2种彝药对CCl4诱导小鼠肝脏损伤的影响

董艳珍　郝应芬　王思芦　肖文渊　吉木阿洛

摘要：为探讨天胡荽（MT）和虎杖（JC）对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的影响，分别以2种彝药的不同浓度对模型小鼠连续7 d灌胃给药，7 d后通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测小鼠血清中总胆红素（TBIL）、丙二醛（MDA）含量和肝匀浆中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷草氨酸转氨酶（AST）活性。结果表明，MT和JC均能不同程度地下调各项指标，JC效果总体优于MT。与模型组比，JC各浓度均可显著下调TBIL和MDA含量，且均以低浓度效果最好，使TBIL下降了30.73%（P<0.05），MDA下降了22.42%（P<0.05），JC低浓度组对TBIL的下调作用优于联苯双酯（P<0.05）;联苯双酯与不同浓度的2种彝药均能显著降低ALT和AST水平，其中JC高浓度组的效果最好，使ALT比模型组和阳性组分别降低了32.37%（P<0.05）和14.55%（P<0.05），使AST比模型组和阳性组分别降低了26.95%（P<0.05）和8.31%（P>0.05）。JC具有显著的保肝效果，可为临床应用提供依据。

关键词：彝药;天胡荽;虎杖;四氯化碳;肝功能

中图分类号： R285.5 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2020）07-0214-03

肝脏作为动物机体最大的代谢器官，其功能的完善是保障动物机体健康的重要前提。肝细胞常因病原微生物的侵入或有毒有害物质的摄入及代谢而造成损伤，引起肝炎、肝硬化、肝癌等疾病。现代研究表明，许多天然草药对肝功能具有调节作用，彝医临床对肝病的诊治具有一定的特色，如天胡荽（Hydrocotyle sibthorpioides，彝药名为满天星，简称MT）、虎杖（Polygonum cuspidatum，彝药名为几初，简称JC）均为四川凉山州特产，当地彝医常用其治疗肝病和黄疸。本研究探讨了2种彝药的水煎剂对CCl4诱导的急性肝炎中相关生化指标的影响，以评价其作用机制。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

天胡荽（MT）、虎杖（JC）（西昌彝医药研究所）;联苯双酯滴丸（万邦健制药集团股份有限公司）;丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷草氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、Elisa试剂盒均购自武汉纯度生物科技公司。

1.2 试验动物

90只体质量为（20±2） g的清洁级健康昆明（KM）小鼠，由西昌学院动物科学学院动物医学实验室提供，常规饲养。

1.3 方法

1.3.1 藥物制备

彝药水煎剂制备：将2种彝药充分干燥至恒重后，分别取100 g粉碎后过80目筛，以适量去离子水分别煎煮15 min，过滤收集滤液，滤渣重复煎煮1次，合并滤液浓缩至100 mL，加入乙醇至其终浓度为75%，冷藏过夜后2 000 r/min离心10 min，取上清液回收掉乙醇后，用去离子水配制成浓度为1 g/mL，4 ℃冷藏备用。

联苯双酯悬液制备：将联苯双酯滴丸以适量去离子水研磨，配制成浓度为0.01 mg/mL的悬液。

1.3.2 动物分组与处理

将90只健康KM小鼠，随机分为15个组，每组10只，雌雄各半。空白组和模型组每天以0.2 mL去离子水灌胃;2种彝药各设高、中、低3个剂量组（1.00、0.50、0.25 g/mL），每天灌胃0.2 mL;阳性组以联苯双酯悬液0.2 mL灌胃;各组均连续灌胃7 d。除了空白组外，其余各组于分别于第3、5、7天对小鼠腹腔注射0.1% CCl4橄榄油0.2 mL/只。

各组均于最后一次给药12 h后，摘眼球采血，分离血清待测;同时颈椎脱臼处死小鼠，精确称取0.1 g肝组织，加入1 mL 4 ℃生理盐水，用球磨仪匀浆器300次/min的振动频率研磨90 s，于4 ℃3 000 r/min 离心10 min，取上清液待测。

1.3.3 肝功能指标测定

按照Elisa试剂盒使用说明，以酶标仪测定各指标的标准曲线，计算各组小鼠血清或肝脏匀浆中的TBIL、MDA含量和AST、ALT、SOD活性。

1.3.4 数据处理

各组数据均以平均值±标准差表示，并对数据进行组间方差分析，以P<0.05表示组间差异显著。

2 结果与分析

2.1 2种彝药对小鼠血清TBIL、MDA水平的影响

结果表明，与空白组比，模型组的TBIL含量升高了11.68%（P>0.05），差异不显著;MDA含量升高了11.91%（P<0.05），差异显著，表明CCl4可能诱导小鼠肝脏处理TBIL的能力有下降的趋势，而肝脏的抗氧化能力则显著降低。与模型组比，阳性组的联苯双酯可显著提高肝细胞抗氧化功能，降低TBIL（P>0.05）和MDA（P<0.05）含量，而MT组高、中浓度均能显著降低血清TBIL含量，其中高浓度效果最好，使血清TBIL含量降低了22.13%（P<0.05），同时比阳性组效果好，且差异显著（P<0.05）;不同浓度的MT组均可显著降低血清MDA含量，其中高浓度效果最好，使MDA含量比模型组降低了19.43%;表明MT对CCl4诱导肝损伤小鼠的血清TBIL、MDA含量具有下调作用，且呈剂量依赖性。

与模型组比，各浓度JC组均可显著下调TBIL（P<0.05）和MDA（P<0.05）含量，且均以低浓度效果最好，使TBIL含量下降了30.73%，MDA含量下降了22.42%，JC低浓度组对TBIL的下调作用优于联苯双酯。表明JC可能通过促进肝脏代谢及抗氧化功能，从而抑制CCl4损伤肝细胞（表1）。

2.2 2种彝药对小鼠肝脏匀浆ALT、AST、SOD活性的影响

试验结果表明，与空白组比，CCl4未引起小鼠肝脏的SOD表达发生变化，但使模型组ALT和AST在肝匀浆中的活性均显著升高（P<0.05），表明肝细胞出现显著的损伤。与模型组比，阳性药物联苯双酯与2种彝药不同剂量均能显著降低ALT和AST活性，其中JC高浓度组的效果最好，使ALT比模型组和阳性组分别降低了32.37%（P<0.05）和14.55%（P<0.05），使AST比模型组和阳性组分别降低了26.95%（P<0.05）和8.31%（P>0.05），说明MT和JC均可能通过抵抗或抑制CCl4代谢的某环节发挥不同程度的保肝效果，且JC组的效果整体优于MT组，但二者与联苯双酯均对肝脏SOD的活性无显著影响（表2）。

3 讨论

研究表明，CCl4在肝脏内被细胞色素P450激活产生具有毒性的三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基，对肝细胞膜和细胞器膜均有破坏作用，从而导致肝细胞坏死。阳性药物联苯双酯可以通过对抗自由基，发挥保肝降酶、减轻肝脏损伤的作用。

天胡荽的现代药理研究表明，其主要的活性成分为黄酮类槲皮素，具有抗炎活性[1]。天胡荽具有抗乙型肝炎病毒表面抗原的活性[2]，以及抗肝纤维化作用[3]，在临床用于治疗病毒性肝炎及黄疸。虎杖的药理研究表明，其大黄素等蒽醌类化合物具有病毒、抗菌活性[4]。虎杖苷的分子结构中含有许多共轭双键，清除自由基是虎杖苷抗氧化的途径之一，因此具有显著的抗氧化性[5];同时虎杖苷通过阻断NF-κB途径，下调肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素6（IL-6）和白介素1b（IL-1b）的表达发挥抗炎活性[6-7]。目前这2种草药对肝脏功能的影响研究报道较少，洪照友等研究表明，虎杖水煎剂可能通过降低肝缺血性损伤组织中氧自由基的含量，减少其对肝组织的损伤[8]。

本试验中，由CCl4代谢产生的自由基引起细胞膜脂质发生过氧化反应产生MDA，而血清MDA含量在一定程度可以反映细胞的损伤程度，试验结果表明，2种彝药对血清MDA含量具有下調作用，但对肝脏组织SOD的活性没有显著影响，说明2种彝药的保肝作用可能与SOD活性无关，而是通过抑制代谢CCl4的氧化酶活性或者含有能与自由基反应的抗氧化活性基团实现的。同时，本试验结果表明，MT和JC的水煎剂均可不同程度地降低小鼠肝脏中的ALT和AST的活性，说明二者可能通过对抗自由基维护肝细胞膜稳定性，减少肝细胞损伤，同时还能促进肝细胞对间接胆红素的转化，有利于直接胆红素的排泄，从而降低血清TBIL含量，发挥临床治疗肝炎性黄疸的作用。

参考文献：

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[2]郑民实，李 文，李 蓉，等. 使用ELISA技术筛选270种中草药抗HBsAg作用[J]. 中医研究，1996，9（1）：51-54.

[3]彭震宇，王一奇，戚虎昶，等. 天胡荽有效成分HAS抗大鼠免疫性肝纤维化的实验研究[J]. 中华中医药学，2009，27（8）：1654-1656.

[4]时圣明，潘明佳，王文倩，等. 虎杖的化学成分及药理作用研究进展[J]. 2016，39（2）：317-321.

[5]苏 丹，张邦乐，宦梦蕾，等. 白藜芦醇与白藜芦醇苷抗氧化活性比较[J]. 中国药师，2010，13（4）：471-473.

[6]Xie X，Peng J，Huang K，et al.Polydatin ameliorates experimental diabetes-induced fibronectin through inhibiting the activation ofNF-κB signaling pathway in rat glomerular mesangial cells[J]. Mole Cell Endocrinol，2012，362（1/2）：183-193.

[7]Yao J，Wang J Y，Liu L，et al.Polydatin ameliorates DSS-induced colitis in mice through inhibition of nuclear factor-κB activation[J]. Planta Med，2011，77（5）：421-427.

[8]洪照友，高 毅，詹兴海. 中药虎杖对大鼠肝脏缺血性损伤保护的形态学观察[J]. 世界华人消化杂志，2000（2）：162-164.