红枫湖水体优势真菌分析及评价

王 慧，董 莹

(1.贵阳学院，贵州 贵阳 550005;2.东营市农业农村局，山东 东营 257091)

红枫湖位于贵州省贵阳市平坝县，是日常生活用水的重要来源之一，与阿哈水库，百花湖并称为“两湖一库”，是贵阳市重要的饮用水水源。红枫湖的微生物种类及分布可作为检测水质的重要指标之一，通过前期研究，在不同时间采集红枫湖水体取样，对水体中真菌进行分离培养，通过数据统计，得出真菌的优势菌属分别是半知菌亚门链格孢属(Alternariaspp.)，曲霉属(Aspergillusspp.)，青霉属(Penicilliumspp.)，担子菌亚门耙齿菌属(Irpexspp.)[1]。现将出现频率较高，且具有研究意义的真菌进行小鼠毒力测定，为水体评价提供一定的理论依据[2-3]。

1 材料与方法

1.1 试验动物

于贵阳医学院和贵州大学动科院购买体重17-20g的清洁级健康小白鼠，试验前先喂养观察一周，试验期间饲喂贵阳医学院提供的小鼠专用饲料，自由饮水，在整个试验周期内定期将试验场地、笼具与水具消毒，通风良好，定期打扫，让其适应新的环境，准备用于试验。

1.2 试验方法

1.2.1 菌液配制

取分离纯化好的菌株，用无菌手术刀把平板表面的孢子刮入带玻璃珠的无菌水中，混匀后，用血球计数板计数，配制成1×105、1×107、1×109个/mL。对于不产孢的真菌，刮取菌丝后，脱水，称重，配制成1×10-5、1×10-3、1×10-1g/mL。

1.2.2 毒力测定方法

试验采用灌胃给药的方法进行小白鼠染毒。灌药前先称量每只小鼠的重量，根据体重灌胃给药。严格遵照每只小鼠灌胃量不得大于0.2mL/10g，灌药前禁食4h，只供给充足的清洁饮水。

1.2.3 试验动物与试验设计

选用17-20g的清洁级小鼠共50只，其中雌鼠25只，雄鼠25只，任意挑选雌雄小鼠各5只放在一组，饲养条件一致。第一组为对照组，其余5组在第一周连续七天染毒，1次/天，试验周期为3周，试验一周，观察2周。采用灌胃的方式，采用等容蒸馏水处理作为对照，同时每7d称重记录一次。在第7d、14d、21d剖杀作定期检测观察，一个时间点剖杀2只小鼠，雌雄各一只。

1.2.4 检测指标与测定方法

试验期间每日灌胃后密切观察试验小鼠对毒性反应，包括小鼠精神、食欲、饮水、活动、皮毛等病理变化及其出现的时间、死亡数、死亡时间、死亡率、中毒剂量，并做好标记。仔细观察各试验组小鼠的采食、饮水和生长发育情况。

2 结果与分析

2.1 未导致小鼠发病的菌种

灌食耙齿菌属(Irpespp.)真菌临床症状及病理剖检变化：试验组小鼠并无食欲减退，形体消瘦，精神萎靡等症状。剖检后内脏均正常。在喂食耙齿菌属菌液后，对小鼠无任何毒性和危害。

表1 喂食耙齿菌属(Irpex spp.)菌液后小鼠变化

2.2 菌液处理小鼠发病较轻菌种

2.2.1 链格孢属(Alternariaspp.)测定结果

临床症状及病理剖检变化：试验组小白鼠并无食欲减退，形体消瘦，精神萎靡等症状。剖检可见胸腺肿大，109个/mL浓度组中出现了脾脏表面不光滑，增大。在喂食链格孢属的菌液后，三个浓度组出现了不同程度的发病率，在第二三周，停止灌胃菌液后，身体开始自愈。在重量变化方面，三组浓度组与对照组并无太大差异。

表2 喂食链格孢属(Alternaria spp. )菌液后小鼠变化

2.2.2 小光壳属(Leptosphaerulinaspp.)测定结果

临床症状及病理剖检变化：试验组小白鼠并无食欲减退，形体消瘦，精神萎靡等症状。剖检可见107个/mL和109个/mL浓度组均出现胸腺肿大，109个/ml浓度组中出现了脾脏表面不光滑，增大。在喂食小光壳属(leptosphaerulinaspp.)的菌液后，105个/mL浓度组未出现发病率，107个/mL浓度组出现了胸腺肿大的症状，109个/mL浓度组在第一周灌胃菌液时出现了胸腺肿大和脾脏表面不光滑，增大。以上三组均未出现死亡率。三组浓度组与对照组重量并无显著差异。

表3 喂食小光壳属(leptosphaerulina spp.)菌液后小鼠变化

2.2.3 小球腔菌属(Leptosphaeriaspp.)测定结果

临床症状及病理剖检变化：试验组小白鼠并无食欲减退，形体消瘦，精神萎靡等症状。剖检可见三个浓度组均出现胸腺肿大，无其他症状。在喂食小球腔菌属菌液后，10-5g/mL浓度组和10-3g/mL浓度组症状相同，均出现了胸腺肿大的情况，但在停止灌胃菌液之后，第三周自愈。10-1g/mL浓度组从开始灌胃菌液出现胸腺肿大，一直持续病症。以上三组均未出现死亡率。三组浓度组与对照组重量并无显著差异。

表4 喂食小球腔菌属(Leptosphaeria spp.)菌液后小鼠变化

3 讨论

通过小白鼠试验，5种优势真菌均未出现死亡率，临床症状局限在胸腺肿大，脾脏增大，脾脏和肝脏表面不光滑，食欲下降等。据文献报道，以上均为免疫器官发生防御反应，而且大部分在停止灌胃试验后，能够自愈[4-6]，免疫响应机制有待下一步深入研究，其他器官、外部特征和行为并未出现病症。而耙齿菌属中模式种白囊耙齿菌，是一种要用真菌，其多糖具有很好的抗菌、消炎、利尿、抗疲劳等功能，同时在治理环境方面具有显著的优势，在废水处理中起到积极的作用[7]。本研究灌胃菌液的浓度远高于饮用水的带菌浓度，且高浓度下小鼠部分只产生了免疫响应，耙齿菌属真菌且具有多种对人体有益功能，综合分析，红枫湖水体优势真菌对水质未产生消极作用。

4 结论

红枫湖水体耙齿菌属真菌未对小鼠产生任何刺激反应，链格孢属，小光壳属，小球腔菌属引起小鼠免疫反应。4种优势真菌对小鼠无毒性刺激，对水质未产生消极作用。