非小细胞肺癌VEGFR-2与XAGE-1b基因表达关系研究

刘 辉，刘志兰

（1.漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462000；2.青海省妇女儿童医院，青海 西宁 810007）

近几年，在结直肠癌以及肺癌等肿瘤疾病中抗血管生成疗法取得显著的疗效。形成新生血管时VEGFR-2发挥着重要的作用，同时亦是许多抗血管生成药物[1]。用CTA承载树突状细胞以此来组成肿瘤疫苗为一种比较常见的抗肿瘤免疫治疗措施，此次研究采用的便是CTA中的一员—XAGE-1b蛋白，其负载树突状细胞在体外组建肺癌疫苗[2]。为了评价非小细胞肺癌VEGFR-2与XAGE-1b基因表达关系，我院对其开展了深入的探究，现详细报道如下：

1 材料与方法

1.1 标本

使用已经检测XAGE-1b基因表达水平的20例非小细胞癌患者的mRNA/cDNA标本，进行mRNA的提取、鉴定质量以及将mRNA通过逆转录使其生成cDNA。

1.2 探针与引物

以GenBank (Accession No.:NM_ 002253.1)之中VEGFR-2的序列为参考设计探针与引物，其内参为β-actin。

为了构建实时的PCR标准曲线，利用特异性引物通过逆转录PCR将β-actin与VEGFR-2扩增，鉴定测序，利用A260将标准品DNA进行定量，使用超纯水来使其连续稀释以致范围在每微升107～101拷贝，取出1 uL将其当作样本检测的一个定量标准。

1.3 实时PCR定量

20 uL的反应体系之中检测β-actin与VEGFR-2的含量，首先进行PCR反应。实施PCR反应的条件主要包括：2分钟50℃，10分钟95℃，随后进行15秒95℃以及1分钟60℃ ，进行40个循环。所有的样本均需进行重复两次测定，定量检测的结果为其均值。

若患者XAGE-1b为阳性其VEGFR-2的表达量也偏高。在α为0.05时，把VEGFR-2的表达量与患者的临床特征一起代入多元logistic的回归分析之中，结果表明，VEGFR-2的表达量 (其比值比为14.812 , 95%可信区间为1.281～172.150,P为0.032)与病理类型(其比值比为0.071, 95%可信区间0.006～0.779,P为0.032)为影响XAGE-1b表达的因素。

2 讨 论

为了研究在非小细胞癌治疗之中免疫治疗联合抗血管生成疗法的可行性，本次研究中检测同时分析了在免疫治疗中其靶点XAGE-1b和抗血管生成治疗中其靶点VEGFR-2表达的关联性，结果表面，XAGE-1b和VEGFR-2的表达量呈现正相关，即XAGE-1b表达阳性的患者其VEGFR-2的表达量偏高，同时多元logistic回归分析表明，VEGFR-2的表达量影响XAGE-1b的表达。研究结果表明，抗血管生成疗法和免疫疗法相结合的治疗措施适宜的患者可能为VEGFR-2的表达量高且体内含有XAGE-1b基因。

1 80 男 非吸烟腺癌 中 ⅢA ＋ 4.72 2 65 男 吸烟 腺癌 中 ⅠB ＋ 4.83 3 58 男 吸烟 腺癌 中 ⅢA ＋ 5.01 4 62 男 吸烟 腺癌 中 ⅣA ＋ 4.68 5 59 男 吸烟 腺癌 中 ⅡA ＋ 5.23 6 61 男 吸烟 腺癌 中 ⅢB ＋ 4.71 7 63 男 吸烟 腺癌 中 ⅡB ＋ 5.17 8 75 男 非吸烟 腺癌 高 ⅡA ＋ 4.97 9 71 男 非吸烟腺癌 高 ⅢA ＋ 4.39 10 78 女 非吸烟 腺癌 高 ⅣB ＋ 4.26 11 53 女 非吸烟 鳞癌 低 ⅢB ＋ 4.59 12 65 女 非吸烟 鳞癌 低 ⅢB — 3.65 13 59 女 吸烟 鳞癌 中 ⅠB — 3.86 14 47 女 吸烟 鳞癌 中 ⅢA — 4.11 15 35 男 吸烟 鳞癌 中 ⅢB — 3.92 16 73 男 吸烟 鳞癌 中 ⅡA — 3.68 17 69 男 吸烟 腺鳞癌 高 ⅡB — 3.21 18 64 男 非吸烟 鳞癌 中 ⅢB — 3.46 19 59 女 非吸烟 鳞癌 高 ⅠB — 3.12 20 72 男 非吸烟 鳞癌 低 ⅢA — 3.51