重组禽流感病毒灭活疫苗（细胞源）保存期试验的研究

付春杰，杜 鑫，杨 柳，高晓庆，苏 操，张 丹，赵海源

吉林冠界生物技术有限公司，吉林梅河口 135000

禽流感病毒是由A 型禽流感病毒所引起禽类的一种急性高度致死性、传染性病毒。禽流感被列为A 类传染病，不仅是鸡，其它一些家禽如鸭和野鸟都能感染禽流感。高致病性禽流感在全国范围内的突击爆发和大面积的流行引起了世界各国的高度关注和重视[1]。为有效控制疫情爆发，国际上主要采取隔离补杀，但当大面积流行性爆发扩散时，对养殖业造成的经济损失难以估量，养殖户也难以承担。因此免疫接种就成了控制及预防疫情的关键措施之一，成为养殖的重中之重[2]。

本研究通过监测重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）在2 ～8 ℃保存不同时间的质量情况，为疫苗在有效期内的有效使用提供数据支持。

1 材料

1.1 疫苗

3 批重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）由吉林冠界生物技术有限公司生产，批号分别为2019001-s、2019002-s、2019003-s。

1.2 SPF 鸡

购自北京某实验动物技术有限公司。

1.3 抗原及血清

重组禽流感病毒H5 亚型Re-11 株、Re-12 株和H7 亚型H7-Re2 株血凝抑制试验抗原及阳性血清，均购自哈尔滨某生物技术有限公司。

2 方法

将3 批重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）置2 ～8 ℃保存，分别于保存0、4、8、12、15 个月时进行性状检验、效力检验及甲醛残留量测定。

2.1 性状检验

2.1.1 剂型：取一清洁吸管，吸取少量疫苗滴于清洁冷水中，观察液滴扩散情况。

2.1.2 稳定性：吸取疫苗10 mL 加入离心管中，以3 000 r/min离心15 min，观察管底析出的水相体积。

2.1.3 黏度：按《中国兽药典》[3]2015 年版三部附录进行测定。

2.2 效力检验

每组、每个保存时间段的疫苗需用3 ～4 周龄SPF 鸡10 只，每只胸部肌肉注射疫苗0.3 mL。21 d后，连同对照鸡5 只，分别采血，分离血清，分别用H5 亚型Re-11 株、Re-12 株和H7 亚型H7-Re2株抗原测定HI 抗体效价。

2.3 甲醛残留量测定

按《中国兽药典》2015 年版三部附录进行测定。

3 结果

3.1 性状检验

疫苗在2 ～8 ℃保存至15 个月，每批疫苗、每个保存时间段的剂型、黏度和稳定性均符合要求。结果见表1。

表1 3 批疫苗不同保存时间的性状检验结果

3.2 效力检验

将在2 ～8 ℃保存不同时间的3 批疫苗免疫SPF 鸡，每次均于免疫后21 d 采血，分离血清，测定H5 亚型Re-11 株、Re-12 株和H7 亚型H7-Re2株HI 抗体效价，结果表明，疫苗的免疫效力未发生明显变化，具体实验数据见表2。

表2 3 批疫苗不同保存时间的效力检验结果（log2）

3.3 甲醛残留量

疫苗在2 ～8 ℃保存至15 个月，每批疫苗、每个保存时间段的甲醛残留量维持在稳定的数值范围内，结果见表3。

表3 3 批疫苗不同保存时间的甲醛残留量测定结果

4 讨论

3 批重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N1 Re-11 株+Re-12 株，H7N9 H7-Re2 株）在2 ～8 ℃保存至15 个月，分别于保存0、4、8、12、15 个月时测定相关参数，结果表明保存15 个月时，剂型、黏度和稳定性均符合要求，未出现分层或破乳；免疫效力无明显变化；甲醛残留量也未发生明显变化。这些检测结果也间接验证了疫苗生产工艺的稳定性。

在实际应用中，疫苗按规定保存条件2 ～8 ℃储存[4]，在有效期12 个月内使用无任何质量问题，可放心使用。