藏药三味宽筋藤汤散急性毒性试验及抗炎镇痛作用的研究

1. 西南医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000；2. 四川省阿坝州藏医医院，四川 马尔 513229；3. 四川省中医药科学院，四川 成都 610041

藏药三味宽筋藤汤散，藏文音译为“勒哲松汤”，由宽筋藤、渣驯膏、诃子肉三味藏药组成[1]，剂型为汤散剂，具有祛风除痹、消肿止痛、干黄水的作用。用于关节急慢性红肿、胀痛、伸屈不利、四肢僵硬，痛风、痹证[2]。痛风是由于嘌呤代谢紊乱，血尿酸增高导致尿酸结晶沉积在关节及皮下组织而致的一种疾病。临床上以高尿酸血症、特征性急性关节炎反复发作、痛风结石形成为特点[3]。痛风急性发作期的药物治疗主要是抗炎镇痛，临床上常用秋水仙碱、非甾体抗炎药和其他镇痛药，虽然疗效较好，但也有相应的毒副作用，如胃肠道不适、肝细胞损害、过敏反应等[4]。近年来，藏医药发展迅速，对防治痛风有独特的疗效和特色的治疗方法，三味宽筋藤汤散原方载于藏医药圣典《四部医典》，文中明确提出三味宽筋藤汤散可防治痛风性关节炎，且在阿坝州藏医医院临床应用中日服用药材量极小，疗效佳，副作用小。目前未见藏药三味宽筋藤汤散毒性和药效的相关报道，故本试验对藏药三味宽筋藤汤散进行急性和抗炎镇痛作用的研究，为进一步的开发成医疗机构制剂和临床应用提供依据。

1 试验材料和仪器

1.1 试验药物 三味宽筋藤汤散(由阿坝州藏医医院配制，批号：20190428)，棕黄色粉末，1 g粉末相当于1 g原生药，用前用0.5% CMC-Na溶液配制成相应浓度混悬液备用，本实验剂量按原生药g/kg计算。醋酸泼尼松，5 mg/片(浙江仙琚制药股份有限公司，批号：170621)；阿司匹林肠溶片，100 mg/片(Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l.，批号：BJ46000)；盐酸吗啡缓释片，10 mg/片(太极集团西南药业股份有限公司，批号：17110006)。

1.2 试验试剂 羧甲基纤维素钠(CMC-Na，批号2014102701，成都市科龙化工试剂厂)；生理氯化钠溶液(批号L218021808，四川科伦药业股份有限公司)；伊文思蓝(批号F20020913，中国医药(集团)上海化学试剂公司)；冰醋酸(批号20130726，成都长联化工试剂有限公司)。

1.3 试验动物 KM种小鼠，SPF级，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，生产合格证为SCXK(川)2018-19。小鼠寄养于四川省中医药科学院实验动物中心屏障系统，使用许可证号SYXK(川)2018-100。分笼饲养，自由摄食、饮水，定期更换垫料，室温22～25 ℃，湿度50 %±5 %，明暗各12 h。

1.4 仪器 JA1003A电子天平(上海精天电子仪器有限公司)；TGL-16台式高速冷冻离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；Varioskan Flash全波长多功能酶标仪(美国Thermo公司)；RB-200型智能热板仪(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 急性毒性试验[5-6]由预实验结果可知藏药三味宽筋藤汤散其急性毒性作用较弱，故对其做最大耐受量测定。取18～22 g的KM小鼠40只，雌雄各半，实验前禁食不禁水16 h，按体重随机将动物分为对照组、藏药三味宽筋藤汤散组。藏药三味宽筋藤汤散以最大浓度(0.4275 g原生药/mL)，最大体积(0.4 mL/10 g)一天灌胃小鼠2次，间隔6 h，使其日用剂量达到34.2原生药g/kg，对照组灌胃等体积0.5% CMC。观察并记录动物在给药后14d内的中毒表现及死亡情况，于给药前、给药后第7d、第14d称体重，试验结束后处死小鼠取心、肝、脾、肺、肾称湿重并计算脏器指数。脏器指数=脏器重量(mg)/小鼠体重(g)×10。

2.2 三味宽筋藤汤散对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 SPF级KM种小鼠，♂，18 ～22 g，适应性喂养后按体重随机分为4组，分别为模型组、醋酸泼尼松10 mg/kg、三味宽筋藤汤散3.0原生药g/kg、1.0原生药g/kg。每日灌胃1次，连续7d，末次给药后1h尾静脉注射1%伊文思蓝生理盐水溶液(0.1 mL/10g)，10 min后腹腔注射1%冰醋酸生理盐水溶液0.1 mL/10g，30 min后处死小鼠，腹腔注射生理盐水4 mL/10g，轻揉腹部后剪开腹腔取出腹水，离心，于590 nm测定OD值[7]。

2.3 镇痛试验

2.3.1 三味宽筋藤汤散对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响 SPF级KM小鼠，♀♂各半，18～22 g。适应性喂养后按体重随机分为4组，分别为模型组、阿司匹林100 mg/kg，三味宽筋藤汤散3.0原生药g/kg，三味宽筋藤汤散1.0原生药g/kg，每日灌胃1次，连续7 d，末次给药30 min后i.p.0.7%冰醋酸溶液0.1 mL/10g，随即记录小鼠的扭体次数，连续记录15 min[8]。

2.3.2 三味宽筋藤汤散对小鼠热刺激疼痛反应的影响 SPF级KM小鼠，♀，18～22 g。适应性喂养后进行筛选，以痛阈值>5 s且<30 s为合格，记录痛阈值。5 min后再次测定痛阈值，以两次平均值作为正常痛阈值，据此将小鼠分为对照组、盐酸吗啡组10 mg/kg、三味宽筋藤汤散3.0原生药g/kg，三味宽筋藤汤散1.0原生药g/kg，每日灌胃1次，连续7 d，盐酸吗啡仅在第7 d给药1次。末次给药后0.5 h、1 h、2 h测定小鼠药后痛阈值[9]。

3 结果

3.1 急性毒性

3.1.1 藏药三味宽筋藤汤散对小鼠体重影响 小鼠在灌胃给予藏药三味宽筋藤汤散34.2原生药g/kg后14 d内，未发现小鼠死亡，亦未见其他异常反应。藏药三味宽筋藤汤散组总体体重与对照组比较无统计学差异；但藏药三味宽筋藤汤散雌性小鼠体重在给药后7 d、14 d轻于对照组，其差异具有统计学意义，藏药三味宽筋藤汤散雄性小鼠体重与对照组比较无显著性差异，结果见表1。

组别剂量/g原生药/kg性别n给药前/g7d/g14d/g对照组—♀1018.7±1.527.8±1.432.8±2.2♂1020.2±1.127.3±1.737.1±2.0♀♂2019.5±1.527.5±1.534.9±3.0三味宽筋藤汤散34.2♀1019.1±1.4 26.0±1.3** 30.8±1.6*♂1020.3±1.228.6±2.336.5±2.4♀♂2019.7±1.427.3±2.333.7±3.6

注：与对照组比较,*P<0.05，**P<0.01。

3.1.2 藏药三味宽筋藤汤散对小鼠脏器影响 实验结束时处死动物，解剖肉眼检查各组小鼠主要脏器均未发现肉眼可见异常，三味宽筋藤汤散34.2原生药g/kg对小鼠心、肝、肺、肾等主要脏器指数均无明显影响，与对照组比较差异无统计学意义；但可增加雄性小鼠脾脏指数，与对照组比较差异具有统计学意义，结果见表2。

组别剂量/g原生药/kg性别n心肝脾肺肾对照组—♀1047.9±6.0466.9±36.944.6±9.474.7±20.7127.0±9.0♂1045.3±4.7517.7±27.542.9±4.874.3±31.5120.8±38.8♀♂2046.6±5.4492.3±41.043.7±7.374.5±25.9130.1±9.4三味宽筋藤汤散34.2♀1046.2±3.2478.9±48.339.0±6.576.6±27.2124.3±9.2♂1045.7±4.9556.0±53.248.6±5.2*74.8±33.0129.2±7.6♀♂2046.0±4.0517.5±63.343.8±7.675.7±29.5126.7±8.6

注：与对照组比较，*P<0.05。

3.2 三味宽筋藤汤散对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 三味宽筋藤汤散对醋酸致小鼠腹腔通透性升高具有一定的抑制作用，但作用较弱，与模型组比较差异无统计学意义，结果见表3。

组别n剂量/g/kgOD值模型组12-0.15±0.05醋酸泼尼松120.10.09±0.05三味宽筋藤汤散123.00.11±0.05三味宽筋藤汤散121.00.12±0.03

3.3 镇痛试验

3.3.1 三味宽筋藤汤散对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响 三味宽筋藤汤散可减少醋酸致小鼠扭体反应的次数，但与模型组比较差异无统计学意义，结果见表4。

组别n剂量/g/kg扭体次数模型组12-14.5±7.7阿司匹林120.16.8±7.4三味宽筋藤汤散123.07.7±9.8三味宽筋藤汤散121.09.7±11.2

3.3.2 三味宽筋藤汤散对小鼠热刺激疼痛反应的影响 三味宽筋藤汤散对热刺激小鼠痛阈值无明显影响，与模型组比较差异无统计学意义，结果见表5。

组别n剂量/g/kg正常痛阈值/s给药后痛阈值/s0.5 h1 h2 h模型组10-24.6±9.819.7±5.618.5±7.017.9±4.6盐酸吗啡100.0124.0±9.726.6±9.524.8±6.830.2±13.3*三味宽筋藤汤散103.024.7±7.820.1±9.016.8±6.621.7±15.1三味宽筋藤汤散101.024.7±7.319.9±7.422.8±7.020.3±12.2

注：与模型组比较，*P<0.05。

3 讨论

痛风(Gout)是由于嘌呤类物质在体内代谢紊乱，导致血液中尿酸水平升高，或(和)尿酸排泄减少而导致尿酸盐结晶沉积于关节液和组织的炎症性疾病[9]。痛风的典型临床表现是高尿酸血症、急性痛风性关节炎、慢性痛风性关节炎、痛风石、关节畸形、肾实质性病变等。痛风急性发作期的药物治疗主要是抗炎镇痛，临床上常用秋水仙碱、非甾体抗炎药和其他镇痛药。对于间歇期和慢性期的治疗主要是降尿酸治疗，使尿酸持续达到正常水平，治疗药物分为抑制尿酸生成药(别嘌呤醇、非布司他等)、促进尿酸排泄药(丙磺舒、苯溴马隆等)和尿酸酶(拉布立酶、培格洛替酶等)[10-11]。

藏药三味宽筋藤汤散功效为祛风除痹、消肿止痛、干黄水，临床用于治疗关节急慢性红肿、胀痛、伸屈不利、四肢僵硬、痛风及痹证等。原方载于藏医药经典著作《四部医典》，在阿坝州藏医医院常用于痛风性关节炎，疗效佳；且该方每日用量仅6 g，廉价有效，给患者带来的经济负担较小，有较大的开发价值，因此课题组成员对藏药三味宽筋藤的急性毒性试验以及抗炎镇痛作用进行研究。

本试验研究测得小鼠一次性口服藏药三味宽筋藤汤散的最大耐受量为34.2 g原生药/kg，该剂量为临床拟用剂量(6.0 g/d，0.1 g/kg)的342倍，提示藏药三味宽筋藤汤散临床用药是比较安全的。同时具有一定抑制醋酸致小鼠腹腔通透性升高的作用，也有减少醋酸致小鼠扭体反应的趋势，提示三味宽筋藤汤散具有一定的镇痛、抗炎作用。