病毒抗原检测在婴幼儿急性呼吸道感染的临床价值

刘惠敏，颜丽香，叶秋娟 (广东省河源市妇幼保健院，广东 河源 517000)

急性上呼吸道感染指的是鼻咽喉部位发生急性感染性炎性反应，以鼻炎、扁桃体炎及咽喉炎为主要临床表现，主要由病毒感染所致，长期发展还可发展为气管炎、支气管炎等下呼吸道感染，个别严重患者还可能继发心肌炎、肾炎等重症并发症[1]。婴幼儿由于呼吸系统及免疫系统发育尚不完善，抵抗力与免疫力比成人低，对病原微生物易感性高，尤其是呼吸系统感染。婴幼儿呼吸系统感染症状早期临床表现不显现，不能引起家长及临床医生注意，后期发展成重度感染，可对婴幼儿的生命造成不可低估的危害。然而病毒种类并不是一成不变，它是随着季节、环境变化不断衍变，这样就给临床诊断治疗带来极大的困难。因此本文将针对婴幼儿急性呼吸道感染病毒抗原诊断进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：1597例急性呼吸道感染病例，选取自2018年1月～2018年12月期间在我院治疗婴幼儿，患儿经诊断确诊病种包括新生儿肺炎、支气管肺炎、毛细支气管炎、急性支气管炎、喘息性支气管炎及急性上呼吸道感染[2]。对患有先天性心脏病患儿给予排除；并排除合并严重肝肾病患儿。本组患儿中男1 008例(63.1%)，女589例(36.9%)，年龄4天～5岁，平均年龄(16.43±1.08)个月，其中新生儿肺炎130例，支气管肺炎975例，毛细支气管炎61例，急性支气管炎239例，喘息性支气管炎117例，急性上呼吸道感染77例。

1.2方法

1.2.1试剂与仪器：BY-160A型离心机(北京白洋医疗器械有限公司)；DM500型荧光显微镜(德国LEICA公司)。七项呼吸道病毒检测试剂盒。

1.2.2样本采集及处理方法：采集患儿鼻咽分泌物，主要方法为使用鼻咽拭子采集分泌物将其放置在含有生理盐水的无菌收集管内，收集完成后立即送往实验室，实验室中心利用涡旋后使用移液器吹打成黏液，在对黏液进行离心，使用转速为2 000 r/min离心5 min，去除上清及沉淀部分，加入2 ml磷酸盐缓冲液洗涤，将两者混合均匀后离心，再将所得沉淀溶于0.5 ml PBS中，经过多次吹打形成细胞悬液即可[3]。

1.2.3免疫荧光法：分别吸取25 μl细胞悬液，将其滴入8孔板中，待通过干燥机干燥后再用丙酮固定，丙酮为预冷的100%丙酮，然后按照试剂盒说明书滴加TITC标记的荧光抗体，20 min后浓缩洗涤风干，最后封片。

1.3判定标准：将标本放置在倍数为200荧光显微镜下进行观察，如见苹果绿荧光则表明呼吸道病毒抗原为阳性细胞，如荧光为红色则表明呼吸道病毒抗原细胞为阴性；当见到大于等于2个完整细胞内有明亮的黄绿色荧光为阳性，否则为阴性。

2 结果

本组1 597例患儿中449例检测结果为阳性，病毒阳性总检出率为28.1%，各种病毒阳性检出率详见表1；对检测结果进行分析可知不同性别的患儿感染率对比，差异无统计学意义(P>0.05)；而不同年龄段病毒感染的检出率对比差异具有统计学意义(P<0.05)，0～1岁的儿童检出率最高，相对比其他两个年龄段，差异有统计学意义。见表2。

表1 本组患儿七项病毒感染阳性率检出情况

项目阳性例数占总例数百分比(%)占阳性病例百分比(%)Rsv呼吸道合胞病毒33521.074.6Adv腺病毒140.93.1Ifv-a流感病毒A型140.93.1ifv-b流感病毒B型110.72.4Piv-1副流感病毒1型150.93.3Piv-2副流感病毒2型70.41.6Piv-3副流感病毒3型533.311.8合计44928.1100

表2 两组患儿不同年龄段呼吸道病毒感染检出例数比较(例)

项目0～<1岁1～<3岁3～5岁例数1 159299139Ifv-a流感病毒A型941ifv-b流感病毒B型812Piv-1副流感病毒1型1311Piv-2副流感病毒2型601Piv-3副流感病毒3型4841Rsv呼吸道合胞病毒2616410Adv腺病毒734合计3527719

3 讨论

婴幼儿急性呼吸道感染多发生于患儿天气突变或机体免疫力低下时，相关研究指出[4]，很多儿童在一年中可能感冒三次以上，最高可达八次，可见急性呼吸道感染已成为婴幼儿时期的多发病，常见病。

病毒是诱发婴幼儿呼吸道感染的主要病原体，然而不同种类的病毒导致患儿感冒后的临床症状非常相似，而影像学检查表现缺乏特异性，因此病原学证据有着非常重要的作用。当前临床实验室常用的病毒检测方法为：免疫荧光法、酶联免疫法、PCR法、血凝试验及病毒分离培养法等。虽然病原体的分离培养被临床称为金标准，然而其培养时间过长，操作程序繁杂，技术要求高，且阳性检出率却不高等诸多缺点，因此并被临床医生所选择。荧光免疫技术是一项新技术，其有着操作简单、方便、快速的优势，同时能够检测出多种病毒特性，且特异性90%，敏感性95%，使得该法已发展成目前实验室常用的检测方法[5]。

本研究结果显示，对1 597例患儿采用免疫荧光法检，阳性总检出率为28.1%，七项呼吸道病毒中，呼吸道合胞病毒的检出率最高，共检出449例呈阳性患儿，有335例为呼吸道合胞病毒，占阳性病例的74.6%，与相关研究结论相符。同时，不同性别感染率对比发现差异无统计学意义(P>0.05)，而不同年龄段病例阳性病毒检出率对比差异有统计学意义(P<0.05)，其中0～1岁婴幼儿的检出率最高，与其他两个年龄段的数据对比，差异具有统计学意义(P<0.05)，这与婴幼儿呼吸系统及免疫系统随着年龄增长而提高相关。

综上所述，由于婴幼儿生理特点，特别是免疫功能的不完善因素，使得婴幼儿患有急性呼吸道感染的发生率较高；此外，临床上由于得不到及时正确的诊断治疗可导致了该疾病的致死率及致残率的提高，严重影响了婴幼儿的生命安全。因此，准确了解患儿感染病原体的检测方法已成为临床治疗中的重中之重，本文所选直接免疫荧光法具有快速性、便捷性、特异性等优势，及时诊断并进行早期抗病毒治疗，使婴幼儿得到及时救治，确保了婴幼儿生命安全。