食品中两类致病微生物检测结果不确定度评定

肖 炜 伊犁州检验检测认证研究院 新疆伊犁 835000

用外行话说，不确定度额定值是指不可靠的程度，主要用来表示实验测量结果的可行性程度。它可以用来测试参与实验的人员、适用的测量仪器和设备、以及具体的实验环境条件等因素对测量能力的水平进行量化。

1 实验材料与实验方法

1.1 材料

实验食品从2018年至2019年随机抽检的236批蛋糕和肉制品中抽取。实验中涉及的食物主要有火腿、烤鸡、蛋糕等不同种类。[1]BP计数琼脂:用北京路桥有限公司提供的培养基按照说明书配制培养液，将配制好的培养液倒在平板上。脑心提取肉汤(BHI)、兔血浆、小斜营养琼脂均由北京路桥有限公司提供，直接用于实验。生理盐水缓冲液由伊犁州产品质量检验所食品室配制而成。

1.2 检测方法

1.2.1 分析培养基增菌技术

目前，在我国食品微生物检测过程中，主要采用选择性培养基和显色培养基两种技术来实现培养基的生长[2]。值得注意的是，虽然选择性培养基常用于区分不同类型的细菌，但检测结果不能用于准确识别细菌类型，只有通过分型鉴定等方式才能确定是否有相应菌株的存在。

1.2.2 沙门氏菌检验

在食品病原微生物实验室检测过程中，微生物检测能力的高低直接影响检测结果的可靠性和准确性，是检测质量控制的关键[3-4]。长期以来，中国食品药品检验所等机构一直以实验室比对计划的形式开展沙门氏菌检测能力验证活动。在具体的验证过程中，盲样检测过程主要采用《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB4789.4-2016）。

1.2.3 金黄色葡萄球菌检验

在食品微生物检测过程中，日常采用《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016)作为检测方法，包括预富集培养、分离培养、菌落形态观察、血浆凝固酶实验等多个实验步骤。然而，在传统的检测过程中，检测的具体操作步骤烦琐且需要大量的时间[5]。检测灵敏度不够，容易出现漏检问题。随着微生物研究技术的不断完善，应用于食品中病原微生物检测的相关技术也在不断完善，金黄色葡萄球菌的检测技术得到了很大的发展，从传统的培养方法中衍生出了大量更有效的检测方法[6]。金黄色葡萄球菌的检测也应用了生物化学、分子生物学和免疫学等不同领域的方法和技术[7-8]。

2 实验结果

2.1 样品致病菌检测结果

表1 肉制品和蛋糕的致病菌检测结果

2.2 选定两份样品Y1和Y2检测的结果

从样本Y1和Y2的检测结果可以看出，两个样本中均有定量检测金黄色葡萄球菌[10-11]。用公式计算样品Y1中同批次的5个独立包装得到：低于10CFU/g、20CFU/g、低于10CFU/g、15CFU/g和30CFU/g，而样品Y2的5个独立包装检测结果为：15CFU/g、20CFU/g、低于10CFU/g、30CFU/g、低于10CFU/g[12]。结合相关国家标准，可以得出Y1和Y2不存在过量的金黄色葡萄球菌的结论[13]。

3 实验结论

事实上，影响平板上金黄色葡萄球菌计数结果的因素很多。在本实验中，主要因素是样品的稀释程度、菌落数量、样品体积的大小、个体计数的重复性以及实验人员确认研究了计数过程中的不确定度。在整个研究过程中，也存在着不同的影响因素，如标准菌种、培养箱参数、菌落重叠、培养基质量、采样均匀性、菌落计数误差等。实验结果的分析和计算可以证明，在检测过程中,样品中金黄色葡萄球菌的平皿计数,计数的不确定性,重复计数,不确定性的血浆凝固酶阳性细菌的数量确认测试是最有影响力的生成因素。