紫景天黄酮对实验性牙周炎大鼠血清中IL-6、IL-18表达的影响

王欢欢,刘 新*,孔晨飞,王 伟，张殿文

(1.吉林大学中日联谊医院 a.口腔科;b.科研中心,吉林 长春130033；2.吉林省中医药科学院)

牙周炎是发生在牙周组织的慢性炎症疾病，病因常为菌斑等多种因素，常出现如深牙周袋、牙槽骨破坏等临床表现，长期发展会造成牙松动、失牙，对人们的心理生理具有极大的影响[1]。IL-6是一种生物功能十分复杂的炎性因子，其来源广泛，可作用于机体各种靶细胞[2]，牙周炎时，IL-6促进成骨细胞产生破骨细胞分化因子从而加速破骨细胞增殖，使牙槽骨破坏加重；此外IL-6还可作用于牙周膜细胞，降低牙周膜修复与再生能力，致使牙周组织发生病理改变[3]。IL-18属IL-1细胞因子家族，由单核/巨噬、Th1细胞等分泌,可造成牙周的炎性损伤[4]。本实验采用ELISA法检测牙周炎大鼠紫景天黄酮治疗前后血清内IL-6、IL-18的水平，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

28只6-8周的SPF级Wistar大鼠(吉林大学动物实验研究所)，每只体重180-220g，雌、雄大鼠分笼常规喂养、饮水2周。

1.2 实验试剂、仪器

ELISA试剂盒(RnD)，牙龈卟啉单胞菌(吉林大学病原生物学系提供)，1%浓度紫景天黄酮凝胶(吉林省中医药科学院提供)，磨牙机(吉林大学口腔医学院提供)，多功能酶标仪(加拿大BioTek公司)

1.3 大鼠牙周炎模型建立与分组

2周后，从所有大鼠中随机取出8只健康大鼠作为正常对照组，不作特殊处理，继续正常喂养、饮水。剩余20只大鼠按参考文献[5]采用带牙龈卟啉单胞菌的丝线结扎并将其包埋于大鼠后磨牙牙颈部的龈沟内，可降低其脱落率，加强局部持续刺激。4周后，有两只大鼠因丝线结扎脱落而被淘汰，剩余大鼠随机处死两只做病理学观察，镜下可见牙龈中炎细胞弥漫浸润，出现微小脓肿；可见深牙周袋形成；骨小梁结构紊乱，牙槽嵴顶出现破坏。临床可见牙颈部菌斑堆积，牙龈色鲜红、质脆、出血，牙周袋脓液溢出，出现重度牙周炎症状，证明大鼠牙周炎模型建立成功。将建模完成的16只牙周炎大鼠随机分成模型对照组(n=8)和治疗组(n=8)。治疗组大鼠牙周袋内注入1%紫景天黄酮凝胶剂，每日两次，每次0.5 ml,连续上药2周。

1.4 血清样本采集

在三组大鼠腹部注射100 g/L水合氯醛(0.3%/kg)的麻醉剂，腹主动脉取血5 ml置于真空采血管中，分离上层血清,于-80℃冰箱中冻存。

1.5 大鼠血清IL-6、IL-18的表达量检测

取各组冻存的血清样本，按ELISA试剂盒操作步骤检测IL-6、IL-18在血清中的表达量，将反应板置于扫描仪中测得光密度值(OD值)。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 血清中IL-6的表达水平

由图1结果可见，模型组大鼠IL-6为147.02±12.87 pg/ml显著高于未做任何处理的正常组的表达量100.46±11.26 pg/ml(P<0.01)；与模型组相比，治疗组大鼠使用紫景天黄酮凝胶牙周袋内用药一段时间后IL-6的表达量为101.93±10.11 pg/ml(P<0.01)，有明显降低。

2.2 血清中IL-18的表达水平

由图2结果可见，正常组与模型组大鼠血清中IL-18表达量分别为93.23±28.56 pg/ml和190.74±19.74 pg/ml，模型组其表达量增高明显(P<0.05)；与模型组相比，治疗组IL-18表达量为103.34±10.83 pg/ml，表明紫景天黄酮凝胶具有明显的治疗作用，可降低牙周炎大鼠血清中IL-18的表达(P<0.05)。

图1 紫景天黄酮凝胶对大鼠血清中IL-6表达量的影响

图2 紫景天黄酮凝胶对大鼠血清中IL-18表达量的影响

3 讨论

牙周炎是我们在临床上常见的慢性感染性疾病，严重时可造成牙齿的松动、移位甚至脱落，其不仅可造成局部牙周组织破坏[6]，并且有研究报道牙周炎时局部分泌的一些炎性介质可经血液等途径引起内分泌、呼吸、心脑血管等机体各系统疾病，具有严重危害[7-9]。IL-6、IL-18通过机体组织与免疫细胞之间的相互作用来调节牙周组织的病理生理过程。IL-6是一种具有多种生物学活性的炎症因子，可调节宿主对细菌微生物感染的反应[10]。IL-6还可诱导多种炎性介质的产生如基质金属蛋白酶-1、组织蛋白酶L等，加重牙周病变[11]。据文献[12]报道，牙周病时，机体免疫应答的核心是维持Th1/Th2的相对稳定，IL-18通过干预Th1和Th2分化，破坏其平衡状态，从而使牙周组织发生破坏，加速牙周病进展。牙周炎的治疗一直是国内外医学研究的热点，目前牙周炎的治疗主要为牙周袋内局部用药，即将药物放置在牙周袋内[13]，其优点在于袋内含量明显高于最小抑制浓度(MIC)，并可缓慢作用，维持时间较长。临床上常用的牙周炎局部治疗药物有抗生素类、免疫调节剂类、中药制剂等[14]，抗生素类药物长期使用易产生耐药性且毒性作用较大[15]。紫景天是生长在长白山的一种野生植物，具有消炎止痛、收敛止血、调节机体的免疫功能、恢复蛋白质代谢障碍的功效，其中所含的黄酮类元素如山柰素有较好的抑菌作用[16，17]。用其制成的紫景天黄酮凝胶为纯中药制剂，对机体毒性作用小，刺激性小，可抑制细胞分泌IL-6、IL-18等介质，对牙周炎有较好的治疗效果[18,19]。

本实验应用紫景天黄酮凝胶剂可明显抑制牙周炎大鼠血清中IL-6、IL-18的表达，并且可调节大鼠体内的免疫反应，促使牙周病变恢复到正常，但牙周炎为多因子参与并相互作用而发生的，其余致炎、抑炎因子对牙周病的影响有待后期进行研究。