一例副猪嗜血杆菌病的诊断与分析

尧国民，舒 鸣，王 湘，李中波，侯强红

怀化职业技术学院，湖南怀化 418000

近年来，怀化市生猪养殖发展迅速，规模化养殖模式占比逐渐提高，同时养猪业给当地政府和养殖户带来巨大经济收入。在生猪养殖过程中，特别是饲养管理水平较低的情况下，猪群易感染诸多病原，从而引发疾病，甚至导致死亡。其中副猪嗜血杆菌病在猪场中较为常见，不同阶段猪群对该病均易感，但由于保育猪或仔猪免疫性能低下，更易受到该病的感染，同时引发严重的临床表现，如脑膜炎、关节炎和全身性浆膜炎等，且发病率和死亡率均较高，给猪场造成巨大经济损失[1，2]。

龙剑[3]等对湖南部分地区规模化猪场发病仔猪进行细菌感染情况调查，结果发现副猪嗜血杆菌（HPS）检出率高达30%（24/80），且分离的菌株对部分常用抗生素耐药；河南及周边地区发病猪群HPS 分离率为21.7%（531/2445），且血清型众多，但主要以4 型为主，提示HPS 在我国猪场流行情况严重，给养殖业造成经济损失巨大。本文以一例保育猪副猪嗜血杆菌病为例，对其临床和实验室诊断过程进行阐述，同时根据药敏试验结果对猪群用药，最终使疫情得到有效控制。

1 猪场发病情况

怀化市某规模化猪场饲养保育猪约900 余头，该猪场为自繁自养模式。2019 年11 月初，由于天气突然降温，其中一栋栏舍部分保育猪发病，病猪主要临床症状包括体温升高（约40 ℃）、精神沉郁、采食量下降、少部分发病严重的病猪咳嗽、呼吸困难、且四肢关节肿胀，卧躺在地，不愿合群。

2 病理变化与样品采集

对死亡不久的病猪进行解剖，其腹股沟淋巴结和颌下淋巴结肿大，且切面多汁；胸腔内蓄积大量浑浊液体，且肺部实变，肺部表面组织与腹腔黏连，大量纤维状物质渗出；剖开肿胀关节，有大量清亮积液流出。

无菌采集病变明显组织器官，如淋巴结和肺脏等，并分别收集腹腔和关节处积液，分别标记后，进行实验室诊断。

3 实验室诊断

3.1 细菌性病原检测

3.1.1 细菌分离培养与鉴定

取适量病变组织和积液入灭菌研钵，用灭菌眼科剪将组织充分剪碎，其后以1:10 比例加入无菌生理盐水，充分混匀后用无菌纱布过滤；用灭菌接种环蘸取少量过滤液分别在普通琼脂培养基和10%乳牛血清的TSA 培养基表面平板划线，放置于37 ℃恒温箱内培养，分别于24 h 和48 h 观察平板培养基表面菌落生长情况。结果：普通琼脂培养基表明无任何菌落生长，而TSA 培养基表面出现露珠状、透明而光滑的菌落。将单一菌落均匀涂抹在玻璃片上，以革兰氏染色法对样品进行处理，其后油镜下观察菌落形态：菌株为革兰氏阴性菌，形态为单个或成对丝状杆菌。

3.1.2 小鼠致病性试验与药敏试验

用灭菌牙签随机挑取3 个菌落接种于TSB 培养基，37 ℃培养24 h，其后将菌液（100 µL）腹腔注射至5 只健康小鼠体内（试验组I、II 和III），并设置对照组（注射等体积生理盐水），观察不同组小鼠存活情况。结果发现3 组试验组小鼠死亡率高达100.0%、100.0%和80.0%，而对照组小鼠一直存活，且将试验组小鼠病变组织处理后染色镜检，菌株形态和大小与之前检测结果一致，说明小鼠是因感染副猪嗜血杆菌而死亡，同时本次试验分离的副猪嗜血杆菌分离株均为强毒株。

将其中一株副猪嗜血杆菌强毒株进行扩增培养，同时用L 型玻棒将适当浓度菌液均匀涂抹在固体培养基表面，于37 ℃干燥2 ～3 min，其后将14 种不同药敏纸片贴在培养基表面（4 种纸片/培养基），并固定。将培养基放在37 ℃恒温箱内培养，24 h 后判定菌株对不同抗生素的敏感性。药敏试验结果显示：菌株对头孢噻呋、氟苯尼考、氧氟沙星、阿莫西林和卡那霉素高度敏感，对阿米卡星、头孢氨苄、新霉素、链霉素和四环素中敏，对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素和青霉素高度耐药。

3.2 病毒性病原检测

取发病明显组织，适当处理用商用试剂盒提取组织DNA 和RNA 核酸，并用核转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，以DNA 或cDNA 样品为模板，使用PCR 或RT-PCR 法检测样品中是否存在猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒和猪瘟病毒病原。结果发现，被检样品中均未检测出以上病原，提示发病猪群未感染以上4 种病毒。

4 防控措施

4.1 紧急治疗措施

将病猪与假定健康猪隔离饲养，对发病猪群肌肉注射氟苯尼考，其用药量为15 mg/kg，每日1 次，连续用药4 d；在饲料中添加阿莫西林，对全猪进行饲喂，每吨饲料中添加阿莫西林1 kg，连续用药7 d。

4.2 其它处理措施

饲料中添加适量黄芪多糖和多维等，旨在提高猪群抗病能力；将病死猪群进行深埋，并无害化处理；全场进行卫生打扫，并用2%浓度氢氧化钠溶液对全场进行喷洒消毒，2 ～3 h 后用大量清水对消毒剂进行稀释，每日1 次，连续消毒4 d；在猪场走廊撒生石灰，进行消毒。

连续实施以上治疗与防控措施1 周后，疫情得到明显控制。

5 讨论

副猪嗜血杆菌严重危害我国养猪业发展，是导致保育猪死亡的主要细菌性疾病之一，由于其临床及病理变化明显，根据其临床症状可对本病做出初步判断，但进一步确诊还需要实验室诊断技术。由于该菌株含有多种血清型，不同血清型菌株对抗生素耐药情况不同，所以需要根据药敏试验结果选择对菌株敏感的药物对疫病进行治疗。

本次案例中将副猪嗜血杆菌菌株进行分离与鉴定，并随机筛取3 株菌株进行小白鼠接种，确定分离菌株的高致病性，其后对高致病的菌株进行药敏试验，根据药敏试验结果选择菌株高度敏感的氟苯尼考和阿莫西林作为抗病药物，同时提高猪群饲养管理水平，最终使疫情得到有效控制。