一份牛场布病抗体效价的检测报告

白 翠，胡泽宇，王 楠，郑 聪，李海燕，刁鹏翔，张夏萍

1.吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春 130062；2. 吉林市龙潭区江北乡畜牧兽医站，吉林吉林市 132000；3.吉林省通化市二道江区畜牧兽医总站，吉林通化 134000；4.吉林市昌邑区两家子乡畜牧兽医站，吉林吉林市 132000

笔者通过某牛场送检的16头份牛的血清样品，共计32 份血清（其中16 份为2020 年3 月3 日采集、16 份为2020 年4 月2 日采集）进行了试管凝集检测。具体方法及结果如下。

1 试管凝集试验

1.1 试验前的准备

1.1.1 样品稀释液首先配制0.9%生理盐水，然后加入0.5%的石炭酸，高压灭菌后备用。

1.1.2 准备试管

将准备好的一次性试管放入试管架中并编号。除了样品管还要准备5 支比浊管。

1.1.3 标准抗原

本实验室使用的抗原厂商是北京爱德士公司，生产批号为421。

1.1.4 被检血清

送检的32 份牛血清。

2 试验操作过程

2.1 稀释被检血清

2.1.1 确定稀释倍数

牛、马、骆驼稀释用1:50，1:100，1:200，1:400(4 个稀释度)；猪、山羊、绵羊和狗用1:25，1:50，1:100，1:200(4 个稀释度)。大规模检疫时也可用2 个稀释度，即牛、马、骆驼用1:50，1:100，猪、山羊、绵羊和狗用1:25，1:50， 由于本次试验检测的畜种为牛，所以我们进行了1:50，1：100，1:200，1:400 这4 个稀释倍数。

2.1.2 稀释血清

2.1.2.1 每份被检血清用4 支试管，标记编号。第I 管加1.2 mL 稀释液，第2 ～4 管各加人0.5 mL稀释液。

2.1.2.2 取被检血清0.05 mL，加入第1 管，充分混匀后弃去0.25 mL。

2.1.2.3 从第1 管中吸取0.5 mL 加人到第2 管，混合均匀后，再从第2 管吸取0.5 mL 至第3 管，加入此配比稀释液至第4 管，从第4 管弃去0.5 mL，稀释完毕。

2.1.2.4 此时，从第1 ～4 管的血清稀释度分别为1:25，1:50，1:100，1:200。

2.2 加入抗原

将 0.5 mL 抗原(1:20) 加入已稀释好的各血清样品管中，此时的血清稀释度变为1:50，1:100，1:200，1:400。

2.3 比浊管的配置

每次试验均要设置比浊管，用于最好结果的判断。比浊管为5 管，分别编号1，2，3，4，5。

试管1 中加入1 mL 0.5%的石炭酸生理盐水。

试管2 中加入0.25 mL 1:40 倍稀释好的抗原，再加入0.75 mL 0.5%的石炭酸生理盐水。

试管3 中加入0.5 mL 1:40 倍稀释好的抗原，再加入0.5 mL 0.5%的石炭酸生理盐水。

试管4 中加入0.75 mL 1:40 倍稀释好的抗原，再加入0.25 mL 0.5%的石炭酸生理盐水。

试管5 中加入1 mL 1:40 倍稀释好的抗原。

将所有试管充分混匀后，置于37 ℃温箱中反应22 ～24 h，然后取出记录结果。

3 判定标准

3.1 菌体完全凝集，100%下沉，上层液体100%清亮。我们用“++++”表示。

3.2 菌体几乎完全凝集，上层液体75%清亮。我们用“+++”表示。

3.3 菌体凝集显著，液体50%清亮。我们用“++”表示。

3.4 凝集物有沉淀，液体25%清亮。我们用“+”表示。

3.5 凝集物无沉淀，液体均匀混浊。为阴性“-”。

3.6 牛、马、鹿和骆驼1:100 血清稀释，猪、山羊、绵羊和狗1:50 血清稀释，出现“++”以上凝集现象时，受检血清判定为阳性。

3.7 牛、马、鹿、骆驼1:50 血清稀释，猪、山羊、绵羊、狗1:25 血清稀释，出现“++”以上凝集现象时，受检血清判定为可疑反应；可疑反应家畜经3 ～4周后重检，如果仍为可疑，该牛、羊判为阳性。

4 结果判定

本实验为32 份血清，分别编号1 ～32，其中1 ～16 为第一次采集样品，17 ～32 位一个月后相同牛的再次采集样本。

结果显示1，6，12，13，16 样本牛为强阳性（++++），一个月后的抗体效价仍为强阳性。2、8、10、11、14、15 号样本为阴性，一个月后的抗体效价仍为阴性。

3 号在1:200 的时候由++++变为+++，而一个月后的效价在相同稀释倍数时变为+。

4 号在1:200 的时候为+，一个月后的效价为阴性。

5 号1:200 为+++，一个月后为++。

7 号1:200 为++，一个月后为阴性。

9 号由+变为-。

从实验结果来看，效价变化并不明显。据送检样品厂主口述，该厂于2019 年8 月引进该批次牛，进场后没有进行布病疫苗免疫，那么就有可能是自然感染。2020 年年初有8 头牛有流产的症状。从16 份样本的结果来看，强阳性的那6 头可能是8头发病牛中的一员。