不同炮制方法对玉竹成分的影响

周小祝 田强 石坤连

[摘要] 目的 考察不同炮制方法對玉竹成分的影响，为临床炮制品选用提供依据。 方法 以醇浸出物量、玉竹多糖、玉竹总皂苷为考察指标，对经过清蒸、蜜炙、酒蒸之后的3个批次玉竹炮制品与净玉竹进行比较分析。采用浸出物测定法测定醇浸出物量;采用苯酚-硫酸法测定玉竹多糖含量;采用香草醛-冰醋酸法测定玉竹总皂苷的含量。 结果 2个批次蜜炙品醇溶性浸出物与净玉竹比较升高，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;1个批次酒蒸品醇溶性浸出物与净玉竹比较降低，差异有统计学意义（P < 0.05）;3个批次清蒸品多糖含量与净玉竹比较升高，差异均有高度统计学意义（均P < 0.01）;1个批次蜜炙品多糖含量与净玉竹比较升高，差异有统计学意义（P < 0.05）;2个批次酒蒸品多糖含量与净玉竹比较下降，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）;3个批次清蒸品总皂苷含量与净玉竹比较升高，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;3个批次蜜炙品总皂苷含量与净玉竹比较升高，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;1个批次酒蒸品总皂苷含量与净玉竹比较升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 炮制方法对于玉竹成分的影响是复杂的，玉竹炮制后清蒸可以增加多糖含量，加热炮制可以增加总皂苷含量，注意炮制与其功效、临床炮制品的选用关联的关系。

[关键词] 玉竹;炮制方法;醇浸出物量;多糖;总皂苷

[中图分类号] R283.3          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）03（a）-0019-05

[Abstract] Objective To inspect the effect of different processing methods on the composition of Polygonatum odoratum（Mill.） Druce， and to provide experiment basis for the selecting of clinical processed products. Methods The alcohol extract amount， polysaccharide of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， total saponins of Polygonatum odoratums （Mill.）Druce were used as index. After steaming， honey broiling and wine steaming， three batches of processed products of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce and Polygonatum odoratums（Mill.） Druce were compared and analyzed. The extraction method was used to determine the amount of alcohol extract. Phenol-sulfuric acid method was used to determine the content of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce. Vanillin-glacial acetic acid method was used to determine the content of total saponins. Results The content of alcohol soluble extract of two batches of honey processed products was higher than that of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.05）.The content of alcohol soluble extract in one batch of wine steaming products was lower than that in Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， the difference was statistically significant （P < 0.05）. The content of polysaccharides in three batches of steamed food was higher than that in Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.01）. The content of polysaccharides in one batch of processed honey was higher than that in Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. The content of polysaccharide in the two batches of wine steaming products decreased than that of Polygonatum odoratums（Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （P < 0.05 or P < 0.01）. The total saponin content of three batches of steamed products was higher than that of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.05）. The content of total saponins in three batches of honey processed products was higher than that in Polygonatum odoratums （Mill.） Druce， and the difference was statistically significant （all P < 0.05）. The content of total saponins in one batch of wine and steam was higher than that of pure bamboo， and the difference was statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The effects of processing methods on the components of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce are complicated. Steaming after processing of Polygonatum odoratums （Mill.） Druce can increase the content of polysaccharides， and heating processing can increase the content of total saponins.

[Key words] Polygonatum odoratums（Mill.） Druce; Processing method; Alcohol extract amount; Polysaccharide; Total saponins

玉竹系百合科植物玉竹Polygonatum odoratums（Mill.） Druce的干燥根茎。具有养阴润肺，益胃生津等功效[1-2]。玉竹含有多糖、皂苷等化学成分。其中玉竹多糖和总皂苷含量最多，多糖含量通常为10%左右，总皂苷含量为3%左右[3-4]。相关研究显示，玉竹提取物有保护心脏、抗衰老等作用[4-8]。

玉竹常用的炮制品有净玉竹、炙玉竹、蒸玉竹、酒玉竹等[9-11]。净玉竹的炮制方法，《雷公炮炙论》记载“采得，先用竹刀刮上节皮了，洗净”。现行，取原药材，除去杂质、洗净、润透、切厚片、干燥。炙玉竹的炮制方法，《雷公炮炙论》记载“以蜜水浸一宿，蒸了，焙干用。”现行，取炼蜜置锅内，加适量开水稀释后，投入玉竹片，用文火拌炒均匀，不粘手为度，取出放凉。蒸玉竹的炮制方法，《太平圣惠方》记载“刮皮蒸曝干”。现行，取原药材，除去杂质，洗净，置容器内蒸至外黑内呈棕褐色，切段，干燥。酒玉竹的炮制方法，《本草备要》记载“竹刀刮去皮节，蜜水或酒浸蒸用。”现行，取净玉竹片加黄酒拌匀，闷润，置笼屉内蒸透，取出，摊晾。

中药的炮制与药物功效和药物成分关系密切，本研究结合传统炮制工艺和现代炮制工艺，采用清蒸、蜜炙、酒蒸三种炮制方法对玉竹进行炮制，得到清蒸玉竹、蜜炙玉竹、酒蒸玉竹炮制品，考察不同炮制工艺对玉竹浸出物、多糖、皂苷类成分的影响情况。

1 仪器与试药

1.1 仪器设备

Agilent UV-8454可见紫外分光光度仪（安捷伦科技有限公司）;eppendorf Centrifuge 5804R离心机（德国eppendorf公司）;BS-llOS电子天平（万分之一，德国Sartorius公司）;电子秤（百分之一，上海佑科公司）。

1.2 试药

葡萄糖（批号：130529，由广州市齐云生物科技有限公司提供，纯度>99%）;薯蓣皂苷元（批号：111539-200001，由中国食品药品检定研究院提供，纯度>98%）;其余苯酚、硫酸、石油醚、三氯甲烷、甲醇、冰醋酸、鹽酸、95%乙醇等均为分析纯，水为纯净水。

1.3 药材

玉竹3个批次[1606001，产地陕西，购自安国市聚药堂药业有限公司;180602，产地湖南，购自天方健（中国）药业有限公司;1606013，产地湖南，购自安国市聚药堂药业有限公司]，经南方医科大学中药鉴定教研室刘传明教授鉴定均为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum （Mill.） Druce的干燥根茎。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示。采用t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 方法与结果

2.1 玉竹的炮制

清蒸玉竹的炮制：分别取3个批次的净玉竹各100 g，照蒸制法[12]进行炮制。

蜜炙玉竹的炮制：分别取3个批次的净玉竹各100 g，照蜜炙法[12]进行炮制。

酒炙玉竹的炮制：分别取3个批次的净玉竹各100 g，照酒炙法[12]进行炮制。

2.2 炮制对玉竹成分的影响

2.2.1 炮制对醇溶性浸出物的影响

照《中华人民共和国药典》[1]（以下简称“《中国药典》”）2015版一部玉竹项下浸出物测定法要求，按醇溶性浸出物测定法（《中国药典》[12]2015版四部通则2201）项下的冷浸法测定，用70%乙醇作溶剂，依法测定计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。重复试验3次。见表1。

结果醇溶性浸物均符合药典规定。3批清蒸玉竹醇溶性浸出物与净玉竹比较，差异均无统计学意义（均P > 0.05）;2个批次蜜炙玉竹醇溶性浸出物高于净玉竹，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;1个批次酒蒸玉竹醇溶性浸出物低于净玉竹，差异有统计学意义（P < 0.05）。

2.2.2 炮制对玉竹多糖的影响

照《中国药典》[1]2015版一部玉竹项下含量测定及文献[13]中玉竹多糖测定方法分别测定各炮制品中玉竹多糖含量。

2.2.2.1 对照品溶液的制备  取无水葡萄糖对照品59.80 mg，精密称定，加水至100 mL，摇匀即得（制成每mL含无水葡萄糖约0.6 mg的溶液）。

2.2.2.2 供试品溶液的制备  分别取各炮制品粗粉约2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水100 mL，加热回流1 h，用脱脂棉滤过，如上重复提取1次，两次滤液合并，浓缩至适量，转移至100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.2.2.3 标准曲线制备  精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2.0 mL，置具塞试管中，分别加5%苯酚溶液1 mL，混匀，迅速加入硫酸7.0 mL，摇匀，于40℃水浴中保温30 min，取出，置冰水浴中5 min，取出，以相应试剂为空白，照《中国药典》[12]2015版四部通则0401紫外-可见分光光度法，在488 nm的波长处测定吸光度，以吸光度A值为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y = 11.218X+0.0404，R2 = 0.9981，结果浓度在0.011 96～0.071 76 g/L之间线性关系良好。

2.2.2.4 玉竹各炮制品多糖含量测定  精密量取各供试品溶液2 mL，加乙醇10 mL，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置50 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL，照“2.2.2.3”项下的方法，自“加5%苯酚溶液1 mL”起，依法测定吸光度，计算，重复试验3次，多糖含量结果见表2。

3个批次清蒸玉竹多糖含量与净玉竹比较，明显升高，差异均有高度统计学意义（均P < 0.01）;1个批次蜜炙玉竹多糖含量与净玉竹比较，明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）;2个批次酒蒸玉竹多糖含量与净玉竹比较，明显下降，差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。见表2。

2.2.3 炮制对玉竹总皂苷的影响

参考有关文献总皂苷测定方法[14-16]，对各炮制品中玉竹总皂苷含量进行测定。

2.2.3.1 对照品溶液的制备  精确称取薯蓣皂苷元5.83 mg，用少量甲醇溶解，然后用甲醇定容到50 mL，摇匀即得（制成每mL含薯蓣皂苷元约0.1 mg的溶液）。

2.2.3.2 供试品溶液的制备  分别取各炮制品粗粉约1 g，精密称定，罝烧瓶中，加一定量80%乙醇，浸泡30 min，按一定条件（温度60℃、料液比60、时间30 min）超声2次，合并滤液，回收乙醇至干，加入3 mol/L盐酸溶液25 mL使溶解，定量转移至烧瓶中，加热回流水解1 h，放冷，用石油醚（60～90℃）萃取5次，每次15 mL，合并石油醚液，水洗至中性，回收石油醚至干，加三氯甲烷适量溶解，定量转移至25 mL量瓶中，三氯甲烷定容至刻度，摇匀，得玉竹总皂苷元供试品溶液。

2.2.3.3 检测波长的选择  吸取2 mL对照品溶液和供试品溶液于具塞试管中，挥干溶剂，分别加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，摇匀，密塞，置70℃恒温水浴显色15 min，取出后立即以冰水冷却5 min，加冰醋酸10.0 mL，摇匀，在400～600 nm 波长范围内扫描，结果在波长为533 nm处有最大吸收峰。见图2。

1：样品紫外吸收图谱;2：薯蓣皂苷元对照品紫外吸收图谱

2.2.3.4 标准曲线的制备  分別准确吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL于磨口具塞试管中，水浴挥发溶剂，按“2.2.3.3”项下方法显色，于533 nm波长处测定其吸光度。以吸光度A值为纵坐标，标准品溶液的浓度C为横坐标，绘制标准曲线并建立线性回归方程，结果为Y = 11.65X-0.1054，R2 = 0.9994。

2.2.3.5 加样回收试验  取1606013批次玉竹蜜炙品约1.0 g，精密称定，加入对照品薯蓣皂苷元约5.163 mg，按“2.2.3.2”项下方法同时制备供试品溶液，依法测定计算加样回收率，重复试验6次。该方法回收率良好，回收率在90%～108%之间，平均回收率为98.66%，RSD值为2.09%。

2.2.3.6 精密度、重复性、稳定性试验  分别在6个不同日期取1606013玉竹蜜炙品约1.0 g，精密称定，进行精密度实验;取1606013玉竹蜜炙品约1.0 g，精密称定，重复测定6次，进行重复性试验;同时取一份1606013玉竹分别在0、20、40、60、80 min测定其吸光度，进行稳定性试验。按“2.2.3.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，结果精密度RSD值为1.26%，重复性RSD值为1.84%，仪器精密度、方法重复性良好;供试品溶液在80 min内稳定性良好，RSD值为1.23%。

2.2.3.7 总皂苷含量测定  取各批次玉竹炮制品约1.0 g，精密称定，按按“2.2.3.2”项下方法制备供试品溶液，依法显色测定吸光度，按标准曲线计算总皂苷含量，重复试验3次。见表3。

3个批次清蒸玉竹总皂苷含量与净玉竹比较，均明显升高，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;3个批次蜜炙玉竹总皂苷含量与净玉竹比较，均明显升高，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;1个批次酒蒸玉竹总皂苷含量与净玉竹比较，均明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。

3 讨论

玉竹炮制对醇溶性浸出物量影响结果原因可能是加入适量蜜而导致浸出物量有所升高;而酒蒸可能是加入酒后蒸制，包括挥发性成分等成分随酒蒸馏而散失[17]。玉竹炮制对玉竹多糖影响可能是蜜炙短时间加热对多糖有一定的破坏作用，导致多糖含量有下降趋势;酒蒸可能是加入酒后蒸制，一方面因酒的作用使多糖過分分解，另一方面可能操作过程中随酒液流失;而清蒸可能使玉竹苷类成分分解出多糖，使玉竹多糖含量增加[18-19]。玉竹炮制对玉竹总皂苷影响分析原因可能清蒸、蜜炙、酒蒸等加热炮制方法可以使总皂苷分解或者是从细胞组织间释放出来，从而使总皂苷含量增加[20]。

炮制方法对于玉竹成分的影响同时也是复杂的，玉竹糖类成分除了多糖，同时还有大量的简单糖类成分，而简单糖类成分跟多糖之间，可能存在相互转化的情况，比如蒸制过度可能导致多糖分解，或者加辅料蒸制，可能加速多糖分解为简单糖类。因此炮制方法对于玉竹成分的影响可以进一步进行深入的研究，可以进一步研究多糖和简单糖类，多糖和皂苷之间的相互关联问题。同时可以联系玉竹的功效做进一步的研究，炮制方法对于玉竹成分的影响跟其功效相关，涉及到临床炮制品的选用。玉竹多糖跟玉竹养阴生精的功效相关，跟抗衰老、降血糖、抗氧化、增强免疫等有关，而皂苷跟玉竹润肺、益胃等功效相关。在玉竹加工炮制和临床使用过程中，仍需考虑不同炮制方法对药材功效的影响，做到更加合理地用药[21-22]。

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