祛风合剂质量标准研究

★ 李前琼 张红波 张静 高长青*（.济南市第二食品药品检验检测中心 济南 50000；.济南市第二妇幼保健计划生育服务中心 济南 50000）

祛风合剂为莱芜市皮肤病防治所的临床验方，为该院医院制剂。祛风合剂主要有荆芥、防风、黄芩、蛇床子、连翘等11味中药组成，具有祛风清热、利湿解毒功效，用于丘疹状湿疹、瘙痒性扁平疣、传染性软疣、泛发性神经性皮炎、接触性皮炎等的治疗。该制剂仅有性状及装量、相对密度、pH等合剂通则检验，难以达到有效控制产品质量的目的。为更好地控制其质量，本研究对制剂中防风、连翘及蛇床子建立了薄层色谱鉴别方法，并采用高效液相色谱法对制剂中黄芩所含黄芩苷进行了含量测定，能较为全面地控制制剂质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器岛津LC-20AT高效液相色谱仪，紫外检测器；梅特勒XSE105DU电子分析天平；GoodSee-20E薄层成像系统（上海科哲生化科技有限公司）；KQ-250DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q integral 3（美国Millipore）。

1.2 试药连翘对照药材（批号120908-201216），防风对照药材（批号120947-201810），蛇床子对照药材（批号121030-201507），蛇床子素对照品（批号110822-201710），黄芩苷对照品（批号110715-201821），均购自中国食品药品检定研究院；祛风合剂（规格：100mL/瓶，莱芜市皮肤病防治所提供，批号分别为20181217、20181219、20181221）；缺连翘、防风、蛇床子及黄芩的阴性对照品分别按处方工艺自制；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 防风薄层鉴别取祛风合剂30mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30mL，正丁醇液合并蒸干，加甲醇2mL溶解残渣，制成供试品溶液。另取缺防风的处方按相同工艺制备阴性对照溶液。再称取防风对照药材1.0g置锥形瓶中，加入20mL丙酮超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解残渣，制成对照药材溶液。分别吸取上述三种溶液5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，105℃加热2～3min，紫外光（365nm）检视，供试品与对照药材在相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。色谱图见图1。

2.1.2 连翘薄层鉴别取祛风合剂20mL，加入20mL石油醚（30～60℃）振摇提取2次，倾去石油醚液，蒸干水液，加甲醇2mL溶解残渣，制成供试品溶液。另取缺连翘的处方按相同工艺制备阴性对照溶液。再称取连翘对照药材0.5g置锥形瓶中，加入20mL甲醇超声15min，过滤，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解残渣，制成对照药材溶液。分别吸取上述三种溶液5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品与对照药材在相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。色谱图见图2。

图1 防风薄层色谱图

图2 连翘薄层色谱图

2.1.3 蛇床子薄层鉴别取祛风合剂20mL，加氯仿萃取2次，每次20mL，合并氯仿液，蒸干，加2mL甲醇溶解残渣，制成供试品溶液。另取缺蛇床子的处方按相同工艺制备阴性对照溶液。再称取蛇床子对照药材0.5g置锥形瓶中，加入甲醇30mL超声10min，滤过，滤液浓缩至约2mL，作为对照药材溶液。再取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液。分别吸取上述四种溶液5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-正己烷（6∶6∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，紫外光（365nm）检视。供试品与对照药材和对照品在相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。色谱图见图3。

图3 蛇床子薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件［1］色谱柱：Thermo ODS HYPERSIL C18柱（150×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm，理论塔板数按黄芩苷峰计算不少于2500。

2.2.2 溶液制备精密称取黄芩苷对照品0.0118g，置100mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得对照品溶液；精密吸取祛风合剂1mL，置于25mL容量瓶中，定容至刻度，即得供试品溶液；精密吸取缺黄芩的阴性样品溶液1mL，置于25mL容量瓶中，定容至刻度，即得阴性对照溶液。

2.2.3 专属性试验精密吸取2.2.1项下的三种溶液各10μL，按拟订的色谱条件进样。结果供试品溶液呈现和对照品溶液保留时间相一致的色谱峰，阴性对照溶液未出现与对照品溶液保留时间相一致的色谱峰，表明制剂中其他成分对黄芩苷的测定无干扰，方法专属性好。见图4。

图4 专属性试验液相色谱图

2.2.4 线性关系考察分别精密吸取浓度为0.1180mg/mL的黄芩苷对照品溶液1，5，10，15，20μL进样，记录峰面积。以黄芩苷对照品的进样质量为横坐标（X，μg），峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y= 1977419.90X-1735047.50，相关系数r=0.9991（n=5）。试验结果表明，黄芩苷进样量在0.118～2.36μg之间，进样量与峰面积线性关系良好。

2.2.5 精密度试验精密吸取黄芩苷对照品溶液（0.1180mg/mL）5μL，重复进样6次，测定峰面积。峰面积的RSD为0.49%，说明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验取供试品溶液（批号20181217），在0，2，4，8，12，24h时各进样一次，每次10μL，记录峰面积。峰面积的RSD为1.70%，表明24h内供试品溶液稳定。

2.2.7 重复性试验取供试品（批号：20181217），按2.2.2项下供试品溶液的制备方法平行制备6份，分别进样10μL，按拟订的色谱条件测定。结果6份黄芩苷的含量分别为0.5521，0.5458，0.5586，0.5518，0.5549，0.5610mg/mL，平均含量为0.5540mg/mL，RSD为0.98%，表明该方法在同一条件下重复性良好。

2.2.8 加样回收试验精密量取已知含量的供试品溶液6份（批号：20181217，黄芩苷含量为0.5525mg/mL）各1mL，分别精密加入对照品溶液4.5mL，混匀后依法测定含量，计算回收率为99.42%，RSD为1.07%。试验结果表明，测定方法的回收率良好。结果见表1。

表1 加样回收率考察结果（n=6）

2.2.9 样品含量测定取3批祛风合剂，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，各精密吸取10μL进样，按拟定的色谱条件进行测定。结果见表2。典及相关文献［2-4］对黄芩苷的提取采用50%～100%醇类溶剂提取，故本研究采用甲醇直接稀释制备供试品溶液。还考察了不同比例的甲醇-水流动相，发现黄芩苷拖尾较为严重，加入磷酸可以显著改善拖尾情况，分离度较好，阴性对照无干扰。

表2 黄芩苷含量测定结果（n=2） mg/mL

本研究确立了祛风合剂中防风、连翘、蛇床子的薄层色谱鉴别方法及黄芩中黄芩苷含量的液相色谱测定方法。试验结果表明，方法重复性好、专属性强、结果准确可靠，可用于祛风合剂的质量控制。

3 讨论

参考2015年版《中国药典》（一部）对该制剂中的主要药材荆芥、防风、连翘、蛇床子等进行了薄层色谱鉴别，其中防风、连翘、蛇床子的薄层鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰，而荆芥阴性对照有干扰，故未列入正文方法。

黄芩属清热燥湿药，具有清热燥湿、泻火解毒等功效；用于湿热、热毒诸证治疗，为祛风合剂的主药。对其指标成分黄芩苷进行了含量测定研究，药