开发利用提供一定的参考。

1 材料

1.1 样品与试剂

大枣花：产地陕西；芦丁(16122801，陕西乐博生化科技有限公司)、没食子酸(B20851，上海源叶生物科技有限公司)、齐墩果酸(16051205，陕西乐博生化科技有限公司)、莲心碱(B20730，上海源叶生物科技有限公司)、甲醇(天津市天力化学科技有限公司)、甲酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)、NaOH(天津市天力化学试剂有限公司)、香草醛(天津市科密欧化学试剂有限公司)、冰醋酸(天津市天力化学科技有限公司)、乙酸乙酯(天津市天力化学科技有限公司)、高氯酸(天津市天力化学科技有限公司)、Folin酚试剂(天津市天力化学科技有限公司)、浓盐酸(西安三浦化学试剂有限公司)、无水乙醇(安徽安特食品股份有限公司)，所用化学试剂均为分析纯。

1.2 主要仪器

电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司)；高速万能粉碎机(天津鑫博得仪器有限公司)；KQ-300DE型数控超生波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；岛津UV-2600紫外可见分光光度计；电子分析天平(赛多利斯科仪器有限公司)；DZKW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；KSW型电炉温度控制器(北京科伟永兴仪器有限公司)；箱式电阻炉(北京科伟永兴仪器有限公司)；WFH-201B紫外透射反射仪(上海精科实业有限公司)；MH-500调温型电热套(北京科伟永兴仪器有限公司)；C21-HT2109多功能电磁炉；离心机等。

2 方法与结果

2.1 大枣花的蒸制处理

取新鲜干燥的枣花进行挑拣，一部分枣花直接蒸制30 min得到清蒸品，一部分枣花干燥直接用于实验。样品的水分控制在5%以内。

2.2 活性成分测定[1～2]

2.2.1 枣花甲醇提取液的制备 准确称取各样品0.5 g，转入50 mL离心管中，然后分别加5 mL 80%甲醇溶液，100 W超声提取30 min，4 000 r·min-1离心10 min后收集上清液，残渣以同样方法提取2次，合并提取液，用甲醇定容至10 mL，4℃冷藏备用。

2.2.2 总酚含量的测定[3]主要有:

(1)标准曲线的绘制。称量1 mg没食子酸标准样品，用蒸馏水定容至10 mL，得浓度为0.1 mg·mL-1标准液，分别准确量取上述标准液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加6 mL蒸馏水，摇匀后加Folin酚试剂0.5 mL，摇匀，1 min后加入1.5 mL的20% Na2CO3溶液，混匀定容，在75℃恒温水浴反应10 min，取出后冷却后于760 nm波长处测定其吸光度。

图1 总酚标准曲线

(2)样品测定。准确移取样品80% 甲醇提取液0.1 mL，分别加入稀释一倍的Folin酚试剂0.5 mL，混匀后加入1.5 mL，质量分数10%的Na2CO3溶液，然后用蒸馏水定容至10 mL，混合均匀，75℃恒温水浴反应10 min，取出冷却后于760 nm波长处测定其吸光值。

表1 样品总酚含量测定

由表1可知生品总酚含量为12.085 mg·g-1，经过清蒸后其含量增加为12.694 mg·g-1，大枣花清蒸后总酚含量增加。

2.2.3 总黄酮含量测定[4]主要有:

(1)标准曲线的绘制称量芦丁标准品2 mg，80%甲醇溶解定容至10 mL的容量瓶中，即为0.2 mg·mL-1的芦丁标准液，吸取芦丁标准液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分别置于10 mL的容量瓶中，用80%甲醇溶液补充至5 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min后加入0.3 mL 10% Al(NO3)3溶液摇匀，6 min后加入4 mL，1 mol·L-1的NaOH溶液，混匀，用80%甲醇溶液定容至10 mL，摇匀，10 min后在510 nm波长处测定吸光度。

图2 总黄酮标准曲线

(2)样品测定。用移液枪准确移取生品80%甲醇提取液1 mL，清蒸品0.7 mL于10 mL的容量瓶中，用80%甲醇溶液补充至5 mL，加入5%NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min后加入10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，6 min后加入1 mol·L-1的NaOH溶液4 mL，混匀，用80% 甲醇溶液定容至10 mL，摇匀，10 min后在510 nm波长处测定吸光度。

表2 样品总黄酮含量测定

由表2可知大枣花生品总黄酮含量为9.567 mg·g-1，经过清蒸后其含量增加为12.497 mg·g-1，大枣花清蒸后总黄酮含量增加。

2.2.4 总三萜含量的测定[5]主要有:

(1)标准曲线的绘制。称量齐墩果酸对照品1 mg，用80%甲醇溶解并定容至10 mL的容量瓶中摇匀，即得对照品溶液。准确吸取对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置于10 mL的容量瓶中，水浴挥去溶剂后，加入0.4 mL的5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸试剂1.6 mL，混匀后于90℃水浴加热反应15 min，冷却至室温，加乙酸乙酯定容至刻度线，摇匀后在560 nm波长处测定吸光度，制作标准曲线。

(2)样品测定。准确移取样品80%甲醇提取液0.1 mL于10 mL容量瓶中，水浴挥去溶剂后，加入0.4 mL的5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸试剂1.6 mL，混匀后于70℃水浴加热反应15 min，冷却至室温，加乙酸乙酯定容至刻度线，摇匀后在560 nm波长处测定吸光度。

图3 总三萜标准曲线

表3 样品总三萜含量测定

由表3可知大枣花生品总三萜含量为6.107 mg·g-1，经过清蒸后其含量增加为9.654 mg·g-1，大枣花清蒸后总三萜含量增加。

2.2.5 总生物碱含量测定[6～7]主要有:

(1)标准曲线的绘制。称取2 mg莲心碱对照品至10 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解定容，配置成0.2 mg·ml-1的溶液。分别量取0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4 mL于10 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度于282 nm波长处测定吸光度。

图4 总生物碱标准曲线

(2)样品制备。①配制1%盐酸250 mL，1% 氢氧化钠300 mL备用。②分别称取各枣花样品0.5 g置于离心管中，并贴好标签。③向每个离心管中分别加入10 mL的1%盐酸，调节pH=2，浸泡2 h，使生物碱都形成生物碱盐溶于酸水中。④碱化。每个离心管中分别加入1%氢氧化钠，调节pH为9～10，使生物碱游离出来。⑤有机溶剂萃取。分别加入无水乙醇15 mL，封住盖，超声处理40 min，取出离心管，准备下一步处理。⑥过滤样品溶液。⑦然后将经过过滤后的滤液用无水乙醇溶液定容到50 mL的容量瓶中并贴上标签备用。⑧用移液枪移取生品和清蒸品试液1 mL于10 mL容量瓶中，用无水乙醇溶液稀释至刻度。

(3)样品测定。将上述溶液于282 nm波长处测定吸光度。

表4 样品总生物碱含量测定

由表4可知大枣花生品总生物碱含量为59.137 mg·g-1，经过清蒸后其含量增加为67.343 mg·g1-，大枣花清蒸后总生物碱含量增加。

3 结论和讨论

大枣花作为大枣植物的一部分，在花季常常散落在地，被人们当做垃圾处理而不被重视。课题组对大枣花清蒸前后化学成分进行了初探。根据试验结果，大枣花经过清蒸后其主要活性成分总酚、总黄酮、总三萜、总生物碱含量均增加。这其中的炮制原理是什么,这些主要成分的药理作用是什么,有待进一步的深入研究。笔者研究的实施可以变废为宝，为大枣花的深入研究奠定一定的基础，同时为大枣花产品的开发和利用提供一定的参考。