尿液DACH2测定对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

杨伟娇　夏桃林　陶文　罗子寰　李辽源　何娅娣

【摘要】目的 探讨尿液Dachshund同源基因2（DACH2）测定对膀胱尿路上皮癌的诊断价值。方法 收集因可疑膀胱肿瘤需行经尿道膀胱病变切除术患者的尿液，采用放射免疫法检测尿液DACH2水平，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析尿液DACH2水平对膀胱尿路上皮癌的诊断效能。结果 共纳入72例患者，按照术后病理结果分为膀胱尿路上皮癌组（肿瘤组）49例、膀胱良性疾病（包括慢性膀胱炎和尿路上皮增生）组（良性组）23例。肿瘤组患者术前尿液DACH2水平高于良性组（P < 0.05）。肿瘤组中，高级别者术前尿液DACH2水平高于低级别者（P < 0.05）。尿液DACH2水平诊断膀胱尿路上皮癌的ROC曲线下面积为0.796，最佳临界值为4.05 ng/ml，此时的灵敏度和特异度分别为86.7%和83.4%。结论 尿液DACH2测定可作为早期诊断膀胱尿路上皮癌的肿瘤标志物。

【关键词】膀胱尿路上皮癌;诊断;肿瘤标志物;Dachshund同源基因2

【Abstract】Objective To evaluate the value of urine DACH2 in the diagnosis of bladder urothelial carcinoma. Methods The urine samples of patients with suspicious bladder lesions who required transurethral resection were collected. The urine DACH2 concentration of all patients was analyzed by radioimmunologic assay. The receiver operating characteristic （ROC） curve was generated to assess the diagnostic efficacy of urine DACH2 level for bladder urothelial carcinoma. Results According to the results of pathological examination， 72 patients were divided into the benign diseases including chronic cystitis and urothelial hyperplasia （benign group， n = 23） and bladder urothelial carcinoma groups （cancer group， n = 49）. The preoperative urine DACH2 level in the cancer group was significantly higher than that in the benign group （P < 0.01）. In the cancer group， the preoperative urine DACH2 level in patients with high-grade bladder urothelial carcinoma was remarkably higher compared with that in their counterparts with low-grade carcinoma （P < 0.05）. The area under the ROC curve of urine DACH2 levels was 0.796. The specificity was 86.7% and the specificity was 83.4% when the optimal cutoff value of urine DACH2 level for the diagnosis of bladder urothelial carcinoma was 4.05 ng/ml. Conclusion The urine DACH2 level can serve as a tumor marker for early diagnosis of bladder urothelial carcinoma.

【Key words】Bladder urothelial carcinoma;Diagnosis;Tumor marker;Dachshund homolog 2

膀胱癌是最常見的泌尿系统肿瘤，其中90%以上为尿路上皮癌。笔者团队前期研究已证实Dachshund同源基因2（DACH2）与膀胱尿路上皮癌的恶性生物学行为密切相关[1]。为进一步评价尿液DACH2检测在膀胱尿路上皮癌诊断中的临床价值，通过放射免疫方法分别检测了49例膀胱尿路上皮癌和23例膀胱良性疾病患者的尿液DACH2水平，并进行统计学分析，现报告如下。

材料与方法

一、标本来源

收集中山大学附属第三医院泌尿外科2015年6月至2016年12月间因可疑膀胱肿瘤需行经尿道膀胱病变切除术患者的尿液标本。符合下列条件之一予以排除：①入院前已行抗肿瘤治疗者;②复发膀胱肿瘤者。本研究经中山大学附属第三医院医学伦理委员会批准，患者在采集标本前均已签署知情同意书。

二、标本采集

检测对象均在术前24 h留取清洁中段尿1 ml，立即按1∶100加入60 g/L牛血清白蛋白溶液，调节pH值为7.40，15 min内分离上清，-20℃保存。

三、主要试剂和仪器

DACH2放射免疫试剂盒由中国原子能科学研究院同位素研究所研制。XH-6010 γ射线计数仪由西安仪器厂生产。

四、检测方法

首先将待测尿样0.1 ml分别加入0.1 ml抗体和0.1 ml标记抗原，混匀，37 ℃温育3 h，形成DACH2、抗原及抗体相结合的复合物，然后加0.5 ml分离剂15 min后，以3000转/分离心20 min，弃上清去除未结合的物质，最后加入化学发光底物。检测沉淀中的放射性计数60 s[2-3]。

五、统计学处理

采用SPSS 19.0分析数据。计量资料以表示，组间比较采用t检验。分析尿DACH2水平诊断膀胱尿路上皮癌的灵敏度、特异度，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算曲线下面积（AUC），使用GraphPad Prism 8.0绘制散点图。P < 0.05为差异有统计学意义。

结果

一、入组患者总体情况

共纳入72例患者，按照术后病理结果分为膀胱尿路上皮癌组（肿瘤组）49例、膀胱良性疾病（包括慢性膀胱炎和尿路上皮增生）组（良性组）23例。肿瘤组中，男32例、女17例，年龄44 ～ 73岁、中位年龄55岁，病理低级别（G1 ～ G2）31例、高级别（G3）18例。良性组中，男13例、女10例，年龄41 ～ 69岁、中位年龄50岁。2组患者的性别构成、年龄比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）。

二、肿瘤组和良性组患者的尿液DACH2水平比较

肿瘤组和良性组患者术前尿液DACH2水平分别为（7.42±1.23）、（2.03±0.51）ng/ml，肿瘤组患者术前尿液DACH2水平高于良性组（t = 11.080，P < 0.05），见图1A。肿瘤组49例中，高级别者术前尿液DACH2水平为（8.15±1.42）ng/ml，高于低级别者（5.48±1.07）ng/ml（t = 4.867，P < 0.05），见图1B。因本研究仅纳入2例肌层浸润性肿瘤，故未进一步行肿瘤分期间的比较。

三、尿液DACH2诊断膀胱尿路上皮癌的效能分析

尿液DACH2水平诊断膀胱尿路上皮癌的ROC AUC为0.796。在保持85%灵敏度时，尿液DACH2 的临界值为5.03 ng/ml，特异度为51.5%;在保持95%灵敏度时，尿液DACH2 水科的临界值为2.73 ng/ml，特异度为42.6%。在尿液DACH2诊断膀胱尿路上皮癌的 ROC曲线上，离灵敏度和特异度均为1.000交汇点最近的临界值为4.05 ng/ml，此时的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为0.867、0.834、0.638、0.751，同时兼顾到灵敏度和特异度，可作为尿液DACH2诊断膀胱尿路上皮癌最佳临界值，见图2。

讨论

膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤，发病率在世界范围内男性中居第4位、女性中居第8位。据报道，膀胱癌整个诊治过程中所耗费用超过其他肿瘤[4-6]。经膀胱镜及输尿管镜的组织病理学检查是诊断膀胱癌的金标准，但其存在费用高、患者不适及出血感染等缺点，尿脱落细胞检查也是膀胱尿路上皮癌的主要诊断手段之一，但其灵敏度较低[7]。因此，探索有效的膀胱癌诊断方法，尽早诊断、尽早治疗，对于提高疗效和减轻患者经济负担具有重要意义。

DACH2基因位于Xq21.3，目前，有关DACH与肿瘤的相关研究主要以DACH1为主[8-10]。目前DACH2与肿瘤的相关研究甚少[11-12]。笔者前期研究发现，膀胱肿瘤组织DACH2高表达与膀胱尿路上皮癌的恶性侵袭有关[1]。本研究显示，肿瘤组尿液DACH2水平高于后者，且尿液DACH2水平与肿瘤分级相關，肿瘤分级较高的患者，其尿液DACH2水平也较高。研究结果提示，测定尿液DACH2水平可作为一种早期诊断膀胱尿路上皮癌的方法。

本研究进一步以术后病理检查结果为金标准，分析尿液DACH2水平诊断的灵敏度和特异度，在选择病例时有效地避免偏倚是至关重要的。通过严格纳入标准最大限度地降低病例选择的偏倚。结合2组患者年龄及性别构成比较差异无统计学意义，说明2组病例间具有较好的可比性。通过ROC曲线分析尿液DACH2浓度的诊断效能，结果显示AUC为0.796，具有较好的诊断效能，且测定尿液DACH2简单易行，宜于临床推广使用。从尿液DACH2诊断膀胱尿路上皮癌的ROC曲线中可看出，当尿液DACH2诊断膀胱尿路上皮癌的临界值选取为4.05 ng/ml时，其诊断的灵敏度和特异度分别为86.7%和83.4%，诊断效能较高。因为本研究纳入的样本量较小，因此日后尚待更大样本量的研究进一步探究此临界值作为尿液DACH2诊断膀胱尿路上皮癌的可行性。

综上所述，尿液DACH2水平诊断膀胱尿路上皮癌具有一定意义。我们认为尿液DACH2检测简便易行，可考虑作为早期诊断膀胱尿路上皮癌的客观指标，具有进一步深入研究的价值。

参 考 文 献

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（收稿日期：2019-12-04）

（本文編辑：林燕薇）