过硫酸氢钾复合物粉在鸡舍的临床应用研究

李朋朋 张晓东 周德刚

摘要 为了评价过硫酸氢钾复合物粉在鸡舍内的应用效果，开展了过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍自然菌的消毒效果评价试验、对鸡舍饮水管线的清洗试验及空气消毒试验。结果表明，过硫酸氢钾复合物粉按1∶400倍稀释时，可以有效杀灭鸡舍自然菌;过硫酸氢钾复合物粉按1∶200倍稀释时，对饮水管线具有较好的清洗作用。当过硫酸氢钾复合物粉按1∶100倍稀释、消毒作用1 h，对鸡舍空气中自然菌的杀菌率达100%。

关键词 过硫酸氢钾复合物粉;细菌定量试验;空气消毒;饮水管线清洗

中图分类号 S821.4+6  文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2020）10-0084-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.10.023

Abstract In order to evaluate the application effect of potassium persulfate composite powder in chicken house，the disinfection effect evaluation test of potassium persulfate composite powder on natural bacteria in the chicken house，the cleaning test of water pipeline in the chicken house and the air disinfection test were carried out.The results showed that when the potassium persulfate complex powder was diluted by 1∶400 times，it could effectively kill the natural bacteria in the chicken house.When the potassium persulfate complex powder was diluted by 1∶200 times，it had a better cleaning effect on the drinking water pipeline.When the potassium persulfate complex powder was diluted by 1∶100 times and disinfected for 1 hour，the sterilization rate of natural bacteria in the air of chicken house reached 100%.

Key words Potassium persulfate complex powder;Bacterial quantitative test;Air disinfection;Water pipeline cleaning

  

近年來不断发生的动物重大传染性疾病使我国畜牧业遭受了巨大的经济损失，而动物饲养环境的污染会导致疫病在动物间迅速传播，甚至直接威胁人类健康[1-3]，因此人们逐渐意识到生物安全防控的意义，在此形势下各养殖户对消毒剂的使用也越来越重视。目前市面上消毒剂种类繁多，而过硫酸氢钾复合物粉作为一种高效、安全的消毒剂，能够有效杀灭各类病毒、细菌、芽孢、支原体、真菌、霉菌等病原微生物，在世界范围内被广泛用于水产养殖消毒、畜禽养殖场消毒，美国农业部（USDA）已将其作为机场出入境消毒的常用消毒剂之一，来控制外来病原的入侵[4]。过硫酸氢钾复合物粉在水中经过链式反应连续产生次氯酸、新生态氧，氧化和氯化病原体，干扰病原体的DNA和RNA合成，使病原体的蛋白质凝固变性，进而干扰病原体酶系统的活性，影响其代谢，增加细胞膜的通透性，造成酶和营养物质流失、病原体溶解破裂，进而杀灭病原体[5]。但目前大多数养殖场的消毒工作做得不够规范，尽管选用了较好的消毒剂，却未能使消毒剂发挥应有的作用。笔者评价了过硫酸氢钾复合物粉对养殖场临床菌株的杀菌效果，并在鸡舍进行了过硫酸氢钾复合物粉的现场消毒试验，以期为过硫酸氢钾复合物粉的临床使用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试剂。

营养肉汤培养基（NB）、营养琼脂培养基（NA）、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），均购自青岛高科园海博生物技术有限公司;Na2S2O3·5H2O，分析纯，购自成都市科龙化工试剂厂;无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.1.2 试验药物。

过硫酸氢钾复合物粉，批号为20190817，有效氯（即活性氧）不低于10%，由普莱柯生物工程股份有限公司提供。

1.1.3 主要仪器与设备。

ABS-265双量程电子天平，METTLER TOLEDO;NU-425-400S生物安全柜，为美国Nuaire公司产品;电热恒温培养箱，为上海新苗医疗器械制造有限公司产品;全自动立式电热压力蒸汽灭菌器，为上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品;核酸蛋白测定仪，为德国Eppendorf公司产品;微量移液器，购自德国Eppendorf公司;涡旋混合器，为德国IKA公司产品;SevenEasy pH计，为梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司产品;喷雾消毒机为养殖场自有设备。

1.1.4 试验场地。

过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍饮水管线的清洗试验在洛阳成大禽业有限公司的雏鸡舍进行，为雏鸡出栏后的空舍。过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍空气的消毒试验在洛阳市孟津县赵哲青年鸡场鸡舍进行，该养殖场有3栋鸡舍，其中一个养有青年鸡，另外2个为空舍，选择带鸡鸡舍作为试验场地，鸡舍面积约5 000 m3。

1.2 试验方法

1.2.1 过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍自然菌的消毒效果评价试验。

从养殖场鸡舍内采集清洗圈舍的废水，在实验室接种到营养肉汤中进行增菌培养，得到的菌液于试验前调整OD600值至0.15，然后依据《兽用消毒剂鉴定技术规范》[6]规定，按照以下方法评价过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍内自然菌的消毒效果。

用无菌纯化水溶解并稀释过硫酸氢钾复合物粉至一定浓度，吸取0.5 mL制备好的试验菌液置于4.5 mL稀释好的消毒剂中，作用5 min后取消毒剂与菌液的混合液0.5 mL加入4.5 mL中和剂（0.5%硫代硫酸钠溶液）中，涡旋混匀后开始计时，作用10  min，计时结束后进行活菌计数。以纯化水代替消毒剂重复上述过程作为阳性对照组，以PBS代替消毒剂、菌液重复上述过程作为阴性对照组。当消毒剂最高稀释倍数的杀菌率在99.9%以上时，可判定该稀释倍数为消毒剂的最低有效杀菌浓度。按照下述公式计算杀菌率（Pt）：杀菌率（Pt）=[（N0-Nt）/N0]×100%。其中，N0为阳性对照组的活菌数，Nt为试验组的活菌数。

1.2.2 过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍饮水管线的清洗试验。

将过硫酸氢钾复合物粉按1∶200比例稀释，根据鸡舍内饮水管线的容量，制备40 L经1∶200倍稀释的过硫酸氢钾复合物粉水溶液。在饮水管线首端的水桶中加入足量稀释好的消毒剂，然后在饮水管线末端放水直至有消毒剂流出停止放水，以此清除管内残存的水，确保水线中充满消毒剂，此时饮水线首端的水桶中应至少有半桶消毒液。此后计时开始浸泡管线，共浸泡2 h。待过硫酸氢钾复合物粉浸泡结束后，从饮水管线末端放出浸泡液至白色塑料桶中。肉眼观察浸泡液中的悬浮物、污垢的量以及末端水管内壁上生物膜厚度，以此判断过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍引水管线的清洗作用。

1.2.3 过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍的空气消毒试验。

进行过硫酸氢钾复合物粉空气消毒前，在圈舍的前、中、后3个位置分别放置一块TSA培养基，打开平皿上盖，静置20 min，然后将平皿上盖盖好，将平皿置于37 ℃条件下培养24 h，以此作为对照组。此后用自来水将圈舍冲洗干净，并用自来水按1∶100倍比例对过硫酸氢钾复合物粉进行稀释，往喷雾消毒机内加入足量的1∶100倍稀释的过硫酸氢钾复合物粉水溶液，关闭圈舍的门窗，开启喷雾消毒机，待消毒设备喷雾结束后，持续消毒1 h。消毒结束后，在消毒前采样的相同位置分别放置一块TSA培养基，打开平皿上盖，静置20 min，此后将平皿上盖盖好，将平皿置于37 ℃条件下培养24 h，以此作为消毒组。

比较消毒组与对照组空气沉降菌的数量，按照以下公式计算杀菌率（Pt），评价过硫酸氢钾复合物粉对空气的消毒效果：杀菌率（Pt）=[（N0-Nt）/N0]×100%。其中，N0为对照组的活菌数，Nt为消毒组的活菌数。

2 结果与分析

2.1 过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍自然菌的消毒效果评价试验结果 不同稀释倍数的过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍内自然菌的杀菌率见表1。由表1可知，过硫酸氢钾复合物粉按1∶100、1∶200稀释时，对鸡舍自然菌的杀菌率为100%;过硫酸氢钾复合物粉按1∶400稀释时，对鸡舍自然菌的杀菌率在99.99%以上，均能有效杀灭鸡舍内的自然菌。过硫酸氢钾复合物粉按1∶800稀释时，虽然对鸡舍自然菌都有一定的杀灭作用，但杀灭率未达到99.9%，说明过硫酸氢钾复合物粉在这个稀释倍数不能有效杀灭鸡舍内的自然菌。因此，过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍内自然菌的最低有效杀菌浓度为1∶400倍稀释后的浓度。

2.2 过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍饮水管线的清洗試验结果 在过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍饮水管线的清洗试验中，当消毒剂浸泡结束后从饮水线末端放出浸泡液至白色塑料桶中，可观察到放出的浸泡液中含有大量污垢沉淀（沉淀呈铁锈色）和絮状悬浮物，消毒剂颜色由玫红色变成砖红色。此外，末端管线内壁上没有生物膜覆盖，与未浸泡的管线内壁相比更为清洁，结果如图1所示。该试验结果表明，过硫酸氢钾复合物粉1∶200倍稀释时，充满鸡舍内饮水管线并浸泡2 h，对鸡舍饮水管线具有较好的清洗作用。

2.3 过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍的空气消毒试验结果

过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍空气的消毒试验结果显示，消毒前鸡舍各位置放置的平皿上均有菌落生长;使用过硫酸氢钾复合物粉喷雾消毒1 h后，前、中、后3块培养基上均没有细菌生长，结果如图2、3所示。该试验结果表明，过硫酸氢钾复合物粉1∶100稀释时，消毒作用1 h，对鸡舍内空气自然菌的杀菌率达100%。

3 讨论

该试验结果表明，过硫酸氢钾复合物粉对鸡舍自然菌的最低有效浓度为1∶400稀释，对应的活性氧含量为250 mg/L。王娟等[7]报道过硫酸氢钾复合盐对禽类常见菌大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄和鸭疫里墨杆菌的最低有效浓度分别为230.0、115.0、57.5和14.4 mg/L，与该试验结果基本一致。另外，杨俊芸等[8]、宋晓红等[9]、阳艳林等[10]、付维星等[11]报道的过硫酸氢钾复合物粉对细菌的杀菌试验大多采用标准菌株作为测试菌，但标准菌株的抗力及特性与临床自然菌存在一定的差异。为了给养殖场提供更接近实际的数据，该试验选用鸡舍内的自然菌作为测试菌，结果发现过硫酸氢钾复合物粉按1∶400稀释，可以有效杀灭鸡舍自然菌，杀菌率大于99.9%，提高了试验结果与临床应用的紧密性。

在该研究中将过硫酸氢钾复合物粉按1∶200稀释，充满鸡舍饮水管线并浸泡3 h，结果显示对过硫酸氢钾复合物粉鸡舍饮水管线具有良好的清洗效果，目前文献中尚未见过硫酸氢钾复合物粉对畜禽舍饮水管线清洗方面的相关报道。该研究结果拓宽了过硫酸氢钾复合物粉在养殖场的应用范围，对该产品在临床上的应用提供了理论支持。另外，过硫酸氢钾复合物粉按1∶100稀释时，对鸡舍空气中的自然菌杀菌率达100%，该试验结果与刘元元等[12]的报道相一致。上述研究结果为过硫酸氢钾复合物粉在临床上的应用提供了参考依据，具有较好的临床指导作用。

参考文献

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[7] 王娟，袁建丰，王贵平.过硫酸氢钾复合盐对禽类常见细菌病原微生物杀灭效果观察[J].中国消毒学杂志，2019，36（3）：167-169.

[8] 杨俊芸，黄恩龙，胡军，等.一种过硫酸氢钾复合物粉的消毒性能评价[J].四川畜牧兽医，2019，46（10）：27-30.

[9] 宋晓红，张福娥，王晓瑞.一种过硫酸氢钾消毒片相关性能的试验观察[J].实用医技杂志，2017，24（12）：1385-1386.

[10] 阳艳林，隆雪明.过硫酸氢钾复合粉消毒作用试验研究[J].中国兽药杂志，2008，42（3）：34-36.

[11] 付维星，张可煜，张丽芳，等.过硫酸氢钾复合粉的杀菌效果试验[J].中国兽医科学，2011，41（10）：1070-1075.

[12] 刘元元，蒋天泽，陈玲，等.过硫酸氢钾复合盐颗粒现场消毒效果试验[J].黑龙江畜牧兽医，2019（19）：133-134，145.