淫羊藿提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨代谢的影响

柴安芳　毕盼盼　安宇佳

摘要：目的 探讨淫羊藿提取物对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响。方法 建立去势模型，将雌性大鼠随机分为5组， 其中假手术组和去卵巢对照组给予相应等体积去离子水，剂量组分别给予不同剂量淫羊藿提取物（20.8mg/kg.bw、41.6mg/kg.bw、125mg/kg.bw）;灌胃3个月后处死，测量股骨重量、骨密度、骨钙含量。结果 经口给予大鼠不同剂量的淫羊藿提取物样品三个月后，模型成立前提下，与去卵巢对照组大鼠相比，去卵巢高剂量组大鼠股骨钙含量显著增加（P<0.01）;中、高剂量组大鼠股骨中点骨密度和股骨远心端骨密度均显著增加（P<0.05，P<0.01）。结论 单味淫羊藿提取物有增加大鼠骨密度作用，提示淫羊藿提取物可以预防绝经后骨质疏松症。

关键词：动物实验;淫羊藿;骨密度;骨质疏松

骨质疏松症（ Osteoporosis， OP） 是老年人的一种常见病， 已严重危害着老年人的身体健康。以骨量减少、骨微结构破坏， 导致骨脆性增加、容易发生骨折为特征。中草药治疗绝经后骨质疏松症已成为国内医学界的研究热点。 淫羊藿为小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥叶。《中华人民共和国药典》记载辛、甘，温。归肝、肾经。具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，主要有效成分之一是淫羊藿苷[1] 。

本试验建立去势雌性大鼠动物模型， 探究淫羊藿提取物预防骨质疏松作用，结果报道如下。

1材料和方法

1.1 样品：淫羊藿提取物，棕色粉末。含淫羊藿苷5%。

1.2 实验动物：SPF级健康Wistar雌性大鼠。体重300g左右。实验环境温度22℃±2℃，相对湿度50%±10%。

1.3饲料配方：按《保健食品检验与评价技术规范》2003年版推荐配方进行饲料配制。

1.4 主要仪器与试剂：动物解剖器械、动物天平、双能X线骨密度测量仪、烘箱。碳酸钙标准溶液、氢氧化钾、EDTA溶液等。

1.5实验方法

1.5.1 卵巢切除术及术后饲养：

大鼠经30mg/kg.bw剂量腹腔注射戊巴比妥钠溶液，待麻醉完全后切除双侧卵巢，术后连续3d肌注2万U青霉素。假手术对照组大鼠操作同上，但不结扎输卵管、不剪除卵巢。手术后观察7天，之后以灌胃方式分别给予各组大鼠相应受试物和溶剂。给各组大鼠饲喂配制饲料，自由饮去离子水。

1.5.2剂量设置与受试物给予方式   雌性大鼠经适应性饲养7天后，按体重将其随机分为假手术对照组、去卵巢对照组、去卵巢低剂量组、去卵巢中剂量组、去卵巢高剂量组。淫羊藿提取物各剂量组大鼠每日食用量分别为20.8mg/kg.bw、41.6mg/kg.bw、125mg/kg.bw。经灌胃每日一次给予大鼠相应受试物，灌胃体积均按1mL/100g.bw计。去卵巢对照组和假手术对照组给予等体积去离子水灌胃。连续给予受试物3个月后测定各项指标。

1.5.3体重测定：每周测定大鼠体重一次，并据此调整灌胃量。

1.5.4骨钙含量测定：大鼠喂养3个月后处死，剥离出左、右侧股骨。取右侧股骨于105℃烤箱中烤至恒重，称量骨干重。然后进行粉碎、研磨、消化。用化学法（EDTA滴定法）测定骨钙含量。

1.5.5骨密度测定：用骨密度测量仪测量大鼠左侧股骨中点及股骨远心端的骨密度。

1.6实验数据统计：采用SPSS统计软件进行各实验组与对照组的单因素方差分析和组间比较。

2 结果

2.1 样品对大鼠体重的影响

由表1可见，各组大鼠初始体重差异无统计学意义（P>0.05）。实验结束时，假手术对照组大鼠体重略低，但与去卵巢对照组大鼠相比，差异无统计学意义（P>0.05）;其余各组间大鼠体重差异均无统计学意义（P>0.05）。

2.2樣品对大鼠股骨重量和股骨钙含量的影响

由表2可见，与去卵巢对照组比，各组大鼠股骨重量差异均无统计学意义（P>0.05）。去卵巢对照组骨钙含量显著低于假手术对照组，表明模型成立。去卵巢高剂量组大鼠股骨钙含量显著高于去卵巢对照组（P<0.01）。

2.3 样品对大鼠股骨骨密度的影响

由表3可见，去卵巢对照组大鼠股骨中点和远心端骨密度均明显低于假手术对照组（P<0.01）。表明模型成立。与去卵巢对照组大鼠相比，去卵巢中、高剂量组大鼠股骨中点骨密度显著增高（P<0.05，P<0.01）;去卵巢中、高剂量组大鼠股骨远心端骨密度显著增高（P<0.05，P<0.01）。

3讨论

近年来， 许多学者对肾虚与骨密度或骨矿含量的关系进行了研究， 阐明肾虚与骨密度或骨矿含量的降低显著相关 [2]。这些研究结果与中医“肾主骨”理论是相吻合的， 证实了肾虚是骨质疏松症的主要病机， 因此近年来中医药防治骨质疏松症多从补肾入手。而淫羊藿甘温助阳， 有补肾壮阳之功效， 《本草纲目》称其有 “益精气、强筋骨、补腰膝”作用， 许多用于防治骨质疏松症的中药复方中都含有淫羊藿。淫羊藿主要有效成分为黄酮类化合物，代表为淫羊藿苷，大量的试验已证实淫羊藿的抗骨质疏松作用与其所含的黄酮类物质有关。其作用机制主要体现在：可通过保护性腺，从而抑制骨吸收和促进骨形成，防止骨量丢失[3];可通过阻断与花生四烯酸代谢有关的环氧化酶，显示抗炎作用[4];含有较丰富的铜、锰、锌，等。为探讨采用单味补肾中药淫羊藿的提取物治疗骨质疏松症的作用，本试验通过建立去势模型，经口给予大鼠不同剂量的淫羊藿提取物三个月后，观察大鼠骨代谢指标。结果 淫羊藿提取物可提高去势大鼠骨钙含量及骨密度，提示单味淫羊藿提取物对预防骨质疏松有一定作用。

参考文献

1 叶丽卡， 李国秀， 陈妍妍， 等.HPLC 法测定生物样品中淫羊藿苷的浓度.药物分析杂志， 1998 ， 18（1）：15

2 赵玉堂， 刘凯军， 李金花 等.骨矿含量与肾虚、肾主骨关系的研究. 中国骨质疏松杂志.1996; 2 （ 3） ： 19～21.

3马慧萍，贾正平，葛欣，等.淫羊藿总黄酮抗大鼠试验性骨质疏松作用研究[ J].华西药学杂志，2002，17（3）163～ 167.

4原达雄.淫羊藿浸膏抗炎作用的药理研究[J].国外医药·植物药分册，1997，12（6）：272.