李淑平 张伟 张焕春 王新语 李晶,2
(1山东省烟台市农业科学研究院,烟台 265500;2烟台大学生命科学学院,烟台264005)
樱桃根颈腐烂病是樱桃生产中的一种重要的病害,轻者造成树体衰弱,果实品质下降,重者可造成大树整株死亡。烟台市农科院大樱桃研究所分离鉴定出撕裂蜡孔菌可引起根颈腐烂。本实验利用90%磷酸铝WP、80%大生M-45WP、80%多菌灵 WP、430 g/L 戊唑醇 SC、21%过氧乙酸水剂和2.12%腐殖酸铜对大樱桃根颈腐烂病菌进行了室内毒力测定,以期明确其离体活性,为田间防治提供可靠的理论依据。
90%磷酸铝WP(四川诺富尔作物科技有限公司),80%大生M-45WP(陶氏益农中国有限公司),80%多菌灵WP(江苏三山农药有限公司),430 g/L戊唑醇SC (德国拜耳公司),21%过氧乙酸水剂 (石家庄宝丰化工有限公司),2.12%腐殖酸铜 (山西省阳泉市曙光化工有限责任公司)。
大樱桃根颈腐烂病菌Ceriporia lacerata为大樱桃研究所研究人员自田间病株上分离纯化获得,冰箱内4℃条件下保存备用。
采用菌体生长速率法和平板对峙培养法。
1.3.1 梯度浓度的设定 将90%磷酸铝WP、80%大生 M-45WP、80%多菌灵 WP、430 g/L戊唑醇SC预溶于灭菌水中配成1 000 μg/mL母液备用;将90%磷酸铝WP分设成不同梯度浓度,分别为 200 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL;80%大生M-45WP 分设成不同梯度浓度,分别为 400 μg/mL、100 μg/mL、25 μg/mL、6.25 μg/mL、1.562 5 μg/mL;80%多菌灵WP分设成不同梯度浓度,分别为100 μg/mL、50 μg/mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL、6.25 μg/mL;430 g/L戊唑醇SC分设成不同梯度浓度,分别为0.125 μg/mL、0.031 25 μg/mL、0.007 812 5 μg/mL、0.001 953 125 μg/mL、0.000 488 281 μg/mL。 21%过氧乙酸水剂1倍和2.12%腐殖酸铜原液。
1.3.2 含药平板的制备 根据上述浓度,按2倍和4倍稀释法将药剂加入到定量熔化的PDA培养基中,制成含药平板,以不含药平板为对照,每浓度重复3次。
1.3.3 接菌培养 用直径0.6 cm打孔器沿培养好的菌落边缘切下菌盘,用消毒接种针将菌盘反转移植到平板上,置于25℃条件下恒温培养4 d后,检查结果。
1.3.4 结果检查 以直尺交叉测量法测定菌盘扩展直径,与不施药对照菌盘扩展直径相比,求出药剂抑制生长率。
1.3.5 统计分析 将各处理浓度的抑制生长率转换成机率值,浓度转成对数值。利用DPS数据处理系统分别计算出90%磷酸铝WP、80%大生M-45WP、80%多菌灵WP、430 g/L戊唑醇SC的毒力回归方程、相关系数(r)、EC50和EC95值。
表1结果表明,90%磷酸铝WP对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长具有一定的抑制作用,其200 μg/mL(4 500倍)实测抑制生长率达65%以上;最小二乘法统计结果表明,90%磷酸铝WP对大樱桃根颈腐烂病菌毒力回归方程为y=3.732 5+0.729 0x,EC50 和 EC95 值分别为54.7915μg·mL (约16000倍)、9889.8548μg·mL(约 90 倍)。
表1 90%磷酸铝WP对大樱桃根颈腐烂病原菌菌丝生长毒力
表2结果表明,80%大生M-45WP对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长具有一定的抑制作用,其 400.0 μg/mL(2 000 倍)实测抑制生长率达67%以上;最小二乘法统计结果表明,80%大生M-45WP对大樱桃根颈腐烂病菌毒力回归方程为 y=3.239 2+0.935 1x,EC50和 EC95值分别为 76.384 1 μg/mL(约 106 00 倍)、4 386.920 7 μg/mL(约 180 倍)。
表2 80%大生M-45WP对大樱桃根颈腐烂病原菌菌丝生长毒力
表3结果表明,80%多菌灵WP对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长具有显著的抑制作用,其 100.0 μg/mL(8 000倍)实测抑制生长率达97%以上;最小二乘法统计结果表明,80%大生M-45WP对大樱桃根颈腐烂病菌毒力回归方程为 y=3.202 8+1.853 9x,EC50和 EC95值分别为 9.318 5 μg/mL(约 80 000 倍)、71.900 9 μg/mL(约 11 000 倍)。
表3 80%多菌灵WP对大樱桃根颈腐烂病原菌菌丝生长毒力
表4结果表明,430 g/L戊唑醇SC对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长具有极显著的抑制作用,其 0.125 μg/mL(3 440 000 倍)实测抑制生长率达97%以上;最小二乘法统计结果表明,430 g/L戊唑醇SC对大樱桃根颈腐烂病菌毒力回归方程为 y=7.672 9+1.163 4 x,EC50和EC95值分别为0.005 0 μg/mL (约430 000 000倍)、0.130 7 μg/mL(约 6 950 000 倍)。
表4 430 g/L戊唑醇SC对大樱桃根颈腐烂病原菌菌丝生长毒力
表5 21%过氧乙酸和2.12%腐殖酸铜对大樱桃根颈腐烂病原菌菌丝抑菌试验
表5结果表明,21%过氧乙酸水剂2倍和2.12%腐殖酸铜1倍对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长没有抑制效果。
430 g/L戊唑醇SC、80%多菌灵WP对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长具有很高的离体抗菌活性,90%磷酸铝WP和80%大生M-45WP对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长具有一定的离体抗菌活性,21%过氧乙酸水剂和2.12%腐殖酸铜对大樱桃根颈腐烂病菌菌丝生长没有抑制作用。