添喂绞股蓝对广西三黄鸡胸腺增龄性的影响

张润祥　吴亚辉　黄诗琦　王勇杰　白熙　唐小川　王晓丽

摘要：从组织学角度探讨添喂绞股蓝对广西三黄鸡胸腺增龄性的作用，在饲料中添加0.5%绞股蓝粉，考察1、14、28、56、90、120、150日龄胸腺重、胸腺指数、皮髓面积比、胸腺小体数量及面积。结果表明，随日龄增加，胸腺重升高，胸腺指数先升后降，添喂绞股蓝在一定程度上提高胸腺重及胸腺指数;随日龄增加，胸腺皮髓比降低，120日龄时添喂组皮髓比显著大于不添喂组（P<0.05）;不添喂组和添喂组的胸腺小体数量分别在56日龄和90日龄前增多，之后呈波浪式下降，在28、90、120日龄时，添喂组胸腺小体数量显著多于不添喂组（P<0.05）;不添喂组和添喂组的胸腺小体面积在120日龄前增大，之后减小，不添喂组和添喂组各日龄差异不显著。表明在饲料中添加0.5%绞股蓝粉能够延长广西三黄鸡胸腺成熟时间、推迟胸腺退化，提高胸腺功能。

关键词：绞股蓝;广西三黄鸡;胸腺;增龄性

中图分类号：S831;R285.5         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2020）03-0111-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.03.023

Effect of feeding Gynostemma Pentaphyllum on the thymus aging of

Guangxi Sanhuang chickens

ZHANG Run-xiang，WU Ya-hui，HUANG Shi-qi，WANG Yong-jie，BAI Xi，TANG Xiao-chuan，WANG Xiao-li

（College of Animal Science and Technology，Guangxi University，Nanning 530005，China）

Abstract： From the histological point of view， the effect of adding Gynostemma pentaphyllum on the thymus aging of Guangxi Sanhuang chickens was studied. 0.5% G. pentaphyllum powder was added to the feed， and the thymus weight， thymus index， cortex-medium area ratio， number and area of thymus bodies were examined at 1， 14， 28， 56， 90， 120， and 150 d. The results showed that with increasing age， the thymus weight increased， and the thymus index rose first and then decreased. The addition of G. pentaphyllum increased the thymus weight and thymus index to a certain extent. With the increase of the age， the thymic cortex-medullar ratio decreased， and at 120 d， the cortex-medullar ratio of the fed group was significantly greater than that of the non-added group（P<0.05）. The number of thymus bodies in the non-feeding group and the feeding group increased before 56 and 90 d， respectively， and then decreased in a wave pattern. At 28， 90， and 120 d， the number of thymus bodies in the fed group was significantly more than that in the non-fed group（P<0.05）. The thymus body area of the non-feeding group and the feeding group increased before 120 d， and then decreased. The day-to-day differences of the non-feeding group and the feeding group were not significant. Adding G. pentaphyllum powder in the feed can prolong the thymus maturation time， delay the thymus degradation， and improve the thymus function.

Key words： Gynostemma pentaphyllum; Guangxi Sanhuang chicken; thymus; ageing

絞股蓝具有免疫增强等多种药理作用[1，2]，在中国南方资源丰富、价格低廉。国内外有较多关于绞股蓝和对机体免疫功能影响的研究，多集中于绞股蓝成分分析或者绞股蓝提取物功能上[3，4]，鲜见添喂绞股蓝对胸腺组织学增龄性影响的研究报道。胸腺作为与机体免疫功能密切相关的中枢免疫器官，研究绞股蓝对其作用是一个重要的探索方向。本研究以广西三黄鸡为对象，在饲料中添加0.5%绞股蓝粉，从组织学方面研究对胸腺增龄性的影响，以期为绞股蓝在增强机体免疫力方面的进一步研究提供形态学依据。

1  材料与方法

1.1  胸腺获得

取健康1日龄广西三黄鸡60只，随机分为对照组和试验组，每组30只，对照组饲喂全价饲料，试验组饲喂全价饲料加饲料质量0.5%的绞股蓝粉。试验动物房内笼养，饲养条件一致，正常免疫，自由采食、饮水。分别于1、14、28、56、90、120、150日龄称重，取3只颈动脉放血处理致死，取出胸腺，称重，放入Bouin氏固定液中，固定24 h，石蜡切片，HE染色。

1.2  数据测定

1.2.1  胸腺指数  测量取样广西三黄鸡的体重（g）和胸腺重（mg），计算胸腺指数。胸腺指数=胸腺重/体重。

1.2.2  皮髓比  试验组和对照组各取3个标本，每个标本取2张切片，在显微镜下观察，取50个10×4视野，拍照。使用JD801形态学图像分析系统软件（江苏省捷达软件工程有限公司）进行分析，记录皮质面积和髓质面积，计算皮髓比。

1.2.3  胸腺小体个数及面积  试验组和对照组各取3个标本，每个标本取2张切片，在显微镜下观察，取50个10×40视野计数每个视野内的胸腺小体数量;取50个10×40的胸腺小体视野拍照，使用JD801形态学图像分析系统软件进行分析测量胸腺小体面积。

1.3  统计分析

数据采用统计软件SPSS 21.0进行统计分析，t检验。

2  结果与分析

2.1  添喂绞股蓝对广西三黄鸡胸腺重和指数的影响

从广西三黄鸡试验组和对照组的胸腺重（表1）和胸腺指数（表2）情况看，试验组和对照组胸腺重、胸腺指数变化趋势大致相同。随日龄增加，胸腺重逐渐增加，试验组胸腺重除56日龄外，其他日龄均高于对照组，但差异不显著;胸腺指数随日龄增加先升高，28～56日龄达到最大值后降低。试验组胸腺指数除56、90日龄略低于对照组外，其余日龄均略高于对照组，但两者间差异均不显著。

2.2  添喂绞股蓝对广西三黄鸡胸腺皮髓比的影响

顯微镜下观察，低日龄时期胸腺小叶多独立存在，面积小，数量少，皮质与髓质界限清晰（图1A）;随日龄增加，胸腺小叶逐渐增多，面积增大，髓质范围快速扩大，皮髓比显著降低，相邻胸腺小叶的髓质部相互连接，120～150日龄皮质部变薄，多个胸腺小叶髓质连成一片，皮髓界限模糊（图1B）。分析（表3）表明，随日龄的增加，试验组和对照组的皮髓比趋势一致，都逐渐降低，120日龄时试验组皮髓比显著大于对照组（P<0.05），其余日龄差异不显著。

2.3  添喂绞股蓝对广西三黄鸡胸腺小体的影响

显微镜下观察，广西三黄鸡胸腺有3种类型的胸腺小体，分别为单个的网状细胞膨胀成的单细胞型胸腺小体（图2A）、典型的网状细胞环抱而成的同心圆状胸腺小体（图2B）以及多个网状细胞聚在一起的团块状胸腺小体（图2C）。团块状的胸腺小体大小不一，形态各异，有些胸腺小体中央封闭有血管，血管外周再围绕网状细胞（图2D）。单细胞型胸腺小体在低日龄胸腺有较多分布，随着日龄增加，典型的同心圆状胸腺小体以及不规则团块状胸腺小体迅速增多，尤其在高日龄胸腺中，胸腺小体以团块状分布为主。

对胸腺小体数量统计分析（表4），随日龄增加，胸腺小体数量先增多，达到最大值后呈波浪式下降。对照组胸腺小体数量在56日龄时达到最多，显著多于试验组（P<0.05）;试验组胸腺小体数量在90日龄时达到最多，显著多于对照组（P<0.05）。试验组在90～150日龄胸腺小体数量虽呈下降趋势，但均显著多于对照组。表明添喂绞股蓝可以减缓胸腺小体数量的增加和降低，使其达到最大数量日龄延后。

分析胸腺小体面积（表5），1～120日龄，随着日龄增加，试验组和对照组胸腺小体面积均增大，都在120日龄时达到最大值，后下降。试验组与对照组胸腺小体面积各日龄差异均不显著。

3  小结与讨论

关于中草药对免疫器官的影响研究报道较多，中草药成分对正常免疫状态下动物免疫器官的作用不同学者有不同结论。以银杏叶为饲料添加剂能显著提高鸡平均日增重，在一定程度上提高胸腺指数和法氏囊指数[5]。八味方能显著提高免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数，对正常健康小鼠作用不显著[6]。给健康小鼠灌胃200 mg/kg绞股蓝总皂苷能够显著提高小鼠的胸腺指数、脾脏指数[7]。本研究添加0.5%绞股蓝粉的广西三黄鸡胸腺重和胸腺指数和不添加多数日龄的多数检测项目差异不显著，但在120日龄和150日龄添加组的胸腺重和胸腺指数要高于不添加组，这可能提示添喂绞股蓝能够在一定程度上促进胸腺发育成熟，并增强高日龄鸡的免疫功能。

1～120日龄鸡随日龄增加，胸腺皮质部变薄，皮髓比下降，髓质部相连且皮髓界限不清晰[8]。鸵鸟胸腺1～30日龄发育缓慢，30～60日龄迅速发育，60～90日龄发育基本稳定，之后随日龄增加，胸腺逐渐萎缩[9]。对不同日龄小鼠胸腺观察，4周龄皮质厚，髓质呈斑点状，20周龄胸腺皮质变薄，少数髓质连在一起，到了10月龄，皮质部已经很薄，多个胸腺小叶的髓质连成一片[10]。本研究发现，随着日龄增加，胸腺小叶皮质部变薄，髓质部范围变大，由斑点状逐渐连成一片，皮髓比显著降低，这与其他胸腺皮髓比增龄性的研究一致。

在鸡的基础日粮中添加1.0 g/kg的半胱胺能够促进鸡胸腺和法氏囊的发育，使胸腺皮质部变厚，淋巴细胞增多，增强鸡的免疫功能[11]。研究D-半乳糖构建的衰老大鼠模型，发现人参皂苷Rg1能显著提高衰老大鼠的胸腺指数和皮髓比，提高胸腺细胞的增殖能力，降低胸腺细胞的凋亡率[12]。本研究添加0.5%绞股蓝能够促进胸腺的发育，在28、90、150日龄试验组的皮髓比均高于对照组，120日龄试验组的皮髓比显著高于对照组，说明添喂绞股蓝可以使胸腺皮质变厚，延缓高日龄动物胸腺萎缩，增强机体免疫功能。

胸腺小体是胸腺髓质部的特有结构，幼稚的胸腺小体细胞能够分泌细胞因子及生长因子，在促进胸腺细胞发育成熟方面表现出重要的作用。本研究发现，在广西三黄鸡胸腺中能观察到3种类型胸腺小体，与对雏鸭胸腺[13]和对非洲鸵鸟的研究[9]结果一致。在牦牛胸腺中观察到3种类型的胸腺小体[14]，而在人类胎儿胸腺中可见单个存在及呈融合状的2种胸腺小体[15]，也有研究者曾在鸟的胸腺中观察到1种单细胞型胸腺小体[16]，这可能提示不同物种胸腺小体的种类存在差异。

胸腺小体数量及面积的增加是免疫功能增强的体现，在胸腺细胞发育成熟活跃期，需要较多胸腺小体来完成选择培育T细胞功能，胸腺小体数量及直径出现代偿性升高。对蛋鸡和肉鸡胸腺小体进行研究，肉鸡胸腺小体直径在5日龄达到最大，之后开始不同程度降低，蛋鸡在12日龄达到高峰，之后下降，胸腺小体数量变化趋势与直径大致相同[17]。用青刺果种粕粉添加喂鸡，随着日龄增加，胸腺小体增多，饲喂组比对照组胸腺小体数量多[18]。将松针粉—麦饭石作复合添加剂加入鸡饲料，随日龄增加，胸腺小叶面积增加，胸腺小体数量增多[19]。本研究发现，添加绞股蓝可使胸腺小体数量达到最大的日龄延后，其后胸腺小体数量虽呈下降趋势，但均高于对照组;试验组与对照组胸腺小体面积各日龄差异均不显著。这表明添喂绞股蓝可减缓胸腺小体数量增加和降低，提示添喂绞股蓝可能延长胸腺成熟时间并推迟胸腺退化。

综合分析表明，在广西三黄鸡饲料中添加0.5%绞股蓝粉能够一定程度延长胸腺成熟时间并推迟胸腺退化，提高胸腺的功能。

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收稿日期：2019-04-30

基金项目：国家级大学生创新创业训练计划项目（201710593082）;广西壮族自治区大学生创新创业训练计划项目（201428）

作者简介：张润祥（1995-），男，河北衡水人，在读硕士研究生，研究方向为动物组织学，（电话）18777159571（电子信箱）827575791@qq.com; 共同第一作者，吴亚辉（1989-），女，硕士，主要从事动物组织学研究;通信作者，王晓丽（1976-），女，教授，博士，主要从事细胞学、组织学以及胚胎工程研究工作，（电话）15994384384（电子信箱）xiaoliwang@gxu.edu.cn。