基于紫外烘晒的陈皮化柑橘总黄酮含量测定

肖珊美，杨晓东，刁银军，周玮琳

(金华职业技术学院，浙江 金华 321017)

陈皮为中医临床常用理气药，来源于芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮[1-2]。柑橘是世界第一大果树品种，种植面积和产量在世界百果中均居首位[3]。浙江省是我国柑橘主产地之一[4]，温州蜜橘与茶枝柑、大红袍、福橘并列，被2015年版《中国药典》收录为4种制作陈皮的柑橘原材料之一[5]。柑橘具有润肺、止咳、化痰、健脾、顺气、止渴的药效[6]。柑橘富含黄酮类化合物，不同品种的种类和分布有所不同[7-8]。本研究将温州蜜橘全果在短波紫外线照射下，后经45～55 ℃低温缓慢干燥，促使表皮陈皮化，制作成“全果陈皮化柑橘”，并测定其中总黄酮的含量，旨在为柑橘的开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

UV1900双光束紫外可见分光光度计(上海佑科仪器仪表有限公司)，全天候紫外烘晒干燥箱(自制)，JY-YF-1000摇摆式高速中药材粉碎机(浙江省瑞安市东源医疗设备机械厂)，FA114A电子分析天平(上海豪晟科学仪器有限公司)，LT502C电子秤(常熟市天量仪器有限责任公司)，KQ-500TSE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 主要材料

温州蜜橘采自衢州市柯城区草香园农产品专业合作社柑橘种植基地，经自制的全天候紫外烘晒干燥箱烘干，再用摇摆式高速中药材粉碎机粉碎。芦丁对照品购自中国药品生物制品鉴定所，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 对照品制备

称取芦丁标准品0.015 9 g，用甲醇溶解，定容于50 mL容量瓶中，制备浓度为0.318 mg·mL-1的芦丁对照品溶液。

1.3.2 样品制备

称取陈皮化柑橘粉末0.801 5 g，加入甲醇60 mL，超声提取60 min后过滤，用适量甲醇清洗残渣并过滤，收集滤液，用甲醇定容至100 mL。

1.3.3 硝酸铝显色法

吸取适量芦丁对照品及样品提取液于10 mL容量瓶中，加3 mL二次蒸馏水和5%亚硝酸钠溶液0.5 mL，混匀后放置5 min，加10%硝酸铝溶液0.5 mL，混匀后放置5 min，加5%氢氧化钠2.5 mL，混匀放置10 min后用二次蒸馏水定容至10 mL。

1.3.4 总黄酮标准曲线制备

精密吸取芦丁对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入3 mL二次蒸馏水，5%亚硝酸钠溶液0.5 mL，混匀后放置5 min，加入10%硝酸铝溶液0.5 mL，混匀后放置5 min，加入5%氢氧化钠2.5 mL，混匀放置10 min后用二次蒸馏水定容至刻度，配制的芦丁对照品溶液浓度分别为0、0.006 4、0.012 7、0.019 1、0.025 4、0.031 8 mg·mL-1。使用紫外分光光度计检测对照品溶液的吸光度，以样品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

1.3.5 精密度试验

分别取3份0.5 mL样品溶液于10 mL容量瓶中，按1.3.3硝酸铝显色法处理后，测定吸光度，重复测定3次，进行精密度试验。

1.3.6 稳定性试验

取样品溶液1份，按1.3.3硝酸铝显色法处理之后，分别测定显色0.5、1、1.5、2、3 h后的吸光度，进行稳定性试验。

1.3.7 加标回收试验

分别取3份0.5 mL样品溶液于10 mL容量瓶，按1.3.3硝酸铝显色法处理之后，分别加入0.20、0.40、0.60 mL芦丁标准溶液混合，二次蒸馏水定容至刻度，测定其吸光度，根据标准曲线计算总黄酮含量，计算加标回收率。

1.3.8 样品总黄酮含量测定

取样品溶液3份，按1.3.3节硝酸铝显色法处理之后，测定吸光度，由标准曲线获得总黄酮含量。

2 结果与分析

2.1 对照品和样品光谱扫描结果

按照硝酸铝显色法处理之后，将对照品溶液和样品溶液在240～740 nm波长范围内进行光谱扫描，图1可见，对照品和样品光谱图相似程度较高，在检测范围内有多个明显的波峰，峰形陡峭且紧密相连。样品溶液在510 nm处有波峰，对照品溶液在相应波长处无特征峰[8]，因此以510 nm作为检测波长。

图1 对照品和样品的扫描结果

2.2 芦丁标准曲线

以芦丁标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标进行线性回归，回归方程为y=12.767x-0.003 7，r=0.999 8，表明芦丁标准品含量在0～0.04 mg·mL-1与吸光度呈现良好的线性关系。

2.3 精密度

精密度试验结果表明，在510 nm下3次检测吸光度为0.305、0.305、0.303，相对标准偏差为0.4%，说明精密度良好。

2.4 稳定性

稳定性试验结果表明，显色0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h时，样品检测的吸光度基本保持稳定，依次为0.308、0.309、0.305、0.302、0.297，显色3 h的吸光度下降。相对标准偏差为1.6%

2.5 加标回收率

表1结果表明，本试验中加标回收率为98.1%，相对标准偏差为0.5%，说明采用硝酸铝显色，紫外可见分光光度法测定陈皮化柑橘总黄酮含量的准确度较高。

表1 加标回收率的试验结果

2.6 样品中总黄酮含量

表2结果表明，本批次陈皮化柑橘总黄酮平均含量为61.05 mg·g-1，相对标准偏差为0.3%。

表2 陈皮化柑橘的总黄酮含量

3 讨论

采用硝酸银显色，可见分光光度法检测，以510 nm为检测波长，芦丁为对照品测定陈皮化柑橘中总黄酮的含量，总黄酮含量为61.05 mg·g-1，高于川陈皮中总黄酮含量[9]，表明紫外烘晒的陈皮化柑橘中含有丰富的黄酮类化合物，具有进一步开发应用的价值[10]。

全天候紫外烘晒干燥箱的特点为短波紫外线灭菌、低温烘干，制备的陈皮化柑橘不易腐烂，易操控，陈皮化效果远高于传统陈皮制作方法。利用柑橘成熟果实制作陈皮化柑橘，开发柑橘药食两用的果茶新品，既提升产品价值，增加果农收益，又符合我国农业可持续发展这一项长远战略方针。